Genistein调节肝癌HepG2细胞Caspase3蛋白表达诱导凋亡的作用研究

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)和Caspase3蛋白表达变化在genistein诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72h为对照组,实验各组以60μmol/L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Westernblotting分析细胞Caspase3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Genistein作用于肝癌HepG2细胞12、24、48、72h,各时相IP3含量显著低于对照组[(12.0±1.4)pmol/106cells、(7.5±0.8)pmol/106cells、(5.6±0.5)pmol/106 cells、(4.3±0.6)pmol/106 cellsvs(29.2±0.6)pmol/106 cells,P<0.01];24h后Caspase3蛋白的RI显著高于对照组(2.7±0.2,7.4±0.5,7.4±0.5,30.7±1.6vs0.24±0.06,P<0.05);24h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组[(2.7±0.2)%、(7.4±0.5)%、(20.5±2.0)%、(30.7±1.6)%vs(2.6±0.1)%,P<0.01]。结论Genistein能减少IP3生成,上调Caspase3蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡。

Quercetin调节肝癌HepG2细胞Fas表达诱导细胞凋亡

目的:探讨三磷酸肌醇(IP3)和Fas基因表达变化在quercetin诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法:以肝癌HepG2细胞培养72h为对照,20、40、60、80μmol/L quercetin作用于HepG2细胞72h和60μmol/Lquercetin作用于HepG2细胞6h、12h、24h、48h、72h,应用同位素试剂盒IP3-[3H]Birtrak检测细胞IP3含量,RT-PCR分析FasmRNA表达,Western blotting分析细胞Fas蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:各浓度的quercetin作用于肝癌HepG2细胞72h,IP3含量显著低于对照组[(17.9±1.5)pmol/106cells、(15.5±1.1)pmol/106cells、(5.7±0.9)pmol/106cells、(5.5±0.8)pmol/106cellsvs(29.4±0.5)pmol/106cells],FasmRNA表达显著高于对照组[RI0.26±0.01、0.30±0.01、0.30±0.02、0.37±0.02vs0.19±0.02],Fas蛋白表达显著高于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)1.10±0.08、0.91±0.02、0.78±0.07、0.73±0.05vs0.15±0.01],细胞凋亡率显著高于对照组[(11.2±1.1)%、(15.5±1.1)%、(26.8±2.5)%、(27.1±1.5)%vs(2.6±0.1)%];60μmol/L quercetin作用于肝癌HepG2细胞6h、12h、24h、48h、72h,各时相IP3含量显著低于对照组[(23.3±1.4)pmol/106cells、(12.0±1.4)pmol/106cells、(7.5±0.8)pmol/106cells、(5.6±0.5)pmol/106cells、(4.3±0.6)pmol/106cellsvs(29.2±0.6)pmol/106cells,P<0.01];12h后FasmRNA表达显著高于对照组[RI0.26±0.02、0.28±0.02、0.26±0.01、0.24±0.01vs0.20±0.01],Fas蛋白表达显著高于对照组[RI0.65±0.17、1.20±0.07、1.51±0.06、1.50±0.06、0.97±0.17vs0.18±0.01],24h后各时相细胞凋亡率显著高于对照组[(7.4±0.5)%、(20.5±2.0)%、(30.7±1.6)%vs(2.6±0.1)%,P<0.01]。结论:Quercetin能减少IP生成,上调Fas基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。

金雀异黄素调节肝癌HepG2细胞bax基因表达诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)和bax基因表达变化在金雀异黄素(genistein,Gen)诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以0μmol/L Gen作用肝癌HepG2细胞72 h为对照组,以不同浓度(20、40、60及80μmol/L)Gen为浓度依赖性实验;以60μmol/L Gen作用于肝癌HepG2细胞0 h为对照组,60μmol/L Gen作用于HepG2细胞不同时相(6、12、24、48及72 h)为时间依赖性实验;应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量;RT-PCR分析baxmRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度(20、40、60及80μmol/L)的Gen作用于肝癌HepG2细胞72 h后,IP3含量显著低于对照组〔(17.7±1.3)、(11.2±0.9)、(4.9±0.5)、(4.8±0.3)pmol/106cells vs(29.4±0.5)pmol/106cells〕,P<0.01;bax mRNA表达(RI,灰度与面积之积的相对强度)显著高于对照组(0.26±0.02、0.33±0.05、0.35±0.06、0.38±0.05 vs 0.09±0.01),P<0.01;细胞凋亡率也显著高于对照组〔(10.1±0.9)%、(18.7±1.6)%、(28.7±2.5)%、(27.9±2.0)%vs(2.6±0.1)%〕,P<0.01。60μmol/L Gen作用于肝癌HepG2细胞不同时相(6、12、24、48及72 h)后,各时相IP3含量显著低于对照组〔(22.6±0.9)、(12.0±1.4)、(7.5±0.8)、(5.6±0.5)、(4.3±0.6)pmol/106cells vs(29.2±0.6)pmol/106cells〕,P<0.01;12 h后baxmRNA表达显著高于对照组(0.25±0.06、0.29±0.02、0.30±0.02、0.35±0.04 vs 0.09±0.01),P<0.01;24 h后各时相细胞凋亡率明显高于对照组〔(7.4±0.5)%、(20.5±2.0)%、(30.7±1.6)%vs(2.6±0.1)%〕,P<0.01。结论Gen能减少IP3生成,上调bax基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。

供肝NK细胞对肝移植免疫反应中NF-κB活性和IL-15表达的影响

目的:观察大鼠移植肝组织内和外周血白细胞介素15(IL-15)的表达水平及脾组织内核因子κB(NF-κB)的表达活性变化,探讨供肝NK细胞减轻肝移植术后急性排斥反应的机制。方法:Lewis大鼠为肝移植供体,BN大鼠为受体,改良"二袖套"法建立大鼠肝移植模型。应用[60Co]射线照射清除供体免疫细胞和经门静脉回输供肝NK细胞等技术,实验设立3组。A组:急性排斥组;B组:单纯[60Co]照射排斥组;C组:[60Co]照射+供肝NK细胞门静脉回输排斥组。移植术后第1、3、7天收集受鼠外周血清,ELISA法检测IL-15分泌水平,同时切取移植肝行病理学检查,Western blotting法检测移植肝组织IL-15蛋白的表达,凝胶电泳迁移实验(EMSA)检测受鼠脾组织NF-κB表达活性。另外每组各设亚组观察移植后大鼠自然生存时间。结果:B组术后大鼠自然存活时间较A、C组明显缩短,术后发生急性排斥反应程度较A、C组严重;术后第3、7天,3组受鼠外周血IL-15水平均较第1天时显著升高;移植术后第3、7天,B组大鼠血清IL-15浓度均显著高于A、C组;术后第3、7天,移植肝组织中B组IL-15表达也显著高于A、C组,受鼠脾组织中B组NF-κB表达活性亦显著高于A、C组。结论:IL-15可能作为肝移植急性排斥反应的监测指标,对急性排斥反应的早期诊断和移植物的预后估计具有临床指导意义;供肝NK细胞可能通过下调NF-κB的表达活性来调节IL-15的水平,进而减轻肝移植术后急性排斥反应。

萎缩性结石性胆囊炎腹腔镜手术58例临床分析

目的:探讨腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)治疗萎缩性结石性胆囊炎的可行性、安全性及治疗效果。方法:回顾分析1998-2005年间萎缩性结石性胆囊炎行腹腔镜胆囊切除术的病例58例(观察组),与同期开腹手术96例(对照组)比较。结果:观察组58例,其中54例 (93．1％)在腹腔镜下顺利完成,4例(6．8％)中转开腹,均治愈出院。观察组手术时间(57．25±19．86) min,对照组手术时间(54．25±23．74)min,两组无显著性差异(P>0．05)。观察组出血量(35．48± 21．54)mL,对照组出血量(43．67±24．49)mL,两组有显著性差异(P<0．05)。术后3 d体温,观察组 (37．6±0．4)℃,对照组(37．5±0．3)℃,两组无显著性差异(P>0．05)。术后肛门排气时间,观察组 (26．28±3．56)h,对照组(34．40±6．63)h,观察组的术后肛门排气时间明显短于对照组(P<0．01)。住院天数,观察组(4．1±0．4)d,对照组(6．5±0．6)d,观察组住院天数明显缩短(P<0．01)。结论:在熟练掌握腹腔镜胆囊切除术;严格掌握LC术的指征和中转开腹的前提下,应用腹腔镜胆囊切除术治疗萎缩性结石性胆囊炎是可行的、安全的,其疗效满意,可作为一种常规手术加以推广。

三氧化二砷治疗中晚期肝癌15例疗效分析

目的观察三氧化二砷（As2O3）治疗中晚期原发性肝癌的化疗价值及不良反应。方法8例采用三氧化二砷静脉滴注10mg／d，7—14d；7例采用姑息手术后肝动脉或门静脉置化疗泵（皮下埋藏式微泵），三氧化二砷经微泵区域化疗20mg／d，5d。结果经过4—6个疗程，PR3例，NC8例，PD4例，有效率为20％；而不良反应仅表现为轻度白细胞、血小板下降和轻度肝功能异常。结论在手术还是未手术的中晚期肝癌病例中使用三氧化二砷进行化疗确实有效，而且有不良反应少的优点，应用前景广阔。

Genistein在调节肝癌HepG2细胞Fas基因表达及诱导细胞凋亡中的作用

目的:探讨三磷酸肌醇(IP3)和Fas基因表达变化在genistein诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法:以肝癌HepG2细胞培养72h为对照,以20、40、60、80μmol/L genistein作用于HepG2细胞72h和60μmol/L genistein作用于HepG2细胞6、12、24、48、72h,应用同位素试剂盒IP3-[3H] Birtrak检测细胞IP3含量,RT-PCR分析Fas mRNA表达,Western blotting分析细胞Fas蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:各浓度的genistein作用于肝癌HepG2细胞72h,IP3含量显著低于对照组,Fas mRNA表达显著高于对照组,Fas蛋白表达显著高于对照组,细胞凋亡率显著高于对照组。60μmol/L genistein作用于肝癌HepG2细胞6、12、24、48、72h,6h后IP3含量显著低于对照组;12h后Fas mRNA表达显著高于对照组,6h后Fas蛋白表达显著高于对照组,24h后各时相细胞凋亡率显著高于对照组(均P<0.01)。结论:Genistein能减少IP3生成,上调Fas基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。

42例重症急性胰腺炎的治疗体会

目的研究分析使用腹腔灌洗引流治疗重症急性胰腺炎的临床效果。方法回顾性分析本院2000年1月-2013年10月期间收治的42例重症急性胰腺炎患者的临床资料，将其按照治疗方法分为观察组和对照组，对照组给予综合治疗（22例），观察组给予综合治疗的基础上加腹腔持续灌洗治疗（20例），对比两组患者的临床效果。结果观察组患者总有效率为85％，对照组总有效率为63．6％，比较差异具有统计学意义（P〈0．05）；且两组患者血淀粉酶、尿淀粉酶比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论腹腔持续灌洗可有效提高患者治愈率，降低死亡率，是临床治疗重症急性胰腺炎的有效方法。

术中术后联合胆道镜液电碎石术治疗肝内胆管结石疗效观察

目的探讨术中术后联合胆道镜液电碎石治疗肝内胆管结石方法和疗效。方法对35例肝内胆管结石患者施行胆总管切开取石，左肝外叶切除为主，配合术中、术后胆道镜下液电跨石观察其效果。结果全组术后残石率2．86％，无手术死亡。结论对肝内胆管结石实施术中术后联合胆道镜液电碎石的个体化手术治疗方案，是治疗肝内胆管结石、降低术后残石率的有效方法。

经皮胆囊穿刺引流术在高龄高危急性胆囊炎患者中的应用

目的探讨胆囊穿刺引流术治疗高龄高危型急性胆囊炎患者的临床疗效。方法选取56例患有高危型急性胆囊炎的高龄患者,按照就诊顺序随机均分为对照组与研究组各28例,对照组采用腹腔镜下胆囊切除术进行治疗,研究组则采用胆囊穿刺引流术进行治疗,对两组患者的临床疗效进行对照比较。结果研究组的临床疗效明显优于对照组,比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论采用胆囊穿刺引流术治疗高龄高危型急性胆囊炎,手术成功率较高,临床疗效显著,能够有效减少患者的病死率及并发症发生率,值得临床应用及推广。

三维动态增强磁共振血管成像对肝癌侵犯血管诊断的临床价值

目的探讨三维动态增强磁共振血管成像(3D CE MRA)对肝细胞癌侵犯血管的诊断的临床价值。方法回顾性分析了2008年4月～2009年2月我院治疗的60例肝癌患者。在介入治疗或肝脏手术前接受门脉3D CE MRA,采用仪器为Philips achiva 1.5testa超导型磁共振成像系统,扫描所获的原始图像经计算机重建成类似血管造影的3D CE MRA图,用于诊断门静脉、肝静脉、下腔静脉受侵情况。3D CE MRA的诊断结果同术中超声X线造影和手术-病理所见相对照。结果所有患者均顺利完成3D CEMRA。所有病例门静脉、肝静脉、下腔静脉均显示良好。手术或门脉造影发现受累血管门静脉23例,肝静脉15例,下腔静脉12例。3D CE MRA检测门静脉、肝静脉、下腔静脉的总体敏感性为97.2%,特异性为100.0%,阳性预测值为92.8%、阴性预测值为100.0%。结论3D CE MRA对肝癌侵犯血管的诊断具有较高准确性,且直观和无创伤性。

胰头十二指肠切除术胰瘘的相关因素

目的探讨胰头十二指肠切除术胰瘘发生与残胰处理方法,残胰管处理方式等相关关系。方法回顾分析我院自1990年1月至2006年12月所行67例胰头十二指肠切除术,其中Child法重建66例,Whipple法重建1例,残胰管内置短管引流65例,长管引流2例。结果全组67例均无手术死亡,无胰瘘发生,胆瘘1例,应激性溃疡出血6例。结论胰瘘的发生与胰吻合方式关系不大,残胰管内置引流管能起到时明显降低胰瘘发生作用,而全胃肠外营养(TPN)的使用及生长抑素的应用能起到预防胰瘘发生的作用。

二级脾蒂离断法脾切除术在肝硬化脾功能亢进中的应用

目的:探讨肝硬化脾功能亢进轻中度脾肿大行腹腔镜下二级脾蒂离断法脾切除术的可行性、有效性和安全性。方法:对2009年1月至2010年12月施行腹腔镜下二级脾蒂离断法行脾切除治疗肝硬化脾功能亢进轻中度脾肿大25例患者的临床资料进行回顾分析。结果:除1例因大出血中转开腹外,均顺利完成手术。手术时间平均180 min,术中平均出血量260 mL,无严重并发症。结论:肝硬化脾功能亢进轻中度脾肿大患者行腹腔镜下二级脾蒂离断法脾切除安全有效,并可降低手术费用,值得临床推广。

腹腔镜联合胆道镜治疗难取胆道结石的疗效观察

目的:探讨腹腔镜联合胆道镜治疗难取胆道结石的临床效果。方法:选择难取胆囊结石患者147例,分别采用开腹手术治疗和腹腔镜与胆道镜联合治疗法治疗,比较其临床效果。结果:试验组在减少患者手术出血、第一次排气时间、总住院时间、体重减轻百分比及住院时总费用方面均优于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:针对难取性胆道结石患者采用腹腔镜与胆道镜联合治疗法治疗,可明显降低患者手术时出血量,促进患者术后康复,减少围手术期间不良反应,安全系数高,值得推广。

Hepa1-6肝癌细胞经丝裂霉素处理后对survivin表达的影响

目的探讨经丝裂霉素(MMC)处理后Hepa1-6肝癌细胞survivin表达的变化。方法体外培养Hepa1-6经1.0、3.0和9.0μg/ml浓度的MMC处理后1和3d,MTT法测定Hepa1-6生长抑制率,RT-PCR法检测survivin mRNA和Western blot法检测survivin蛋白的表达。结果9.0μg/ml浓度的MMC对Hepa1-6的抑制率明显高于1.0和3.0μg/ml浓度组,1.0和3.0μg/ml的MMC作用3d后对Hepa1-6生长无抑制。各浓度MMC处理第1天的Hepa1-6表达survivin mRNA以及survivin均降低,1.0和3μg/ml的MMC处理第3天,Hepa1-6表达survivin mRNA以及survivin升高,9μg/ml组survivin mRNA以及survivin表达于第3天仍低。结论低浓度MMC能诱导Hepa1-6细胞内survivin表达增加,可能是Hepa1-6对化疗药物产生耐药性的因素之一。

五羟黄酮调节肝癌HepG2细胞bax基因表达诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)和bax基因表达变化在五羟黄酮(Quercetin)诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72h为对照,以20,40,60,80μmol/L Quercetin作用于HepG2细胞72h时和60μmol/LQuercetin作用于HepG2细胞6,12,24,48,72h,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,RT-PCR分析bax mRNA表达,Western blotting分析细胞bax蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果各浓度的Quercetin作用于肝癌HepG2细胞72h,IP3含量显著低于对照组(P<0.01),bax mRNA和bax蛋白表达显著高于对照组,细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);60μmol/L Quercetin作用于肝癌HepG2细胞6,12,24,48,72h,各时相IP3含量显著低于对照组(P<0.01);12h后bax mRNA和bax蛋白表达显著高于对照组,24h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组(P<0.01)。结论Quercetin能减少IP3生成,上调bax基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。

bcl-2基因表达在genistein抑制裸鼠肝癌生长中的作用

目的:探讨bcl-2基因表达变化在genistein治疗裸鼠移植人肝癌中的作用。方法:以裸鼠移植人肝癌为对照,对照组腹腔注入含0.04%DMSO RPMI-1640培养基0.05 L/kg,genistein治疗组腹腔注入genistein 1mg kg-1·d-1,3周后观察肝癌增长情况,并应用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3含量,RT-PCR分析癌组织bcl-2 mRNA表达,Western blotting分析肝癌组织Bcl-2蛋白表达。结果:治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积:(42.7±27.8)mm3vs(52.3±26.5)mm3;重量:(42.7±27.8)mgvs(91.3±31.4)mg],IP3含量显著低于对照组[(13.4±1.4)nmol/g proteinvs(35.3±6.6)nmol/g protein],bcl-2 mRNA表达显著低于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)0.48±0.02vs0.56±0.15],P<0.01,Bcl-2蛋白表达显著低于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)1.69±0.52vs1.37±0.48]。结论:Genistein能减少IP3生成,下调肝癌组织bcl-2基因表达,抑制裸鼠移植肝癌的生长。

两种宣教方法对肝豆状核变性患者饮食治疗的影响

目的探讨两种宣教方法对肝豆状核变性患者饮食治疗的影响。方法选择2009年6-11月本院肝豆状核变性患者46例,随机分为参与组22例和指导组24例,指导组患者采用常规的健康教育方法,由责任护士全程指导患者的饮食;参与组在常规健康教育的基础上让患者参与制订饮食计划,并制订饮食表。比较两组患者对饮食知识的知晓率及饮食合理率。结果参与组患者饮食知识知晓率及合理率高于指导组(均P<0.05)。结论参与型的健康教育方式能调动肝豆状核变性患者学习饮食知识的积极性,提高患者对饮食知识的知晓率及饮食的合理性。

腹腔镜下胆囊切除术治疗急性化脓性胆囊炎65例的体会

目的:探讨腹腔镜下胆囊切除术(LC)治疗急性化脓性胆囊炎的可行性、安全性及临床疗效。方法:我院于2008年1月至2010年12月间采用LC治疗急性化脓性胆囊炎65例。结果:65例均进行腹腔镜手术探查,60例顺利完成LC,5例中转开腹,中转开腹率为7.69%;3例术后胆漏,发生率4.61%。结论:LC治疗急性化脓性胆囊炎是一种有效、安全、可行的治疗方法。

Quercetin调节肝癌HepG2细胞PTEN基因表达诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)和PTEN基因表达变化在quercetin诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞为空白对照,以不同浓度quercetin作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,RT-PCR分析PTENmRNA表达,Western blotting分析细胞PTEN蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果各浓度的quercetin作用于肝癌HepG2细胞,IP3含量显著低于对照组(17.9±1.5、15.5±1.1、5.7±0.9、5.5±0.8vs29.4±0.5),PTENmRNA表达与对照组无显著差异,PTEN蛋白表达显著高于对照组(0.55±0.02、0.67±0.02、0.94±0.04、0.95±0.03vs0.02±0.002),细胞凋亡率显著高于对照组。60μmol/Lquercetin作用于肝癌HepG2细胞6h、12h、24h、48h、72h,各时相IP3含量显著低于对照组(23.3±1.4、12.0±1.4、7.5±0.8、5.6±0.5、4.3±0.6vs29.2±0.6,P<0.01)。PTENmRNA表达与对照组无显著差异,12h后各时项PTEN蛋白表达显著高于对照组,24h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组(P<0.01)。结论Quercetin能减少IP3生成,上调PTEN蛋白,诱导肝癌细胞凋亡。