靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR^(262-328)的构建及免疫原性分析

目的构建靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR262-328并分析其免疫原性。方法采用重叠延伸PCR来扩增P64k-EGFR262-328融合基因,克隆至pMD18-T,经测序鉴定后与pET-21b构建重组表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。目的蛋白经IPTG诱导表达后用Source Q阴离子层析和Ni-NTA亲和层析纯化,纯化的融合蛋白乳化后免疫BALB/c小鼠分析其免疫原性。结果获得了2 031 bp的融合基因,IPTG诱导后获得了相对分子质量(Mr)70 000大小的目的蛋白,经两步柱层析后,融合蛋白达到了95%以上的纯度,并在小鼠体内产生了高达1∶16 000以上的抗体滴度。结论成功制备了肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR262-328。

EGFR二聚化B细胞表位抗原肽基因克隆、表达与纯化

目的利用基因工程手段建立表皮生长因子受体(EGFR)二聚化B细胞表位抗原肽MVF-ER的高效制备方法。方法采用重叠延伸PCR扩增MVF-ER后克隆于表达载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,产物采用肠激酶酶切和镍离子螯合亲和层析法纯化。结果通过10对引物5步重叠延伸得到273 bp的扩增产物,目的基因与硫氧环蛋白(Trx)融合后可高效表达,经酶切和层析后得到纯度为95%的抗原肽。结论成功建立抗原肽"MVF-ER"的高效制备方法,为进一步研究EGFR过表达恶性肿瘤的治疗性疫苗打下了坚实基础。

头孢哌酮/舒巴坦敏感鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因研究

目的了解十堰地区鲍氏不动杆菌的β-内酰胺酶基因存在状况,揭示多药耐药鲍氏不动杆菌的耐药机制。方法回顾性分析2009年鲍氏不动杆菌的耐药率,PCR检测20株头孢哌酮/舒巴坦敏感鲍氏不动杆菌的β-内酰胺酶基因。结果 2009年分离到鲍氏不动杆菌205株,除头孢哌酮/舒巴坦的耐药率在18.0%,黏菌素全部敏感之外,对其他抗菌药物的耐药率均约90.0%;20株头孢哌酮/舒巴坦敏感鲍氏不动杆菌通过PCR检出blaTEM、blaPER、blaVEB、blaCARB、blaGIM、blaDHA;未检出blaSHV、blaOXA、blaGES、blaSPM、blaVIM、blaIMP、oprD2基因。结论目前分离株对黏菌素全部敏感,对头孢哌酮/舒巴坦的敏感性相对较高,对其他抗菌药物的敏感性较低,多药耐药鲍氏不动杆菌携带多种β-内酰胺酶基因,临床应根据药敏结果合理使用抗菌药物。