药物GLP体系下的多场所研究策略

目的:探讨药物非临床研究质量管理规范(Good Laboratory Practice,GLP)体系下多场所研究策略的制定。方法:分析多场所研究开展前对分场所的考察、多场所研究中各级人员的职责与沟通协作方式以及几种多场所研究开展的策略等内容。结果:多场所研究是一项具有一个研究计划和一份最终报告的研究,必须符合GLP,因此应选择完全符合GLP标准的实验室作为分研究场所,在多场所研究开展前应仔细规划,界定好相关人员的沟通方式和职责,专题负责人作为研究的唯一控制点,必须在确保合规方面发挥核心作用。结论:在药物GLP体系下制定符合国内外GLP法规要求的多场所研究策略,必须掌握多场所研究是一项单一研究的原则,选择GLP实验室为分研究场所,仔细规划,各级人员严格履行各自的职责并建立顺畅的沟通方式,专题负责人应充分发挥推动者的角色。

胚胎干细胞试验在生殖毒性替代试验中的研究进展

药物生殖毒性评估是药物安全性评价中必不可少的部分。传统生殖毒性试验周期长,动物使用量大,投入资金多,随着“减少、优化、替代(3R)”原则的实施,胚胎干细胞试验(EST)逐渐成为研究和应用的热点。EST是经欧洲替代方法验证中心验证并推荐的生殖毒性全体外替代试验,可在药物研发早期阶段通过全体外检测和快速高通量检测药物的胚胎毒性类型。近年来,为解决EST在体外替代试验中遇到的问题,研究者们对其进行了优化和改进,包括增加化合物验证数量及种类,代谢体系及体内外浓度的选择,增加除心脏以外的分化检测终点(如神经、成骨和血管内皮等);增加定量检测方法,从基因和蛋白水平对分化情况进行分析(如流式细胞荧光分选技术等);增加EST衍生模型(如ReProGlo模型和BeWo运输模型等)以提高EST预测可靠性、模拟代谢活化过程、考虑体内外浓度一致性、对靶器官的毒性、增加定量分析终点。但目前有些检测方法还未明确其判断标准,有待进一步研究。EST更新及优化后,其评价范围不断扩大,风险评估准确性增加,有可能实现自动化、快速且高通量筛选潜在化合物。

蛹虫草核苷体外抗肿瘤实验研究

目的探讨蛹虫草核苷的体外抗肿瘤作用。方法用MTT法和SRB法检测蛹虫草核苷类成分对14种肿瘤细胞株体外生长的抑制作用。结果蛹虫草核苷对所试肿瘤细胞株的体外生长均具有较强的抑制作用,其中对人表皮鳞癌细胞A431、人直肠癌细胞株HT-29、人胃癌细胞(未分化)HGC-27、人恶性黑色素瘤细胞A-375、人急性淋巴白血病细胞CCRF-CEM、人肺癌细胞(淋巴结转移)NCI-H292、人红白血病细胞株K562作用强,半数抑制浓度(IC50)分别为7.27±1.61、10.34±3.69、11.61±1.73、16.17±3.91、16.21±3.18、18.10±7.68、19.71±4.88μg/m L,其次是人肝癌细胞Hep G2、人宫颈癌细胞He La、人胃癌细胞MGC80-3、人大细胞肺癌细胞NCI-H460、人乳腺癌细胞MCF-7、人非小细胞肺癌细胞A549、人肾癌细胞A498,半数抑制浓度(IC50)分别为22.81±4.21、23.14±7.30、25.73±3.83、34.15±7.89、54.45±5.70、117.15±12.84、197.94±16.95μg/m L。结论蛹虫草核苷具有广谱抗肿瘤作用。

榄香烯联合5-FU体内外抑制人胃癌MGC80-3细胞增殖与诱导凋亡作用的研究

目的研究中药莪术提取物榄香烯制剂(Elemene)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对MGC80-3细胞增殖的抑制及诱导凋亡的作用。方法采用MTT法考察榄香烯、5-FU单药及联合作用于MGC80-3细胞的体外抗肿瘤效应;应用中效原理进行统计分析单药及联合用药对肿瘤细胞生长的影响,确定联合用药时的效应(Fa)合用指数(CI)的关系;流式细胞仪检测细胞凋亡周期改变。通过建立MGC80-3裸鼠体内异种肿瘤模型,考察榄香烯及5-FU单用及合用对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果体外试验结果表明榄香烯与5-FU联合应用作用于MGC80-3细胞可产生较好协同效应,单染法(PI)检测到榄香烯与5-FU联合之后能够使MGC80-3细胞表现出显著的G0/G1期阻滞作用;体内试验结果表明榄香烯单药及与5-FU联合作用对MGC80-3裸鼠异种肿瘤生长均有明显的抑制作用,且联合用药组抑瘤率可达84.68%。结论榄香烯联合5-FU作用于MGC80-3肿瘤细胞株可产生较好的协同效应。

恒河猴肠道寄生虫感染情况调查与控制

为了解恒河猴在实验室饲养环境下的肠道寄生虫感染情况,采用直接涂片法和饱和食盐水漂浮法,对采集的66只试验用恒河猴新鲜粪便进行肠道寄生虫检查,并评估了血液学、血液生化学相关指标以及驱虫药物的驱虫效果。结果显示:从66只恒河猴新鲜粪便中检出类圆线虫和鞭虫2种肠道蠕虫卵囊,感染率分别是9.1%和12.1%,均为单一感染且感染强度较低;感染类圆线虫或鞭虫恒河猴的血液学指标(WBC、RBC、HGB、MCH、MCHC、HCT、MCV、PLT、PDW、MPV、PCT、LYMPH、MONO、EO、BASO)和肝肾功能指标(ALT、AST、ALP、LDH、TP、BUN、CREA)与健康动物无显著差异(P>0.05);连续使用伊维菌素注射液或阿苯达唑伊维菌素片均能有效驱除感染的类圆线虫或鞭虫。结果说明:恒河猴在实验室饲养环境下,其肠道寄生虫的感染种类较少,感染率和感染强度均较低,对动物健康状况无明显影响,通过良好的饲养管理和完善的药物驱虫程序能实现对猴肠道寄生虫病的有效控制。

鱼腥草破壁饮片单次和重复给药毒性试验

目的研究大鼠单次和重复给予鱼腥草破壁饮片后的毒性反应,为临床研究及应用提供参考的依据。方法鱼腥草破壁饮片和鱼腥草饮片均以7.2 g·kg^(-1)的最大给药量单次灌胃给予大鼠观察毒性反应,并持续观察2周;鱼腥草破壁饮片以1.35、2.70、5.40 g·kg^(-1),鱼腥草饮片1.35、5.40 g·kg^(-1),连续3个月对SD大鼠灌胃给药,恢复期4周,进行临床观察、体重、摄食量、血清生化学、血液学、肾损伤生物标志物及病理学等各项检查。结果鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片以7.2 g·kg^(-1)对SD大鼠单次灌胃给药,未见明显毒性反应;鱼腥草破壁饮片及鱼腥草饮片重复给药3个月,各剂量组各项检查均未见异常。结论鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片单次经口给药对SD大鼠的最大耐受剂量(MTD)>7.2 g·kg^(-1)。鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片对SD大鼠连续灌胃给药3个月的无毒作用剂量(NOAEL)为6.4 g·kg^(-1)。鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片在相同给药剂量下,SD大鼠毒性反应无明显区别。

新药非临床安全药理学研究进展

安全药理学是新药非临床研究的重要组成部分,主要是研究药物剂量≥治疗剂量时,潜在的不期望出现的对生理功能的不良影响。近年来,随着分子生物学和生物技术等的进步,安全药理学的研究内容和研究范围有了较大的拓展。本文从国际国内安全药理学指导原则要求和修订,到中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统安全药理及补充安全药理(胃肠道系统、泌尿系统、血液系统和肝胆系统)等方面,全面综述了新药非临床安全药理学研究进展。

《中华人民共和国药典》收录毒性中药材生殖毒性研究进展

毒性中药材是中药的一个特殊群体,主要由"大毒"、"有毒"和"小毒"类中药材组成,其安全性特别是生殖毒性的研究一直未得到应有的重视。目前报道已开展生殖毒性相关研究的毒性中药材仅20种,且多数研究未依据国际国内《药物生殖毒性研究技术指导原则》开展,研究结果对该类药材生殖毒性风险预测的价值非常有限。建议和鼓励后续进行毒性中药材生殖毒性研究的机构和(或)个人应尽量按照人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)最新版《生殖毒性研究技术指导原则(S5)》,系统、规范地开展研究,逐步积累生殖毒性安全性数据,为中药安全性数据库的建立积累素材。

橘红胎饮片标准汤剂质量评价研究

目的建立橘红胎饮片标准汤剂的质量评价体系,并对其进行质量综合评价。方法制备橘红胎饮片标准汤剂,以出膏率、柚皮苷和野漆树苷转移率及高效液相(HPLC)指纹图谱相似度为评价指标,建立其质量评价体系;并采用灰色关联法对指纹图谱中标定成分进行关联分析,评价16批橘红胎饮片标准汤剂的质量。结果 16批橘红胎饮片中柚皮苷含量为3.34%~29.27%,野漆树苷含量为0.26%~2.82%。橘红胎标准汤剂的出膏率范围为43.36%~51.52%;柚皮苷和野漆树苷的转移率范围为33.62%~144.86%和1.30%~96.00%;指纹图谱确定共有峰19个,其中4个峰指认为柚皮苷(8号)、新橙皮苷(11号)、野漆树苷(12号)、柚皮素(15号);16批标准汤剂指纹图谱相似度均在0.98以上。指纹图谱中4个标定成分的灰色关联度范围为0.096~0.606,加权关联度范围为0.091~0.984。结论该研究建立的标准汤剂质量评价体系中各指标范围均合理可靠,运用指纹图谱中标定成分的灰色关联分析能够实现16批橘红胎饮片标准汤剂的质量综合评价。

视网膜母细胞瘤斑马鱼模型及rb1基因研究进展

视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)是一种常见的发生于婴幼儿眼内的原发恶性肿瘤,大量的研究表明,rb1基因的改变是导致RB发生的主要原因。新型模式生物斑马鱼最近几年被开发成为研究RB的动物模型,本文在介绍rb1基因与RB疾病相关研究新进展的同时,综述了已有报道的RB斑马鱼模型建立方法,包括异种移植法、基因突变法和TALEN基因编辑法,并进一步将RB斑马鱼模型与已有报道的小鼠、大鼠、兔、非洲爪蟾RB动物模型进行了对比。

千根草抗炎镇痛活性部位的筛选研究

目的筛选千根草抗炎镇痛活性部位。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀、乙酸致小鼠腹腔通透性增高和角叉菜胶致小鼠足肿胀抗炎模型,乙酸扭体法和热板刺痛法镇痛模型对千根草乙醇总提取物及其石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水溶部位和水不溶部位进行抗炎镇痛活性的筛选。结果与空白组相比,除水不溶组外,千根草各极性部位组均能够抑制小鼠耳肿胀、乙酸所致的小鼠腹腔通透性增高和小鼠足肿胀(P<0.05);镇痛模型中除水不溶组外,千根草各极性部位组均能抑制乙酸所致的小鼠扭体反应和提高给药90 min时热板所致的小鼠痛阈值(P<0.05)。结论除水不溶部位组,千根草其余各部位组均有抗炎镇痛活性。

嵌合抗原受体-T细胞治疗多发性骨髓瘤研究进展

嵌合抗原受体-T(CAR-T)细胞治疗急性淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤等血液系统肿瘤已取得重大进展,近年来治疗多发性骨髓瘤亦取得突破性进展。CAR是CAR-T细胞中最核心的结构,可赋予免疫效应细胞针对靶抗原表位的特异性而活化T细胞,从而特异性识别抗原。目前CAR的结构已经过5代优化,最新结构为通用型CAR,可同时激活T细胞抗原、共刺激域和细胞因子三重信号,还可通过解除调节性T细胞的抑制效应、插入安全开关以减少脱靶效应。目前全球已有较多针对多发性骨髓瘤多类靶点的CAR-T细胞正进行非临床和临床研究,如靶向B细胞成熟抗原(BCMA)、CD38、CD138、免疫球蛋白κ轻链、CD319、CD56和NK细胞活化型受体NKG2D等,其中以靶向BCMA的研究最多。临床研究发现,CAR-T细胞免疫治疗可能导致细胞因子释放综合征、巨噬细胞活化综合征、神经毒性、脱靶效应和T细胞耗竭等不良反应,其发展仍面临毒性、脱靶和非持久性等许多挑战。实现CAR-T细胞的标准自动化生产及质量、疗效和风险可控仍是目前的首要任务。

生殖毒性替代试验在中药安全性评价中的应用研究进展

中药应用历史悠久,而多数中药,即使是毒性中药,在应用于人体之前并未进行严格的生殖毒性评价。随着中药新药研发工作的全力推进,中药生殖毒性应得到充分重视。体外替代试验是生殖毒性常规评价试验的一种补充,在药物研发的早期阶段能有效降低研发风险,减少研发费用,缩短研发时间,并预警早期毒性。小鼠胚胎干细胞试验、大鼠胚胎细胞微团培养和全胚胎培养试验为欧洲替代方法验证中心验证并推荐的方法,斑马鱼胚胎发育毒性模型是近年来研究并验证的替代试验。近年来,上述试验陆续有在中药生殖毒性研究中应用的报道。根据中药的特点,采用系列替代模型组合策略能更准确预测受试中药的毒性。替代试验优势明显,而中药生殖毒性的评价又需要快捷有效的方法,相信在不久的将来,替代试验将在中药生殖毒性评价中发挥不可或缺的作用。

糖尿病药物的研究进展

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病,近些年来它的发生率越来越高。该文主要阐释糖尿病的发病机制及治疗糖尿病药物的研究进展。综合近几年国内外相关的文献,该文总结了糖尿病发病机理及降糖药物的研究进展。糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等引起。基于糖尿病的不同发病机制,治疗糖尿病的药物也多种多样。对糖尿病的发病机制及不同作用机制的降糖药物进行阐述,这将对糖尿病的治疗具有重大意义。

柘树根不同部位抗炎镇痛药效学及总黄酮含量的比较研究

目的比较柘树根不同部位的抗炎、镇痛活性及总黄酮含量,为其炮制加工方法的确定提供依据。方法通过化学成分分析和药效学研究相结合方法,对柘树根木心、根皮、栓皮、全根进行比较。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验及角叉菜胶致小鼠足肿胀试验进行抗炎作用研究,采用热板法及醋酸扭体法进行镇痛作用研究,采用硝酸铝显色法进行总黄酮含量测定。结果药效学研究结果表明,柘树根不同部位均有一定的抗炎镇痛作用,不同部位组间的药效没有明显差异,但柘树根皮、栓皮、全根在抗炎镇痛方面较木心表现出了更好的作用趋势。总黄酮含量测定结果表明,含量由高到低依次为栓皮>根皮>全根>木心。结论综合考虑到去除木心、栓皮带来的人力损耗以及药材损失,建议柘树根以全根入药。

芩香清解口服液对4日龄大鼠的发育毒性

目的系统考察芩香清解口服液(QXQJ)对4日龄(PND_(4))大鼠生长发育的影响。方法采用交叉抚育法对PND2大鼠进行数量和性别调整,随机分为溶剂对照组及QXQJ 3.45,10.35和28.05 g·kg^(-1)组。PND_(4)起每天ig给予QXQJ,溶剂对照组给予纯水,每天1次,连续给药18 d。给药结束后恢复观察3周。实验期间对各组大鼠一般状况、体重、生长发育、体格、骨骼、血液学和凝血等指标进行检查。结果QXQJ连续给药18 d对幼龄大鼠摄食量、生长发育、神经反射、自发行为、血液学、凝血、血液生化、免疫、生长激素和组织病理等检查指标均未见明显影响。PND5起,QXQJ 10.35和28.05 g·kg^(-1)组幼龄大鼠出现黄棕色软便或稀便以及腹部膨大症状,这些症状于PND_(22)基本恢复;28.05 g·kg^(-1)组幼龄大鼠于PND7起体重、顶臀长、尾长和四肢长较溶剂对照组明显偏低(P<0.05),停药1周后恢复;28.05 g·kg^(-1)组幼龄大鼠PND_(22)骨比重和骨密度显著低于溶剂对照组(P<0.05),PND_(4)2时基本恢复。结论QXQJ可导致未断乳幼龄大鼠出现黄棕色软便或稀便及腹部膨大等消化不良症状,继而影响体格发育,停药或离乳后基本恢复;QXQJ对PND_(4)大鼠连续给药18 d发育毒性的无不良反应剂量(NOAEL)为3.45 g·kg^(-1)。

中药复方馥感啉口服液对不同年龄段SD大鼠发育毒性

目的采用三段式幼龄动物试验(JAS)系统考察馥感啉口服液(FGLOL)在幼龄SD大鼠长期给药后的潜在发育毒性和延迟毒性。方法第一阶段:根据1岁内婴幼儿临床拟用剂量,每天分别ig给予出生后4日龄(PND4)大鼠FGLOL 3.88,11.64和38.75 g·kg^(-1),共18 d,停药恢复3周。第二阶段:根据1~6岁儿童临床拟用剂量,分别ig给予PND15大鼠FGLOL 3.88,11.64和38.75 g·kg^(-1),共31 d,停药恢复3周。第三阶段:根据7~12岁儿童临床拟用剂量,每天分别ig给予PND40大鼠FGLOL 29.06,58.13和116.25 g·kg^(-1)共66 d,停药恢复4周。上述试验均设溶剂对照组,ig给予等体积纯水。考察FGLOL对幼龄大鼠一般状况、摄食量、体重、生长发育、神经反射发育、学习记忆功能(总运动距离,中心、角落和边缘运动距离,潜伏期,工作记忆错误和参考记忆错误)、体格发育(体长)、骨骼发育(骨密度)、血液学(白细胞数、红细胞数和血小板数)和凝血、血液生化(谷氨酸脱氢酶、尿素氮和甘油三酯)以及组织病理变化等的影响。结果三段式JAS中,ig给予FGLOL均未造成大鼠死亡。与溶剂对照组相比,FGLOL组大鼠一般状况无异常,体重、生长发育、神经反射发育、体格发育、骨骼发育、血液学和凝血、血液生化以及组织病理等变化均未见有毒理学意义差异。结论FGLOL对相当于人类<6岁年龄段幼龄大鼠的JAS试验的未见不良反应剂量(NOAEL)为38.75 g·kg^(-1),对相当于人类7~12岁年龄段幼龄大鼠JAS和重复给药毒性试验的NOAEL为116.25 g·kg^(-1)。

酸枣仁汤醇提取物与经典方剂的非临床安全性比较试验

目的通过对大鼠的亚急性毒性试验研究,比较酸枣仁汤醇提取物与酸枣仁汤经典方剂两者的安全性差异。方法酸枣仁汤醇提取物以42、98、140 g·kg^(-1)(生药),酸枣仁汤经典方剂以56、140、224 g·kg^(-1)(生药),连续4周灌胃给予SD大鼠,进行临床观察、摄食量、体重、血液学、血液生化学、病理学等各项检查。结果酸枣仁汤醇提取物140 g·kg^(-1)(原设置为196.465 g·kg^(-1)为最大给药剂量)剂量组动物出现动物死亡、体重负增长、临床观察异常反应明显,网织红细胞数量、网织红细胞百分比升高和红细胞数量、血红蛋浓度降低,98、140 g·kg^(-1)剂量组肝脏重量增加及胸腺减轻,死亡动物肝脏、肾脏出现明显病变;酸枣仁汤经典方224 g·kg^(-1)剂量组动物出现体重增长减慢,网织红细胞数量、网织红细胞百分比升高及红细胞数量、血红蛋浓度与红细胞比容降低。结论酸枣仁汤醇提取物对SD大鼠的无毒作用剂量为98 g·kg^(-1),酸枣仁汤经典方剂对SD大鼠的无毒作用剂量为224 g·kg^(-1),酸枣仁汤醇提取物非临床安全性研究存在较大的安全性风险,毒性反应明显大于经典方剂。

2,4-二硝基氯苯诱导BN大鼠慢性特应性皮炎模型的建立和验证

目的建立2,4-二硝基氯苯诱发的Brown Norway(BN)大鼠特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)模型,并评估验证其在药效试验中的应用。方法BN大鼠随机分为对照组、模型组、他克莫司组。分别于1、3、7、9、12、14、16、19、21、23和25 d对模型组和他克莫司组BN大鼠双耳涂布0.5%2,4-二硝基氯苯(DNCB)溶液,每耳40μL。对照组在相同时间给予等容积的基质溶液。他克莫司组在造模期间给予他克莫司软膏涂抹右耳,连续25 d。试验期间对耳部皮肤进行炎症评分和耳厚度测定;造模26 d后取耳片进行称重;部分耳片组织行苏木素-伊红染色和甲基胺蓝染色,剩余耳片匀浆测定IgE含量。结果模型组自造模9 d起耳厚度明显增加,12 d出现明显的耳组织炎症症状,16~25 d处于高峰阶段;造模26 d,模型组耳重量明显增加,IgE含量明显升高,耳组织呈表皮增厚、表皮内和真皮层炎细胞浸润、肥大细胞浸润等病理改变。他克莫司软膏明显改善上述指标。结论DNCB诱导BN大鼠发展出稳定的AD样症状,适用于药物药效作用评价。

白光诱导大鼠视网膜病变模型的条件探索

目的建立稳定的光诱导大鼠视网膜病变模型。方法SD大鼠在夜间和白昼接受相同时程光照损伤、不同性别大鼠同一时间接受相同时程光照损伤、大鼠散瞳后接受光照损伤,通过检测闪光视网膜电图(FERG)评估视网膜功能。大鼠分别接受4、8、12、16、20和24 h光照损伤后,分别于7、14和21 d后,进行FERG检测和视网膜组织病理学检查。结果昼间光照6 h对大鼠视网膜功能没有明显损伤,但是夜间光照6 h可以使大鼠视网膜功能显著下降。光照损伤后,雄性和雌性大鼠视网膜功能无明显差异,散瞳组和不散瞳组大鼠视网膜功能无明显差异。光照结束后14和21 d,光照8~20 h的大鼠视网膜功能损伤30%~50%,视网膜外核层厚度减少约40%;而光照24 h的大鼠视网膜功能几乎完全丧失,内核层和外核层细胞明显丢失,外核层厚度减少约80%。结论建立白光诱导大鼠视网膜损伤模型用于评价药物对视网膜功能和组织结构的作用。