连翘化学成分、药理作用及安全性评价的研究进展

连翘为临床常用的清热解毒类中药,主要含有苯乙醇苷类、木脂素类、萜类及挥发油、黄酮类等化学成分。大量研究证实连翘具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等多种药理作用,且安全性较高。该文系统综述了连翘的化学成分、药理作用及安全性的研究进展,以总结连翘的相关研究成果,并为其进一步的开发研究和临床应用提供思路。

药物GLP体系下的多场所研究策略

目的:探讨药物非临床研究质量管理规范(Good Laboratory Practice,GLP)体系下多场所研究策略的制定。方法:分析多场所研究开展前对分场所的考察、多场所研究中各级人员的职责与沟通协作方式以及几种多场所研究开展的策略等内容。结果:多场所研究是一项具有一个研究计划和一份最终报告的研究,必须符合GLP,因此应选择完全符合GLP标准的实验室作为分研究场所,在多场所研究开展前应仔细规划,界定好相关人员的沟通方式和职责,专题负责人作为研究的唯一控制点,必须在确保合规方面发挥核心作用。结论:在药物GLP体系下制定符合国内外GLP法规要求的多场所研究策略,必须掌握多场所研究是一项单一研究的原则,选择GLP实验室为分研究场所,仔细规划,各级人员严格履行各自的职责并建立顺畅的沟通方式,专题负责人应充分发挥推动者的角色。

斑马鱼在药理毒理研究中的应用进展

斑马鱼作为一种新型的实验动物模型,具有生命周期短、繁殖率高、胚胎发育迅速且透明、与人类疾病的基因和机制有着高度保守性等优点。这些特定的生理学优势使得斑马鱼被广泛应用于疾病研究和药物研发等领域,也被许多医药研发机构用来评价药物的疗效与安全性。斑马鱼可用于药物筛选、药效学评价、药代动力学研究及安全性评价等方面。然而斑马鱼模型也存在一些局限性,如缺乏实验技术方法的规范性和实验用动物的标准化。本文综述斑马鱼在药理毒理研究中的应用进展,以期为斑马鱼在临床前新药研发的应用中提供参考和帮助。

酸枣仁汤醇提取物与经典方剂的非临床安全性比较试验

目的通过对大鼠的亚急性毒性试验研究,比较酸枣仁汤醇提取物与酸枣仁汤经典方剂两者的安全性差异。方法酸枣仁汤醇提取物以42、98、140 g·kg^(-1)(生药),酸枣仁汤经典方剂以56、140、224 g·kg^(-1)(生药),连续4周灌胃给予SD大鼠,进行临床观察、摄食量、体重、血液学、血液生化学、病理学等各项检查。结果酸枣仁汤醇提取物140 g·kg^(-1)(原设置为196.465 g·kg^(-1)为最大给药剂量)剂量组动物出现动物死亡、体重负增长、临床观察异常反应明显,网织红细胞数量、网织红细胞百分比升高和红细胞数量、血红蛋浓度降低,98、140 g·kg^(-1)剂量组肝脏重量增加及胸腺减轻,死亡动物肝脏、肾脏出现明显病变;酸枣仁汤经典方224 g·kg^(-1)剂量组动物出现体重增长减慢,网织红细胞数量、网织红细胞百分比升高及红细胞数量、血红蛋浓度与红细胞比容降低。结论酸枣仁汤醇提取物对SD大鼠的无毒作用剂量为98 g·kg^(-1),酸枣仁汤经典方剂对SD大鼠的无毒作用剂量为224 g·kg^(-1),酸枣仁汤醇提取物非临床安全性研究存在较大的安全性风险,毒性反应明显大于经典方剂。

胚胎干细胞试验在生殖毒性替代试验中的研究进展

药物生殖毒性评估是药物安全性评价中必不可少的部分。传统生殖毒性试验周期长,动物使用量大,投入资金多,随着“减少、优化、替代(3R)”原则的实施,胚胎干细胞试验(EST)逐渐成为研究和应用的热点。EST是经欧洲替代方法验证中心验证并推荐的生殖毒性全体外替代试验,可在药物研发早期阶段通过全体外检测和快速高通量检测药物的胚胎毒性类型。近年来,为解决EST在体外替代试验中遇到的问题,研究者们对其进行了优化和改进,包括增加化合物验证数量及种类,代谢体系及体内外浓度的选择,增加除心脏以外的分化检测终点(如神经、成骨和血管内皮等);增加定量检测方法,从基因和蛋白水平对分化情况进行分析(如流式细胞荧光分选技术等);增加EST衍生模型(如ReProGlo模型和BeWo运输模型等)以提高EST预测可靠性、模拟代谢活化过程、考虑体内外浓度一致性、对靶器官的毒性、增加定量分析终点。但目前有些检测方法还未明确其判断标准,有待进一步研究。EST更新及优化后,其评价范围不断扩大,风险评估准确性增加,有可能实现自动化、快速且高通量筛选潜在化合物。

生殖毒性替代试验在中药安全性评价中的应用研究进展

中药应用历史悠久,而多数中药,即使是毒性中药,在应用于人体之前并未进行严格的生殖毒性评价。随着中药新药研发工作的全力推进,中药生殖毒性应得到充分重视。体外替代试验是生殖毒性常规评价试验的一种补充,在药物研发的早期阶段能有效降低研发风险,减少研发费用,缩短研发时间,并预警早期毒性。小鼠胚胎干细胞试验、大鼠胚胎细胞微团培养和全胚胎培养试验为欧洲替代方法验证中心验证并推荐的方法,斑马鱼胚胎发育毒性模型是近年来研究并验证的替代试验。近年来,上述试验陆续有在中药生殖毒性研究中应用的报道。根据中药的特点,采用系列替代模型组合策略能更准确预测受试中药的毒性。替代试验优势明显,而中药生殖毒性的评价又需要快捷有效的方法,相信在不久的将来,替代试验将在中药生殖毒性评价中发挥不可或缺的作用。

视网膜母细胞瘤斑马鱼模型及rb1基因研究进展

视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)是一种常见的发生于婴幼儿眼内的原发恶性肿瘤,大量的研究表明,rb1基因的改变是导致RB发生的主要原因。新型模式生物斑马鱼最近几年被开发成为研究RB的动物模型,本文在介绍rb1基因与RB疾病相关研究新进展的同时,综述了已有报道的RB斑马鱼模型建立方法,包括异种移植法、基因突变法和TALEN基因编辑法,并进一步将RB斑马鱼模型与已有报道的小鼠、大鼠、兔、非洲爪蟾RB动物模型进行了对比。

嵌合抗原受体-T细胞治疗多发性骨髓瘤研究进展

嵌合抗原受体-T(CAR-T)细胞治疗急性淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤等血液系统肿瘤已取得重大进展,近年来治疗多发性骨髓瘤亦取得突破性进展。CAR是CAR-T细胞中最核心的结构,可赋予免疫效应细胞针对靶抗原表位的特异性而活化T细胞,从而特异性识别抗原。目前CAR的结构已经过5代优化,最新结构为通用型CAR,可同时激活T细胞抗原、共刺激域和细胞因子三重信号,还可通过解除调节性T细胞的抑制效应、插入安全开关以减少脱靶效应。目前全球已有较多针对多发性骨髓瘤多类靶点的CAR-T细胞正进行非临床和临床研究,如靶向B细胞成熟抗原(BCMA)、CD38、CD138、免疫球蛋白κ轻链、CD319、CD56和NK细胞活化型受体NKG2D等,其中以靶向BCMA的研究最多。临床研究发现,CAR-T细胞免疫治疗可能导致细胞因子释放综合征、巨噬细胞活化综合征、神经毒性、脱靶效应和T细胞耗竭等不良反应,其发展仍面临毒性、脱靶和非持久性等许多挑战。实现CAR-T细胞的标准自动化生产及质量、疗效和风险可控仍是目前的首要任务。

恒河猴肠道寄生虫感染情况调查与控制

为了解恒河猴在实验室饲养环境下的肠道寄生虫感染情况,采用直接涂片法和饱和食盐水漂浮法,对采集的66只试验用恒河猴新鲜粪便进行肠道寄生虫检查,并评估了血液学、血液生化学相关指标以及驱虫药物的驱虫效果。结果显示:从66只恒河猴新鲜粪便中检出类圆线虫和鞭虫2种肠道蠕虫卵囊,感染率分别是9.1%和12.1%,均为单一感染且感染强度较低;感染类圆线虫或鞭虫恒河猴的血液学指标(WBC、RBC、HGB、MCH、MCHC、HCT、MCV、PLT、PDW、MPV、PCT、LYMPH、MONO、EO、BASO)和肝肾功能指标(ALT、AST、ALP、LDH、TP、BUN、CREA)与健康动物无显著差异(P>0.05);连续使用伊维菌素注射液或阿苯达唑伊维菌素片均能有效驱除感染的类圆线虫或鞭虫。结果说明:恒河猴在实验室饲养环境下,其肠道寄生虫的感染种类较少,感染率和感染强度均较低,对动物健康状况无明显影响,通过良好的饲养管理和完善的药物驱虫程序能实现对猴肠道寄生虫病的有效控制。

鱼腥草破壁饮片单次和重复给药毒性试验

目的研究大鼠单次和重复给予鱼腥草破壁饮片后的毒性反应,为临床研究及应用提供参考的依据。方法鱼腥草破壁饮片和鱼腥草饮片均以7.2 g·kg^(-1)的最大给药量单次灌胃给予大鼠观察毒性反应,并持续观察2周;鱼腥草破壁饮片以1.35、2.70、5.40 g·kg^(-1),鱼腥草饮片1.35、5.40 g·kg^(-1),连续3个月对SD大鼠灌胃给药,恢复期4周,进行临床观察、体重、摄食量、血清生化学、血液学、肾损伤生物标志物及病理学等各项检查。结果鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片以7.2 g·kg^(-1)对SD大鼠单次灌胃给药,未见明显毒性反应;鱼腥草破壁饮片及鱼腥草饮片重复给药3个月,各剂量组各项检查均未见异常。结论鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片单次经口给药对SD大鼠的最大耐受剂量(MTD)>7.2 g·kg^(-1)。鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片对SD大鼠连续灌胃给药3个月的无毒作用剂量(NOAEL)为6.4 g·kg^(-1)。鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片在相同给药剂量下,SD大鼠毒性反应无明显区别。

OCT成像辅助的视网膜母细胞瘤斑马鱼模型构建的新方法及活体评价

视网膜母细胞瘤(RB)严重损害儿童视力健康与生命安全。本研究建立了一种光学相干层析成像(OCT)辅助的RB斑马鱼模型构建的新方法,并利用OCT对RB细胞在眼内的分布与存活状态进行活体评估。试验随机选取了24条正常斑马鱼作为研究对象,其中21条鱼用于构建RB斑马鱼模型,具体做法是在OCT实时成像下,通过针剂注射带荧光的RB细胞到其玻璃体内部,剩余3条鱼作为对照。细胞注射后的0、24、48、72 h观察RB细胞的分布与存活状态,同时,建模前后都对斑马鱼的眼睛进行体视荧光显微镜(SFM)成像,以作为对照。结果表明,OCT可高分辨率且大深度地显示斑马鱼玻璃体内RB细胞的三维分布,OCT图像分析可以定量说明RB细胞的数量变化情况,且OCT结果与SFM结果高度匹配。综上所述,斑马鱼模型与OCT成像技术结合的策略有望为RB疾病研究提供新的方法和装备。

实验动物饲料质量的检测与分析

本文主要通过对研究院近几年的实验动物饲料进行统计与检测对比,分析不同种属实验动物饲料的质量情况,对实验动物饲料着重从卫生指标、微生物指标、营养指标三方面进行检测,结合不同厂家饲料质量的情况,分析出实验动物饲料化学污染指标和微生物指标对实验动物健康的影响。

芩香清解口服液对4日龄大鼠的发育毒性

目的系统考察芩香清解口服液(QXQJ)对4日龄(PND_(4))大鼠生长发育的影响。方法采用交叉抚育法对PND2大鼠进行数量和性别调整,随机分为溶剂对照组及QXQJ 3.45,10.35和28.05 g·kg^(-1)组。PND_(4)起每天ig给予QXQJ,溶剂对照组给予纯水,每天1次,连续给药18 d。给药结束后恢复观察3周。实验期间对各组大鼠一般状况、体重、生长发育、体格、骨骼、血液学和凝血等指标进行检查。结果QXQJ连续给药18 d对幼龄大鼠摄食量、生长发育、神经反射、自发行为、血液学、凝血、血液生化、免疫、生长激素和组织病理等检查指标均未见明显影响。PND5起,QXQJ 10.35和28.05 g·kg^(-1)组幼龄大鼠出现黄棕色软便或稀便以及腹部膨大症状,这些症状于PND_(22)基本恢复;28.05 g·kg^(-1)组幼龄大鼠于PND7起体重、顶臀长、尾长和四肢长较溶剂对照组明显偏低(P<0.05),停药1周后恢复;28.05 g·kg^(-1)组幼龄大鼠PND_(22)骨比重和骨密度显著低于溶剂对照组(P<0.05),PND_(4)2时基本恢复。结论QXQJ可导致未断乳幼龄大鼠出现黄棕色软便或稀便及腹部膨大等消化不良症状,继而影响体格发育,停药或离乳后基本恢复;QXQJ对PND_(4)大鼠连续给药18 d发育毒性的无不良反应剂量(NOAEL)为3.45 g·kg^(-1)。

中药复方馥感啉口服液对不同年龄段SD大鼠发育毒性

目的采用三段式幼龄动物试验(JAS)系统考察馥感啉口服液(FGLOL)在幼龄SD大鼠长期给药后的潜在发育毒性和延迟毒性。方法第一阶段:根据1岁内婴幼儿临床拟用剂量,每天分别ig给予出生后4日龄(PND4)大鼠FGLOL 3.88,11.64和38.75 g·kg^(-1),共18 d,停药恢复3周。第二阶段:根据1~6岁儿童临床拟用剂量,分别ig给予PND15大鼠FGLOL 3.88,11.64和38.75 g·kg^(-1),共31 d,停药恢复3周。第三阶段:根据7~12岁儿童临床拟用剂量,每天分别ig给予PND40大鼠FGLOL 29.06,58.13和116.25 g·kg^(-1)共66 d,停药恢复4周。上述试验均设溶剂对照组,ig给予等体积纯水。考察FGLOL对幼龄大鼠一般状况、摄食量、体重、生长发育、神经反射发育、学习记忆功能(总运动距离,中心、角落和边缘运动距离,潜伏期,工作记忆错误和参考记忆错误)、体格发育(体长)、骨骼发育(骨密度)、血液学(白细胞数、红细胞数和血小板数)和凝血、血液生化(谷氨酸脱氢酶、尿素氮和甘油三酯)以及组织病理变化等的影响。结果三段式JAS中,ig给予FGLOL均未造成大鼠死亡。与溶剂对照组相比,FGLOL组大鼠一般状况无异常,体重、生长发育、神经反射发育、体格发育、骨骼发育、血液学和凝血、血液生化以及组织病理等变化均未见有毒理学意义差异。结论FGLOL对相当于人类<6岁年龄段幼龄大鼠的JAS试验的未见不良反应剂量(NOAEL)为38.75 g·kg^(-1),对相当于人类7~12岁年龄段幼龄大鼠JAS和重复给药毒性试验的NOAEL为116.25 g·kg^(-1)。

2,4-二硝基氯苯诱导BN大鼠慢性特应性皮炎模型的建立和验证

目的建立2,4-二硝基氯苯诱发的Brown Norway(BN)大鼠特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)模型,并评估验证其在药效试验中的应用。方法BN大鼠随机分为对照组、模型组、他克莫司组。分别于1、3、7、9、12、14、16、19、21、23和25 d对模型组和他克莫司组BN大鼠双耳涂布0.5%2,4-二硝基氯苯(DNCB)溶液,每耳40μL。对照组在相同时间给予等容积的基质溶液。他克莫司组在造模期间给予他克莫司软膏涂抹右耳,连续25 d。试验期间对耳部皮肤进行炎症评分和耳厚度测定;造模26 d后取耳片进行称重;部分耳片组织行苏木素-伊红染色和甲基胺蓝染色,剩余耳片匀浆测定IgE含量。结果模型组自造模9 d起耳厚度明显增加,12 d出现明显的耳组织炎症症状,16~25 d处于高峰阶段;造模26 d,模型组耳重量明显增加,IgE含量明显升高,耳组织呈表皮增厚、表皮内和真皮层炎细胞浸润、肥大细胞浸润等病理改变。他克莫司软膏明显改善上述指标。结论DNCB诱导BN大鼠发展出稳定的AD样症状,适用于药物药效作用评价。

中药破壁饮片非临床安全性评价的关注点

中药破壁饮片是中药饮片的创新,利用现代超微粉碎技术对中药材进行破壁处理,在增强药效的同时提升了其应用的便捷性,有望临床广泛推广应用。中药破壁饮片临床前安全性评价试验有其独特的考虑要点,但目前国家层面未正式颁布统一的技术标准。文章讨论中药破壁饮片的非临床安全性评价的考虑要点,以期为国内研发者提供参考。

舒泰与赛拉嗪联合使用对巴马小型猪的麻醉效果及影响

试验旨在探究巴马小型猪联合使用不同剂量的舒泰和赛拉嗪的麻醉效果以及对生理指标的影响。对6只巴马小型猪间隔使用舒泰0.75 mg/kg+赛拉嗪6 mg/kg (A组)、舒泰0.75 mg/kg+赛拉嗪12 mg/kg (B组)、舒泰1.00 mg/kg+赛拉嗪8 mg/kg (C组)进行麻醉,不同剂量组麻醉间隔5 d以上,观察麻醉效果,并对肛温、呼吸频率、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MBP)、心电图(ECG)以及血常规和血液生化指标进行监测。结果显示,各组麻醉成功率均为100%,且麻醉状态良好;A组、B组和C组的麻醉诱导时间分别为5.17、4.17、4.67 min,差异不显著(P>0.05);麻醉维持时间分别为49.33、93.50、79.17 min,A组显著低于B组和C组(P<0.05);麻醉恢复时间分别为2.17、2.67、4.67 min,C组显著高于A组和B组(P<0.05);麻醉后各组肛温、呼吸频率、SBP、DBP、MBP在整体上呈降低趋势,且B组和C组的变化更为明显;麻醉后各组Q-T间期首先出现延长,之后逐渐波及QRS波群和P-R间期;麻醉后约24 h,各组猪血常规指标未发生明显改变,而麻醉后A组猪血清尿素氮(BUN)含量以及B组与C组猪血清谷草转氨酶(AST)活性、BUN含量显著高于麻醉前(P<0.05)。研究表明,各剂量组巴马小型猪均快速进入安全且稳定的麻醉状态,且通过调整麻醉剂用量可实现对动物麻醉时长和生理指标影响程度的控制。

丹红化瘀口服液含药血清对氯化钴诱导EA.hy926细胞缺氧损伤的保护作用

目的研究丹红化瘀口服液含药血清对氯化钴(CoCl_(2))诱导人脐静脉内皮细胞(EA.hy926细胞)缺氧损伤的保护作用。方法建立CoCl_(2)诱导EA.hy926细胞缺氧模型,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞超微结构。试剂盒检测细胞上清液的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活力和丙二醛(MDA)水平,RT⁃PCR检测缺氧诱导因子⁃1α(HIF⁃1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达。结果5%~10%丹红化瘀口服液含药血清能增强缺氧损伤细胞的活力(P<0.05,P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),减轻细胞结构损伤,降低细胞MDA水平和升高GSH⁃Px水平(P<0.05,P<0.01),剂量依赖性地下调细胞HIF⁃1α、VEGF、VEGFR1、VEGFR2及iNOS mRNA表达(P<0.01)。结论丹红化瘀口服液含药血清通过抗氧化作用减轻氯化钴诱导的EA.hy926细胞缺氧损伤。

连翘苷体内外抗病毒及解热作用机制

目的研究连翘苷(phillyrin,KD-1)体内外抗病毒及解热的作用机制。方法通过呼吸道病毒感染细胞模型,检测SI指数,考察KD-1体外抗病毒活性;建立流感病毒感染的小鼠模型,检测血凝滴度、肺指数、肺组织病理,探究其体内抗流感病毒和肺炎的作用;建立干酵母致大鼠发热模型,检测体温以及血浆和下丘脑组织体温调节及炎症相关因子,考察其解热作用机制;通过AutoDock Vina软件进行分子对接,将对接结果采用PyMol软件绘制。结果KD-1对H3N2、RSV、E71、AdV-3、HSV-1和HSV-2均有一定的抑制作用(SI>2);KD-1可减少感染肺组织血凝滴度,降低肺指数,并减轻肺部病变,特别是对间质性肺炎作用明显;KD-1可明显降低发热大鼠体温,其解热机制可能与降低大鼠血浆和下丘脑中的PGE_(2)和IL-1β水平有关;分子对接结果显示,KD-1与α-MSH、IL-1β、PEG_(2)、AVP、cAMP等蛋白结合能均<-5 kcal·mol^(-1)。结论KD-1具有较明显的抗病毒、解热和改善肺部炎性病变作用,推测其可通过“标本兼治”综合作用起到抗流感的功效。

馥感啉口服液通过TGF-β1/Smad3信号通路改善肥胖哮喘小鼠气道重塑

目的探讨馥感啉对肥胖哮喘小鼠气道重塑的影响及其作用机制。方法高脂饲料喂养联合OVA诱导建立C57 BL/6肥胖哮喘慢性气道炎症模型,经灌胃馥感啉5.86、11.72、23.44 g·kg^(-1)治疗,末次激发后采用肺功能震荡仪检测呼吸系统阻力(Rrs)、呼吸系统弹性(Ers)、呼吸系统顺应性(Crs);测定白细胞总数;HE及Masson染色观察肺组织病理改变;ELISA法检测IgE及肺组织、TGF-β1、Smad3、SP水平;IHC检测肺组织Smad3、SARA蛋白表达。结果馥感啉抑制小鼠血液中白细胞数量的增加,降低血清中IgE含量;减轻Rrs,和Ers增强,调节呼吸功能。病理结果显示,馥感啉能减轻肥胖哮喘模型炎性细胞浸润和胶原沉积,抑制支气管粘膜增生;ELISA结果显示,小鼠肺组织TGF-β1、Smad3、SP的含量降低;IHC结果表明,馥感啉抑制了肺组织Smad3、SARA蛋白表达量。结论馥感啉抗肥胖型哮喘作用可能通过改善呼吸功能、控制气道炎症,拮抗气道重塑相关。