生物化学实验改革的实践

实验教学在医药院校培养高级人才中具有非常重要的作用。为培养学生的综合能力和创新意识 ,深化课程体系改革 ,优化生物化学实验的教学内容 ,我们充分利用实验室现有的仪器设备 ,开设跨学科的综合性实验 ,激发了学生的学习兴趣 ,强化了综合技能的培养 ,取得了良好的效果。

猪脑水解液的制备及其生物学活性研究

研究了猪脑水解液的制备及其生物学作用。结果表明:猪脑水解液含有17种氨基酸,其中包括8种必需氨基酸,总氨基酸含量为10493.9mg/L。实验组小鼠服用本品6天后,避暗试验和跳台试验的错误率明显下降(P<0.01),实验组大鼠服用28天后其脑重和雌性大鼠实验组血红蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),雌性实验组大鼠在游泳30min后,血乳酸含量明显低于对照组(P<0.05)。提示猪脑水解液不但对脑营养价值高。

水蒸汽提取与超临界萃取丁香化学成分的研究

目的:研究CO2超临界萃取技术(SFE)用于丁香油提取的可行性。方法:利用气-质分析比较了丁香超临界提取物及水蒸汽蒸馏丁香油的化学组成,并建立了其药效主要成分丁香酚气相色谱含量测定方法。结果:2种方法获得的丁香油主要成分组成基本一致,但SFE获得的丁香油及其中丁香酚的收率均提高了1倍以上。结论:SFE可以取代水蒸汽蒸馏技术用于丁香油的提取。

大豆异黄酮活性组分对阿尔茨海默病小鼠抗氧化作用的研究

目的:探讨大豆异黄酮活性组分对阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)小鼠的抗氧化作用。方法:取10月龄的小鼠,以D-半乳糖和三氯化铝复制AD模型小鼠,用本实验室制备的大豆异黄酮活性组分灌胃15d后,眼球取血,测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量,观察脑内海马组织切片神经元细胞的形态改变。结果:与模型组小鼠相比,实验组小鼠血清SOD活力显著提高(P<0.01)、血清LDH含量显著升高(P<0.05)、血清MDA含量明显降低(P<0.01),海马区神经元细胞数量也显著增多,形态改善。结论:异黄酮活性组分能有效地改善衰老AD小鼠的抗氧化系统的功能。

大豆异黄酮活性组分对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤的影响

目的:探讨大豆异黄酮活性组分对H2 O2 诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:以H2 O2 损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,采用光学显微镜观察细胞形态,MTT法判断细胞的存活率,LDH法检测细胞的损伤程度。结果:不同浓度大豆异黄酮能明显改善H2 O2 导致的细胞甲瓒减少,大豆异黄酮处理组细胞存活率明显高于H2 O2 处理组(P <0 .0 1) ;而LDH漏出率则明显低于H2 O2 处理组(P <0 .0 5 )。结论:大豆异黄酮活性组分对H2 O2 诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。

灵芝多糖对高血脂大鼠血脂水平的影响

目的探讨灵芝多糖对高血脂大鼠血脂的调节作用。方法采用高脂饲料喂养建立高血脂大鼠模型,以高、中、低三个剂量灵芝多糖灌胃,分别于第14天和28天检测大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和低密度脂脂蛋白胆固醇(LDL-c)等指标。结果不同剂量的灵芝多糖均可显著性抑制高血脂大鼠血清TC、TG和LDL-c的升高(P<0.01),并能调节HDL-c的升高(P<0.05)。结论灵芝多糖有较显著的调节血脂的作用。

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。

超声强化法提取海藻油的研究

对超声强化技术提取海藻油的工艺进行研究。探讨了提取溶剂用量、提取温度、提取时间、超声作用方式、超声功率和频率对超声提取海藻油(以EPA为指标)的影响。优选出适宜的工艺条件,为工业化生产以及超声波强化技术的推广.应用提供理论依据。

Rh123、FDA荧光法测定超声作用对大肠杆菌细胞膜的影响

目的研究大肠杆细胞经超声处理后细胞膜通透性和细胞膜电位的变化。方法应用二乙酸荧光素(FDA)、罗丹明123(Rh123)染色,通过荧光分光光度计检测FDA、Rh123荧光强度的变化,观察大肠杆菌细胞经25 kHz、300 W超声处理后细胞膜通透性和细胞膜电位的变化。结果大肠杆菌细胞经25 kHz 300W超声处理,随处理时间延长,FDA、Rh123都降低。在90 s内,超声处理对细胞存活率影响不明显,膜电位降低26.7%,膜通透性增加33.3%。结论大肠杆菌经一定超声处理后膜通透性增加,膜电位降低。

芹黄素对老年痴呆小鼠学习记忆能力的影响

目的研究芹黄素对老年痴呆(AD)小鼠学习和记忆能力的改善作用。方法取10个月龄的小鼠,以D半乳糖和AlCl3复制老年痴呆动物模型,建模成功的AD小鼠用不同浓度的芹黄素腹腔注射,利用Y型迷宫进行被动回避反应实验和信号方位辨别反应实验,测试小鼠学习记忆能力及信号方位辨别能力改变。结果腹腔注射芹黄素的小鼠学习能力和记忆保持率均显著优于模型对照组(P<0.01)。结论芹黄素能有效改善老年痴呆症小鼠的学习和记忆能力。

辛夷超临界CO_2提取物的GC/MS分析

目的:采用GC/MS技术对辛夷的超临界CO_2(SFE)及常规水蒸气蒸馏提取物进行分析。主要结果:两种提取工艺所得提取物的组分不尽相同,而SFE法较常规水蒸气蒸馏法所需提取时间少1倍,提取率则高2～3倍。结论:超临界CO_2提取法可以取代水蒸气蒸馏法用于工业生产。

抗加特纳杆菌卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究

目的观察鸡卵黄中抗加特纳杆菌抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法用阴道加特纳杆菌作为抗原免疫Leghorn鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量 ,SDS -PAGE电泳检测抗体纯度。Westernblot免疫印迹法测定该抗体来源。ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量 12 .8mg/mL蛋黄液 ,抗体纯度达 95 %。免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。IgY具有良好的热稳定性 ,对酸碱具有一定的耐受力。结论WD水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY 。

利用RAPD标记分析番茄杂种遗传纯度

本研究用350条10碱基的随机引物对番茄优良一代杂交品种毛粉808、毛粉818和强选1号进行了RAPD分析,筛选出6个可用于鉴定这3个杂种遗传纯度的RAPD标记:S16950、S1019400、S1072683、S14221270、S1388800和S1503750。另外,筛选出8个母本特异的RAPD标记:S66740、S66780、S169570、S178570、S5051700、S13161057、S1388952和S1458650;其中标记S66740和S13161057可以将西北地区种植的5个主要番茄品种分为两组,毛粉808、毛粉818和毛粉802为一组,西粉3号和强选1号为另一组,这些标记可用于部分番茄品种的鉴定。并克隆了S1072683、S1388952和S13161057这3个RAPD标记。

博莱霉素切割DNA反应的定量测定及其影响因素

用硫代巴比妥酸反应分析了博莱霉素 Ａ５ （ Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ ）对 Ｄ Ｎ Ａ 的断裂作用在 Ｆｅ２＋ 和 Ｏ２存在下， Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５能导致 Ｄ Ｎ Ａ 链断裂研究了一些因素对 Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ 催化 Ｄ Ｎ Ａ 断链反应的影响，设计并建立了 Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ 切割 Ｄ Ｎ Ａ 反应的定量测定方法，并测得 Ｋｍ 约为１５３ μｍ ｏｌ· Ｌ－ １， Ｖｍ ａｘ 约为００４６ Ａ５３２ｎｍ Ｕｎｉｔ·ｓ－ １

Fura-2/AM荧光探针法用于大肠杆菌胞内游离钙的测定

目的探讨经超声处理后大肠杆菌胞内游离钙的变化。方法超声波作用影响大肠杆菌,用Fura-2/AM探针法测定胞内游离钙的变化。结果经超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高,打开了钙依赖性的离子通道,膜两侧离子交流加速,膜通透性增加。结论Fura-2/AM荧光探针法可用于微生物大肠杆菌胞内游离钙的测定。经一定条件下超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高。

反义核酸的研究及其应用

对反义核酸的概念、作用机制及反义核酸类药物必需符合的条件等有关分子生物学研究进展进行了综述。介绍了几种人工合成的反义核酸及其应用前景 ,并就研究中需要解决的问题做了探讨。

正交试验法研究金丝桃素提取工艺

目的:优选金丝桃素的最佳提取工艺。方法:采用正交试验法,以提取物中总金丝桃素含量为考察指标,对影响金丝桃素 提取工艺的因素进行了研究。结果:实验设计四个因素中溶剂用量影响最大,重复试验结果满意。结论:优选出金丝桃素提取工艺 为用贯叶连翘量4倍的甲醇在40℃下浸提3次,每次12 h。

Monascus ruber 5031洛伐他汀合成酶基因的PCR分析

目的分析Monascus ruber5031洛伐他汀合成酶基因的结构。方法用3对以土曲霉洛伐他汀合成酶基因为基础设计的PCR引物对红曲霉基因组进行了PCR分析,其中一对引物序列为,正向:5’TTC GAT GCG GCC TTC TTC AAT3’和反向5’ATG GTT CGG CATCGT AAT TCC 3’。结果在红曲霉基因组中相当于土曲霉洛伐他汀合成酶基因的LNKS区域扩增出了745 bp的核酸片段,其序列与土曲霉合成酶的这一区域序列相同。结论土曲霉和红曲霉洛伐他汀合成酶基因存在同源区域。