短链酰基辅酶A脱氢酶在心脏成纤维细胞胶原表达和细胞增殖中的作用

目的:研究短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-CoA dehydrogenase,SCAD)在心脏成纤维细胞胶原表达和细胞增殖中的作用,探讨其与心肌纤维化之间的关系。方法:以血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)刺激心脏成纤维细胞建立胶原表达和细胞增殖模型,并采用SCAD的最优干扰序列siRNA-1186进行干扰,检测SCAD的mRNA、蛋白表达、酶活性、脂肪酸β氧化速率、ATP以及游离脂肪酸含量的变化;观察其对心脏成纤维细胞胶原表达和细胞增殖的影响。结果:与对照组相比,在Ang Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原表达模型中,SCAD的mRNA和蛋白表达均显著下调。与阴性对照序列组相比,siRNA-1186干扰后心脏成纤维细胞的SCAD表达和酶活性明显下降,心脏成纤维细胞脂肪酸β氧化速率以及ATP生成明显降低,并且游离脂肪酸含量明显增多。同时,心脏成纤维细胞出现明显增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达明显增加。结论:SCAD表达失调可能导致了心脏成纤维细胞异常增殖、胶原分泌紊乱,上调SCAD可能成为干预心肌纤维化的重要环节之一。

短链酰基辅酶A脱氢酶在高血压血管重构中的作用

目的:研究短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-CoA dehydrogenase,SCAD)在高血压血管重构中的变化,探讨SCAD与高血压血管重构之间的关系。方法:采用游泳耐力训练方式训练16周龄的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和健康Wistar大鼠8周,分别以24周龄的SHR和Wistar大鼠作为实验对照,定期测量鼠尾收缩压,测定各组大鼠胸主动脉血管腔内径和血管壁中层厚度、SCAD的mRNA和蛋白表达水平、SCAD酶活性的变化、ATP和ROS水平及血清和胸主动脉游离脂肪酸含量。结果:与Wistar组比较,SHR组大鼠血压升高,血管腔内径减小,血管壁中层厚度增大,血管壁中层厚度与血管腔内径比值增大;与SHR组相比,SHR游泳组血压下降,血管腔内径增大,血管壁中层厚度减小,血管壁中层厚度与血管腔内径比值减小(P<0.05)。与Wistar组比较,SHR组大鼠主动脉SCAD的mRNA和蛋白表达水平显著下调,主动脉中SCAD酶活性下降,ATP含量降低,血清和主动脉游离脂肪酸含量明显增加,ROS含量增加;分别与Wistar组和SHR组比较,Wistar游泳组和SHR游泳组主动脉SCAD的mRNA和蛋白表达水平均明显上调,主动脉中SCAD的酶活性增高,ATP含量增加,血清和主动脉的游离脂肪酸含量明显减少,ROS含量减少。结论:主动脉SCAD的表达下调可能与高血压血管重构密切相关。游泳运动可能通过上调SCAD表达,从而逆转高血压血管重构。

二甲双胍通过上调谷胱甘肽-S-转移酶μ_2抑制大鼠心肌肥厚

目的:探讨二甲双胍对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)左心室谷胱甘肽-S-转移酶μ_2(glutathione-s-transferaseμ_2,GSTM2)的作用,以及二甲双胍对心肌肥厚防治的机制。方法:以16周龄的Wistar-Kyoto(WKY)和自发性高血压大鼠(SHR)作为实验对照,以8周龄的WKY和SHR持续给药二甲双胍(Met)8周作为实验组。采用NIBP大鼠血压心率测定仪定期检测大鼠收缩压,利用BL-420生物实验系统、4导生理记录仪检测大鼠血流动力学参数,称量大鼠左心室及体质量并计算左室重量指数,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测左心室GSTM2酶活性,利用Western blot检测左心室GSTM2、p47phox及Nox4的蛋白表达,二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)染色检测O_2·^-的含量。结果:与对照组相比,SHR组大鼠血压、左室重量指数及左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)明显增加;室内压最大上升和下降速率(maximal rate of increase and decrease of left-ventricle pressure development,±dp/dtmax)明显下降;左心室GSTM2的蛋白表达及酶活性明显下降;左心室P47phox及Nox4的蛋白表达明显增高;O_2·^-的产生明显增多;差异具有统计学意义(P<0.01)。与SHR组相比,SHR二甲双胍治疗8周后,左室重量指数及LVEDP明显下降;±dp/dtmax明显升高;左心室GSTM2的蛋白表达及酶活性明显升高;左心室P47phox及Nox4的蛋白表达明显下调;O_2·^-的产生明显减少;差异有统计学意义(P<0.01)。结论:二甲双胍可以逆转SHR心肌肥厚,可能与增加左心室GSTM2的蛋白表达、降低p47phox及Nox4的蛋白表达、减少活性氧产生、消除氧化应激密切相关。

短链酰基辅酶A脱氢酶在老年自发性高血压大鼠慢性心力衰竭中的作用

目的观察短链酰基辅酶A脱氢酶(Short-chain acyl-CoA dehydrogenase,SCAD)在老年自发性高血压大鼠慢性心力衰竭中的变化,探讨SCAD在老年自发性高血压大鼠慢性心力衰竭中的作用。方法选取20月龄雄性SHR及年龄匹配的WKY对照大鼠,分为WKY对照组和SHR实验组。检测大鼠超声心动图、血压、左室质量指数、心肌纤维化、细胞凋亡、SCAD mRNA和蛋白表达、心肌组织ATP含量、线粒体膜电位和肿胀程度。结果与WKY对照组比较,SHR组心脏的射血分数和缩短分数明显减少,心输出量显著降低,心脏的细胞凋亡指数明显增加,出现了明显的慢性心力衰竭。SCAD mRNA和蛋白水平在老年自发性高血压大鼠慢性心力衰竭中的表达明显下调,心肌组织ATP含量下降,线粒体膜电位升高,线粒体肿胀程度加大。结论 SCAD在老龄自发性高血压大鼠慢性心力衰竭中明显下调,可能与自发性高血压老龄化导致的心力衰竭密切相关。

SCAD重组腺病毒对自发性高血压大鼠血管重构的影响

目的探究尾静脉注射短链酰基辅酶A脱氢酶(SCAD)重组腺病毒能否改善自发性高血压大鼠(SHR)血管重构。方法实验分为6组:Wistar+NS组、Wistar+GFP组、Wistar+Ad-SCAD组、SHR+NS组、SHR+GFP组和SHR+Ad-SCAD组。腺病毒包装的SCAD和GFP纯化后,以尾静脉方式注射给药8周。采用超声心动图检测大鼠心功能情况;采用无创血压仪检测大鼠的血压变化;主动脉HE染色、天狼星红染色、DHE染色、TUNEL染色、EVG染色,观察血管重构。采用实时荧光定量PCR检测相关基因mRNA表达变化、Western blot检测相关蛋白表达变化,观察游离脂肪酸、一氧化氮(NO)和ATP含量变化。结果 (1)尾静脉注射SCAD重组腺病毒,大鼠主动脉中SCAD蛋白出现过表达,mRNA水平增高,SCAD酶活性增加;(2)在病理状态下,增加主动脉中SCAD表达,可以降低血压,改善心功能,改善血管管腔大小,减少胶原沉积,减少血管活性氧(ROS)的生成和细胞凋亡;(3)在病理状态下,SCAD的表达增加可减少血清和主动脉中游离脂肪酸的含量,增加组织中的ATP水平,激活内皮型一氧化氮合酶(eNOS)磷酸化,增加主动脉NO的生成。结论自发性高血压大鼠主动脉SCAD的表达增加能逆转高血压血管重构,可能与其减少血清中游离脂肪酸的含量、增加NO水平、减少活性氧生成、消除氧化应激有关。

正交试验和人工神经网络模型优化通痹凝胶贴剂提取工艺

目的运用正交试验和反向传播人工神经网络(BP-ANN)模型相结合的方法对通痹凝胶贴剂提取工艺进行优化。方法以总生物碱含量、龙胆苦苷含量、总固体得率为指标,运用层次分析法(AHP法)结合CRITIC法确定3个指标的权重系数;采用人工神经网络模型对正交试验得到的提取工艺进行仿真优化,最终确定贴剂最佳提取工艺。结果总生物碱、龙胆苦苷、总固体得率的综合权重分别为0.526、0.344、0.130;正交试验优选通痹凝胶贴剂提取工艺为药材加12倍量60%乙醇提取2次,每次2 h;人工神经网络模型仿真优化的提取工艺为药材加10.8倍量67%乙醇提取2次,每次1.7 h。结论正交试验法与人工神经网络模型优化的提取工艺具有提取效率高、能耗低的优势,可为中药提取工艺的研究提供新的方法。

黄芪甲苷抗抑郁作用机制研究

目的:运用经典抑郁动物模型研究黄芪甲苷的抗抑郁作用,并探讨四氢孕酮在黄芪甲苷抗抑郁效应中的作用。方法:小鼠腹腔注射不同剂量黄芪甲苷,运用强迫游泳实验和悬尾实验研究黄芪甲苷的抗抑郁作用,并检测小鼠前额皮层和海马体中四氢孕酮水平。结果:黄芪甲苷在40mg/kg浓度时具有抗抑郁作用,其抗抑郁样作用与四氢孕酮生物合成相关。结论:黄芪甲苷具有抗抑郁作用,该作用与四氢孕酮生物合成相关。

基于粗糙集理论的舒血宁注射液不良反应分析

目的以舒血宁注射液不良反应临床报告及文献报道数据为基础,运用粗糙集理论探讨舒血宁注射液不良反应各因素的相关性。方法汇总468份舒血宁注射液不良反应报告,运用Rosetta软件对数据进行属性约简,对生成的规则及各指标进行分析。结果数据约简得到与不良反应关系相关性强指标9个,主要属于用药信息;不良反应各表现之间及各表现与用药信息之间有相关性。结论该研究结果可以对舒血宁注射液临床合理应用提供参考,同时丰富了药物不良反应的研究方法。

黄素腺嘌呤二核苷酸通过激活SCAD抑制大鼠病理性心肌肥厚和心肌纤维化

目的探究黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)在自发性高血压大鼠病理性心肌肥厚和心肌纤维化中的作用及防治机制。方法选取12周龄的自发性高血压大鼠(SHR)及周龄匹配的Wistar大鼠。经尾静脉注射FAD(每天1μmol/kg)治疗10周后,采用无创血压测量仪检测大鼠的血压及心率;超声心动图和组织学方法观察病理性心肌肥厚和心肌纤维化程度;Western blot方法检测短链酰基辅酶A脱氢酶(SCAD)、CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA的蛋白表达水平;免疫荧光单标法进一步验证SCAD的蛋白表达水平;荧光定量PCR检测SCAD、ANF、脑利钠肽(BNP)以及CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA的mRNA表达水平;检测SCAD酶活性、ATP、游离脂肪酸、BNP及活性氧含量。结果自发性高血压大鼠经FAD治疗后,收缩压和心率均明显降低;病理性心肌肥厚和心肌纤维化程度得到明显改善;心肌组织中SCAD的mRNA、蛋白表达、酶活性及ATP含量均显著增高,游离脂肪酸和活性氧水平明显降低(P<0.05)。结论FAD可能通过激活SCAD,改善心肌能量代谢,减少氧化应激,从而抑制自发性高血压大鼠病理性心肌肥厚和心肌纤维化。

短链酰基辅酶A脱氢酶在人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的观察短链酰基辅酶A脱氢酶(SCAD)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中的变化,探讨其与细胞凋亡的关系.方法取正常培养2~3 d的HUVEC,采用叔丁基过氧化氢(tBHP)刺激HUVEC建立细胞凋亡模型,分别用0、10、20、30、40、50μmol/L的tBHP干预HUVEC 12 h,用50μmol/L的tBHP干预HUVEC 0、3、6、9、12 h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)分别检测SCAD的mRNA及蛋白表达,以筛选tBHP干预HUVEC的最佳浓度和时间.用小干扰RNA(siRNA)干扰HUVEC的SCAD基因(siRNA274、siRNA414、siRNA679),通过检测SCAD mRNA和蛋白表达及SCAD酶活性,以筛选siRNA最佳干扰序列.然后以最佳干扰序列及tBHP同时干预HUVEC,通过检测细胞活性、细胞凋亡率、SCAD酶活性、SCAD mRNA和蛋白表达、活性氧(ROS)含量、三磷酸腺苷(ATP)含量和游离脂肪酸(FFA)含量,观察SCAD对HUVEC细胞凋亡的影响.结果①随tBHP浓度增加及干预时间延长,细胞活性及SCAD mRNA和蛋白表达均逐渐降低,呈浓度和时间依赖性,以50μmol/L tBHP干预HUVEC 12 h各指标下降最为显著.②在siRNA274、siRNA414、siRNA679 3条干扰序列中,siRNA679转染在降低SCAD mRNA和蛋白表达及酶活性方面最为显著.③与空白对照组相比,siRNA679干扰后细胞活性明显下降(A值:0.48±0.09比1.00±0.09,P<0.01),细胞凋亡率明显增加〔(29.96±2.09)%比(2.90±1.90)%,P<0.01〕,HUVEC中SCAD mRNA和蛋白表达、SCAD酶活性及ATP含量均显著下降〔SCAD mRNA(2-ΔΔCt):0.50±0.16比1.34±0.12,SCAD/α-Tubulin:0.67±0.11比1.00±0.06,SCAD酶活性(kU/g):0.38±0.04比0.53±0.04,ATP含量(μmol/g):0.14±0.02比0.19±0.01,均P<0.05〕,FFA及ROS含量显著增加〔FFA(nmol/g):0.84±0.07比0.47±0.04,ROS(平均荧光强度):647.5±23.7比434.2±46.5,均P<0.01〕.siRNA转染组各指标与tBHP诱导的HUVEC凋亡趋势一致.结论SCAD表达失调可能参与HUVEC细胞凋亡过程,上调SCAD可能成为干预细胞凋亡的重要环节之一.

短链酰基辅酶A脱氢酶在大鼠心肌梗死后心力衰竭中的变化及有氧运动的干预作用

目的探讨短链酰基辅酶A脱氢酶(SCAD)在大鼠心肌梗死(心梗)后心力衰竭(心衰)中的变化,以及有氧运动对其的干预作用。方法按随机数字表法将健康雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、假手术游泳组(Sham+swim组)、心衰模型组(LAD组)、心衰游泳组(LAD+swim组),每组9只。采用冠状动脉左前降支结扎法(LAD)制备心梗后心衰大鼠模型;Sham组只在左冠状动脉下穿线打一个松结,其余操作同LAD组。Sham+swim组和LAD+swim组大鼠于术后预游泳1周(从第1天训练15 min逐渐增加到第5天的60 min),再进行游泳耐力训练(从第2周开始每日持续训练60 min,每周6次,连续10周)。于游泳耐力训练前测定大鼠尾动脉收缩压(SBP),以后每隔2周测定1次,直至第10周结束。游泳训练10周后,用超声心动图测量心排血量(CO)、每搏量(SV)、左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、左室收缩期末内径(LVESD)、左室舒张期末内径(LVEDD)、左室收缩期末容积(LVESV)、左室舒张期末容积(LVEDV);用Masson染色法观察心脏形态学改变;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI);用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)分别检测心肌SCAD的mRNA及蛋白表达;另外,按试剂盒步骤检测心肌SCAD活性、三磷酸腺苷(ATP)含量以及血清和心肌游离脂肪酸(FFA)含量。结果与Sham组比较,Sham+swim组SBP无明显变化,心肌出现生理性肥大(离心性肥大),心肌收缩力增强;LAD组呈持续性低血压状态,心梗明显,左室变薄,心肌舒缩功能减退。与LAD组相比,LAD+swim组血压、心脏舒缩功能及心梗得到明显改善〔SBP(mmHg,1 mmHg=0.133 kPa):4周为119.5±4.4比113.2±4.5,6周为120.3±4.0比106.5±3.7,8周为117.4±1.3比111.0±2.3,10周为126.1±1.6比119.4±1.9;CO(mL/min):59.10±6.31比33.19±4.76,SV(μL):139.42±17.32比84.02±14.26,LVEF:0.523±0.039比0.309±0.011,FS:(28.17±2.57)%比(15.93±3.64)%,LVEDD (mm):8.80±0.19比9.35±0.30,LVESD(mm):5.90±0.77比7.97±0.60,LVEDV(μL):426.57±20.84比476.24±25.18,LVESV(μL):209.50±25.18比318.60±16.10;AI:(20.4±1.4)%比(31.2±4.6)%;均P<0.05〕。与Sham组相比,Sham+swim组心肌SCAD的mRNA和蛋白表达、SCAD活性明显升高,ATP含量略有升高,血清FFA含量明显下降,心肌FFA含量略有减少;LAD组心肌SCAD的mRNA和蛋白表达、SCAD活性、ATP含量均明显降低,血清和心肌FFA含量明显增高。与LAD组相比,LAD+swim组心肌SCAD的mRNA和蛋白表达、ATP含量明显升高〔SCAD mRNA(2-ΔΔCt):0.52±0.16比0.15±0.01,SCAD/GAPDH(以Sham组为参照,倍数):0.94±0.08比0.60±0.11,ATP含量(mol/g):52.8±10.1比14.7±6.1,均P<0.05〕,血清和心肌FFA含量明显减少〔血清FFA(nmol/L):0.11±0.03比0.29±0.04,心肌FFA(nmol/g):32.7±8.2比59.7±10.7,均P<0.05〕,SCAD活性略有升高(kU/g:12.3±4.3比8.9±5.8,P>0.05)。结论 SCAD在大鼠心梗后心衰中的表达明显下调,有氧运动干预后其表达明显上调,表明有氧运动可能通过上调SCAD表达改善心梗后心衰的严重程度。

18ka转运蛋白配体对抑郁大鼠不同脑区四氢孕酮水平影响的研究

目的研究18ka转运蛋白配体对抑郁大鼠不同脑区四氢孕酮水平的影响。方法应用大鼠慢性不可预知温和应激抑郁模型(CUMS),通过灌胃18ka转运蛋白配体AC-5216,进行采用酶联免疫吸附试验检测大鼠不同脑区四氢孕酮的含量,评价AC-5216对抑郁大鼠不同脑区四氢孕酮水平影响。结果大鼠强迫游泳和蔗糖偏好实验证明CUMS造模成功。给予AC-5216后,大鼠前额皮质层、海马体、杏仁核脑区的四氢孕酮含量显著升高;前部扣带回、腹中央纹状体四氢孕酮含量无显著性差异。结论AC-5216的抗抑郁作用与前额皮质层、海马体、杏仁核内四氢孕酮水平相关。