类器官的培养及应用的研究进展

由于细胞实验在模拟生理和病理上的局限以及动物实验的昂贵和相关伦理问题,近年来在体外建模研究领域,人们对类器官的关注及研究逐渐提高,本文主要对近10年类器官的培养进展及应用进行综述,阐述类器官的主要培养来源、环境、表征及类器官的应用及与新兴技术的研究进展,旨在为类器官的培养技术的进一步完善及在相关领域的研究和应用提供新的思路。

食管鳞癌患者来源移植瘤模型:B-NDG小鼠与BALB/c裸鼠的比较

目的探讨不同品系的小鼠对于食管鳞癌患者来源的异种移植瘤(ESCC PDX)成瘤率的影响,为ESCC的临床个体化治疗建立更优势的临床前动物模型。方法收集22例ESCC患者手术切除的肿瘤组织,分别利用B-NDG(NSG)鼠和BALB/c裸鼠来建立ESCC PDX模型。通过观察移植瘤成瘤情况,测量移植瘤体积,绘制生长曲线图,计算成瘤率和成瘤时间,HE染色、免疫组化及基因组测序等实验,比较移植瘤组织与原患者肿瘤组织的一致性。结果22例标本的PDX模型移植结束,发现NSG小鼠ESCC肿瘤发生率(50%,11/22)高于BALB/c裸鼠(18.18%,4/22)(P=0.027)。NSG小鼠的平均肿瘤成瘤时间为75.95 d短于BALB/c小鼠的91.67 d,差异具有统计学意义(P<0.001)。在NSG小鼠和BALB/c小鼠异种移植模型中,肿瘤均能保持病人ESCC肿瘤组织的形态学特征。基因分析结果显示,与BALB/c裸鼠相比,NSG小鼠肿瘤与亲代患者肿瘤样本间的基因相似度更高(P<0.0001)。结论成功构建了NSG小鼠和BALB/c裸鼠ESCC皮下移植瘤模型,并发现NSG小鼠对于模型成功的建立更具有优势。

与胰腺癌免疫预后相关的自噬相关基因预测

目的通过表征自噬相关基因(ARGs)在胰腺癌(PAAD)中的表达模式和预后,寻找与胰腺癌免疫治疗预后不良相关的候选基因。方法从人类自噬数据库(HADb)和基因集富集分析(GSEA)网站获得566个自噬相关基因,通过GEPIA、Kaplan-Meier Plotter和cBioPortal数据库检测胰腺癌患者中ARGs的RNA-seq表达和生存分析数据,筛选出与无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)显著相关的差异表达基因(DEGs)。利用DAVID及STRING数据库进行GO和KEGG分析,预测相关信号通路。利用TISIDB分析ARGs的表达量与肿瘤浸润淋巴细胞及免疫检查点抑制剂的相关性。结果GEPIA分析结果显示大部分DEGs在胰腺癌中表达高于正常胰腺组织(P<0.05)。生存分析结果表明CTTN、MET、MTDH、RALB、RIPK2、BCL2L1、CHMP2B、EIF2S1、ITGA3、NCKAP1、SH3GLB1表达高的患者有更低的OS和RFS。ATP6V0D1、ATP6V0A1、ATP6V0E2、MAP1LC3A表达高的患者有更高的OS和RFS。KEGG表明NOD样受体信号通路、PI3K-AKT信号通路和RAS信号通路是预后不良相关基因的主要的信号通路。TISIDB分析表明,候选ARGs与肿瘤浸润淋巴细胞之间的相关性趋势同ARGs与免疫检查点抑制剂之间的趋势存在相似性。结论自噬相关基因MET、RALB、RIPK2、BCL2L1、ITGA3在胰腺癌中表达升高,是潜在的影响免疫治疗预后不良的候选基因。

呼吸道合胞病毒M2-1蛋白Hep-2细胞稳定表达株的构建及其在呼吸道合胞病毒感染中的特点

目的:构建稳定表达呼吸道合胞病毒(RSV)M2-1蛋白的Hep-2细胞,并分析稳定表达细胞株RSV感染的特点。方法:构建M2-1真核表达质粒,转染至Hep-2细胞。通过G418筛选阳性单克隆;RT-PCR、qRT-PCR以及Western blot鉴定,最终得到稳定表达株。通过MTT法分析细胞增殖特征;通过分析不同浓度RSV病毒感染Hep-2细胞与所构建的稳定表达株细胞后在状态、细胞病变(CPE)出现时间以及RSV基因组核酸产量分析比较RSV在两种细胞中的感染特点。结果:获得一株稳定表达M2-1蛋白的细胞Hep-2 2F5。该株细胞的生长速度高于原始细胞株。采用1000~10?2 TCID50 (E1~E6)的病毒滴度对Hep-2 2F5与Hep-2两种细胞进行感染发现,1000 TCID50 (E1)的滴度下,两种细胞均产生病变,但Hep-2 2F5细胞产生的病变更明显;100~10 TCID50 (E2~E3)滴度下RSV感染两种细胞,Hep-2 2F5细胞产生的病变更早且更明显;1~0.1 TCID50 (E4~E5)滴度下RSV感染两种细胞,Hep-2 2F5细胞产生少量病变,Hep-2则无明显病变。E1~E4滴度下攻毒12 h后,RSV在Hep-2 2F5细胞中的核酸定量平均值高于Hep-2细胞,E5~E6滴度下攻毒12 h两细胞均未检测到RSV病毒核酸;随着时间延长,E1~E2滴度感染后的Hep-2中RSV含量高于Hep-2 2F5,在E4滴度及以下,RSV在Hep-2 2F5中的增殖优于Hep-2。结论:成功构建稳定表达M2-1蛋白的Hep-2 2F5细胞株。该细胞株在RSV感染中更具敏感性,低滴度病毒感染的情况下,更早产生CPE效应,且病毒核酸的含量也较Hep-2高。