解读百年诺贝尔生理与医学奖 提高药理学课堂教学效果

药理学知识很多来源于一百多年来的诺贝尔生理与医学奖的获奖成果，在课堂上相关章节的讲授中详细解读诺贝尔生理与医学奖，可以加深对药理学知识的理解，激发学生学习兴趣，提高药理学课堂教学效果，同时还能很好地培养学生的科学创新精神。对药学类学生药理学的教学尤其值得推荐。

常用药物及蔬果对CYP450各亚型活性的影响

细胞色素P450氧化酶系是药物代谢的主要酶系,它可被日常饮食及各种药物诱导或抑制,从而产生意想不到的药物相互作用,甚至引起毒副反应。因此,本文对近年来国内外有关文献,进行分析整理、归纳综述,阐明植物、化学物和瓜果蔬菜对细胞色素P450的作用及其调节机制,特别要注意那些与药物相关的主要代谢酶的抑制剂或诱导剂的合用情况,及时地合理调整剂量,避免按经验用药带来的盲目性,有助于真正实现临床用药的合理化和个体化。

毛茛总苷对肾性高血压大鼠血压、NO、AngⅡ及A7r5细胞内钙的影响

目的:探讨毛茛总苷对肾性高血压大鼠的血压、血清一氧化氮(NO)、血浆和心肾组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)以及血管平滑肌细胞内钙的影响。方法:采用二肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠模型,连续灌胃给药5 w,5w末测定血压,检测血清中一氧化氮、血浆和心、肾组织中AngⅡ含量;采用新一代Ca2+荧光探针Fluo-3/AM标记培养的血管平滑肌细胞内钙,荧光倒置显微镜观察荧光成像和荧光分光光度计测量细胞内钙荧光强度,观察毛茛总苷对大鼠血管平滑肌细胞内Ca2+水平的影响。结果:毛茛总苷高、中剂量能降低肾性高血压大鼠血压水平(P<0.05),其各剂量均能显著的升高大鼠血清中NO含量(P<0.01),但对大鼠体内的AngⅡ含量无显著影响;毛茛总苷各剂量均能降低由AngⅡ引起的细胞内钙离子浓度升高。结论:毛茛总苷能降低肾性高血压大鼠的血压,其降压作用可能与其能显著的升高大鼠NO水平及拮抗AngⅡ引起的血管平滑肌细胞内钙升高有关。

利用肺癌特异性结合多肽ZS-6筛选肺癌相关标志物

目的利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-6从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法以生物素标记的十二肽ZS-6为探针,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过四轮减性筛选后,挑取与ZS-6特异性结合的噬菌体单克隆、扩增、纯化,再通过PCR技术扩增、产物纯化后,进行DNA测序,测序结果经过生物信息学分析。结果筛选出18个与ZS-6特异性结合的噬菌体克隆,测序结果显示其中1个为未知功能的新基因,其余的均已确定为肿瘤相关基因。结论从人类肺癌cDNA噬菌体展示文库中筛选出潜在的肺癌肿瘤标志物,为肺癌的早期诊治奠定基础。

YZ-2蛋白的生物信息学分析及其多克隆抗体制备

目的:生物信息学分析与脑缺氧密切相关的新蛋白质YZ-2,以及制备其多克隆抗体。方法:根据生物信息学分析预测出YZ-2蛋白质的二级结构、亲水性、抗原性等理化特性,以这些分析预测为依据,经过同源性检索后设计出一段由22个氨基酸组成的多肽,免疫家兔得到多克隆抗体,并用ELISA、Westernblot等方法鉴定其特异性和滴度。结果:①成功分析预测其抗原性和亲水性;②制备了抗YZ-2蛋白多克隆抗体;③以此多克隆抗体经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹,检测YZ-2蛋白的表达,证实此抗体效价较高、特异性强。结论:利用生物信息学较好地预测出YZ-2的亲水性和抗原性,并成功制备了其较高特异性的多克隆抗体。

利用体内噬菌体展示技术筛选及鉴定肺癌特异性结合肽

目的利用体内噬菌体展示技术筛选并鉴定与肺癌特异性结合的多肽。方法用肺癌细胞A549接种裸鼠复制荷瘤动物模型,将随机肽库尾静脉注入裸鼠体内,循环15 min后取肿瘤组织中结合的噬菌体,如此进行3轮体内筛选后挑取噬菌体克隆,ELISA初步鉴定噬菌体克隆对肺癌细胞的亲和力、特异性。将阳性噬菌体克隆扩增、测序获得外源多肽氨基酸序列,化学方法合成多肽,鉴定多肽对肺癌细胞和组织的亲和力、特异性。结果ELISA结果显示,随机挑选的20个噬菌体单克隆中,1个对A549具有很强亲和力。测序获得多肽,命名为zp2。化学合成多肽zp2。竞争抑制、细胞免疫荧光和组织免疫荧光实验结果表明多肽zp2与肺癌细胞A549及肺癌组织特异性结合。结论利用体内噬菌体展示技术筛选出与肺癌细胞A549特异性结合的多肽,为肺癌诊断及治疗药物的研制奠定基础。

乙酰肝素酶基因过表达对小鼠肝癌细胞血道及淋巴道转移的影响

目的利用小鼠乙酰肝素酶pcDNA3.1(+)表达载体转染高转移潜能肝癌细胞株(Hca-F)和低转移潜能肝癌细胞株(Hca-P),研究其对小鼠肝癌细胞血道及淋巴道转移的影响。方法构建pcDNA3.1(+)-hpa质粒,以lipofectamine2000作为转染试剂,将其分别转至Hca-F、Hca-P细胞株。转染空载体的肝癌细胞作为对照。血道转移实验:小鼠尾静脉注射肿瘤细胞,30d后观察小鼠的肺部转移瘤生长情况。淋巴道转移实验:在小鼠右下肢爪垫内侧皮下注射肿瘤细胞,30d后观察荷瘤鼠腋窝淋巴结或/和腹股沟淋巴结转移情况。结果尾静脉注射转染有pcDNA3.1(+)-hpa质粒的高转移Hca-F和低转移Hca-P株,荷瘤小鼠的肺表面转移结节数分别为(37.5±2.63)个和(32.6±2.91)个,显著高于其各自空白对照组的(31.3±2.79)个和(14.2±2.38)个(P<0.05)。皮下注射转染有pcDNA3.1(+)-hpa质粒的高转移Hca-F和低转移Hca-P株,荷瘤小鼠淋巴结转移率分别为93.3%和83.3%,显著高于各自空白对照组(P<0.05)。结论乙酰肝素酶基因过表达对小鼠肝癌细胞血道及淋巴道转移均有一定的促进作用。

利用RNAi沉默KIAA0280后对缺氧诱导大鼠神经元凋亡的影响

目的利用RNA干扰（RNAi）技术，观察脑缺血相关新蛋白KIAA0280被特异性沉默后对正常神经元和缺氧诱导神经元凋亡的影响。方法取新生大鼠培养至5-7d的神经元，经由密闭容器引起缺氧诱导神经元凋亡模型。采用RNAi技术封闭KIAA0280的表达，观察该基因被封闭后对正常神经元的生长以及缺氧诱导神经元凋亡的作用和影响。结果脂质体转染KIAA0280基因特异性siRNA 12、24h后对正常细胞生长具有一定的影响；在此基础上缺氧4、8h，发现RNAi组的神经元对缺氧诱导的神经元凋亡比对照组对缺氧更加敏感，更易受损伤。结论KIAA0280对正常神经元具有一定的作用，并且对缺氧诱导凋亡神经元具有一定的保护作用。

体外肝代谢系统的研究与应用

肝药酶在药物代谢中具有十分重要的作用。对肝药酶的研究方法中,以动物肝脏或肝细胞为基础,构建体外肝代谢系统是体外代谢研究中最重要的环节之一。对体外肝代谢的研究,主要是利用肝微粒体、基因重组CYP450酶系、肝细胞培养、肝组织切片及离体肝灌流系统等方法。本文综述近年国内外所应用的不同体外肝代谢系统,并对各体外代谢研究方法进行比较,指出根据各系统的特性、不同的实验要求和目的,选择适当的研究方法的重要性。

血清肝癌特异性结合多肽的筛选

目的从噬菌体展示肽库中筛选出能够用于血清学筛查的多肽。方法利用M13噬菌体随机展示肽库，对15例临床确诊肝癌患者的血清和15例正常体检者的血清进行4轮吸附-洗脱筛选。挑取筛选后的噬菌体单克隆，用血清试验筛选特异性及阳性率较高的单克隆。目标单克隆通过DNA测序确定其表达的多肽序列，进而人工合成带FITC标记的多肽，再对血清进行鉴定。结果随机挑取的50个经过4轮筛选的噬菌体单克隆。通过血清试验，从中筛选出9个特异性和确诊率较高的单克隆，其中单克隆ZH-3对肝癌血清确诊率达到46．7％。ZH-3经DNA测序分析，确定其表达的多肽序列为：SAHGTSTGVPWP。结论ZH-3多肽在肝癌患者血清中有一定的检出率，提示ZH-3多肽能够为研发肝癌诊断试剂奠定基础。