L-丙氨酰-L-谷氨酰胺对低氧胁迫后军曹鱼幼鱼生长性能、血清生化与抗氧化指标的影响

本试验旨在为探究L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Ala-Gln)对低氧胁迫后军曹鱼幼鱼生长性能、血清生化与抗氧化指标的影响。以低氧胁迫14 d后的军曹鱼幼鱼[(105.16±6.01)g]为研究对象,随机分为4组,每组3个重复,每个重复30尾。4组试验鱼分别投喂Ala-Gln添加量为0(对照组)、0.5%、1.0%、1.5%配制4种等氮等脂的试验饲料,并分别于试验第7、14、28天采集血清进行指标测定。结果显示:1)与对照组相比,在饲喂14与28 d时,1.0%组和1.5%组的增重率和特定生长率显著升高(P<0.05),饲料系数显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,在饲喂28 d时,1.0%组和1.5%组血清中甘油三酯和总胆固醇含量显著降低(P<0.05),所有添加Ala-Gln组血清中葡萄糖、总蛋白和白蛋白含量显著升高(P<0.05),1.5%组血清中谷草转氨酶与谷丙转氨酶活性显著升高(P<0.05)。3)与对照组相比,在饲喂28 d时,1.0%组和1.5%组血清中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著升高(P<0.05),血清丙二醛含量显著降低(P<0.05)。以上结果表明,饲料中添加1.0%Ala-Gln可提高军曹鱼幼鱼血清中TP和ALB的含量以及减少血清中TC和TG的堆积,提高生长性能与抗氧化能力,改善低氧胁迫所带来的氧化损伤。

低温胁迫对军曹鱼幼鱼鳃组织抗氧化能力、细胞凋亡和组织结构的影响

军曹鱼(Rachycentron canadum)鳃组织对水温变化敏感。为探究低温胁迫对军曹鱼幼鱼鳃组织的影响,揭示该鱼应对低温胁迫的响应机制,实验设置2个低温胁迫组(18℃、21℃)和1个对照组(28℃),比较分析鳃组织在胁迫后第0、第4和第7天的氧化应激状态、细胞凋亡和组织结构情况。结果显示,低温胁迫下鳃组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著低于对照组(P<0.05),丙二醛(MDA)浓度显著高于对照组(P<0.05);低温胁迫组鳃组织凋亡相关基因bax、caspase-9、caspase-3、p53和mdm2表达量在第4和第7天时相较于对照组显著升高(P<0.05),bcl-2基因表达量显著降低(P<0.05);TUNEL检测显示低温组鳃组织细胞凋亡率升高;组织学分析表明低温胁迫下鳃组织出现了不同程度的鳃小片排列紊乱、基部增生、融合,上皮细胞和泌氯细胞空泡化等现象。研究表明,低温胁迫抑制了军曹鱼幼鱼的鳃组织抗氧化酶活性,造成氧化损伤,进一步诱导细胞凋亡,破坏鳃组织结构完整性。

复合益生菌对杂交石斑鱼生长性能、抗氧化能力和肠道健康的影响

【目的】探究饲料中添加由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)组成的复合益生菌对杂交石斑鱼(Epinephelus fuscogutatus♀×Epinephelus polyphekadion♂)生长性能、抗氧化能力、肠道组织形态和肠道菌群的影响。【方法】将复合益生菌粉按照0%、0.01%、0.10%和1.00%的质量比例分别添加到杂交石斑鱼的基础饲料中,投喂22 d后测定其生长指标、肠道抗氧化酶活性,HE染色切片观察肠道组织形态与结构,高通量测序分析肠道菌群结构。【结果】与对照组相比,添加组的存活率、特定生长率、增重率无显著差异(P>0.05);添加组MDA活性均显著降低(P<0.05),0.10%组的SOD活性显著升高(P<0.05);添加组的后肠肌层厚度显著增加(P<0.05);后肠绒毛宽度与黏膜层上皮内杯状细胞数量均随着复合益生菌添加量的增加而增加;菌群丰富度(ACE和Chao1)有所增加,但没有显著差异(P>0.05);菌群多样性(Simpson和Shannon)显著增加(P<0.05);添加组鱼肠道菌群中严格梭菌属(Clostridium sensu stricto 1)和Turicibacter的种类相对丰度显著减少(P<0.05);乳杆菌目(Lactobacillales)、拟杆菌门(Bacteroidota)、放线菌门(Actinobacteriota)、颤螺菌目(Oscillospirales)、瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)和Muribaculaceae中的种类相对丰度显著增加(P<0.05);功能预测分析中,添加组鱼的碳代谢、不同环境下的微生物代谢、抗生素的生物合成和次级代谢产物的生物合成相比对照组普遍显著上调(P<0.05)。【结论】饲料中添加该种复合益生菌可改善杂交石斑鱼肠道组织形态及消化吸收功能,强化肠道的抗氧化能力,提高益生菌的相对丰度,加强了肠道菌群对碳源的有效利用,改善肠道免疫平衡,对杂交石斑鱼的肠道健康具有积极作用。

低温胁迫对军曹鱼幼鱼血清生化指标、肝脏抗氧化酶活性及凋亡相关基因表达量的影响

【目的】探究低温对军曹鱼(Rachycentron canadum)幼鱼生理机能的影响。【方法】将军曹鱼幼鱼分别置于28(对照组)、25、21、18℃4种温度条件下,于0、4、7 d取样检测血清生化指标、肝脏抗氧化酶活性和凋亡相关基因表达量。【结果】(1)军曹鱼血清葡萄糖(GLU)含量在4、7 d时28℃组显著高于温度处理组(P<0.05);甘油三酯(TG)含量在0、7 d时21、18℃组显著高于28、25℃组(P<0.05);总胆固醇(T-CHO)含量在21、18℃组所有时间点均显著低于28、25℃组(P<0.05);总蛋白(TP)含量仅在7 d时21、18℃组显著低于28、25℃组(P<0.05);谷丙转氨酶(ALT)活性在0、4 d时18℃组含量显著高于其他组(P<0.05);谷草转氨酶(AST)活性在0 d时28℃组显著低于温度处理组(P<0.05);碱性磷酸酶(AKP)在4、7 d时21、18℃组与28、25℃组有显著差异(P<0.05)。(2)肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性在4、7 d时21、18℃组显著低于28、25℃组(P<0.05);谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性在4 d时21、18℃组显著低于28、25℃组(P<0.05),在7 d时则显著升高(P<0.05)。丙二醛(MDA)含量21℃和18℃组均高于28、25℃组且在7 d时差异显著(P<0.05)。(3)肝脏凋亡相关基因bax、caspase-9、caspase-3、p53、mdm2表达量在温度处理组中均高于28℃组,Bcl-2在0、7 d时18℃组显著低于其他组(P<0.05)。【结论】低温胁迫显著降低军曹鱼幼鱼血清抗氧化相关酶活性,诱导肝脏组织中凋亡相关基因表达,从而造成氧化损伤,促进细胞凋亡。

杉虎斑Galectin-8基因克隆及其在不同阿魏酸水平饲料下的表达响应

Galectin-8是半乳糖凝集素家族的成员,对β-半乳糖苷类能够特异性识别,具有多种生物学功能。为研究杉虎斑(Epinephelus fuscoguttatus♀×E. polyphekadion♂)Galectin-8基因的序列特征、组织表达情况与饲料中添加阿魏酸(ferulic acid,FA)对其表达的影响,使用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)首次克隆得到了其全长cDNA序列。该序列长1 368 bp,其中5’UTR为16 bp,3’UTR为394 bp,开放阅读框(ORF)长960 bp,共编码319个氨基酸。该氨基酸序列在N端和C端上各具有一个糖识别结构域(carbohydrate binding domain,CRD),分别由136和133个氨基酸组成,由长为36个氨基酸的连接肽所连接,并包含两个保守基序H-NPR和WG-EE。同源性与系统发育进化树分析表明,杉虎斑Galectin-8与鞍带石斑鱼的一致性最高,为98.43%,并与其他硬骨鱼类聚为一支。RT-qPCR结果显示,Galectin-8在杉虎斑脾脏中表达量最高,其次是中肾、心脏、肠道、肝脏、头肾和鳃,而在脑、胃、皮肤和肌肉组织中微量表达。饲料中添加40-320 mg/kg的FA时,肠道、肝脏、头肾和脾脏的Galectin-8表达量显著上调(P <0.05),这表明FA可作为免疫刺激剂增强杉虎斑的先天性免疫。然而,杉虎斑Galectin-8的免疫功能尚不清,需要进一步的研究来阐明,以了解其在抵抗病原体入侵中的作用。

军曹鱼nanos1的克隆及其在胚胎和性腺发育过程中的表达分析

旨在探讨军曹鱼nanos1基因(Rcnanos1)的序列特征,及其在胚胎和性腺发育过程中的功能,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆获得Rcnanos1基因的cDNA序列,全长1290 bp,其中5'非编码区139 bp,3'非编码区470 bp,开放阅读框(ORF)681 bp,共编码226个氨基酸。序列多重比对结果显示,RcNanos1氨基酸序列包含两个连续的锌指功能结构域,与尖吻鲈(Lates calcarifer)Nanos1的一致性最高(99.6%)。系统进化分析表明军曹鱼Nanos1与尖吻鲈(Lates calcarifer)和斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的同源蛋白亲缘关系最近。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Rcnanos1在150 dph(days post hatching)军曹鱼的13种组织中均有表达,但在性腺中的表达量显著高于其它组织。胚胎发育过程中,Rcnanos1在早期卵裂阶段的表达水平较低,16细胞期时表达量开始显著升高,并在1 dph仔鱼中的表达量上升至最大值。Rcnanos1在精巢和卵巢首周年发育过程中的表达模式相似,在精巢中(Ⅱ-Ⅴ期),Rcnanos1的表达水平呈逐渐升高趋势,360 dph(Ⅴ期)时的表达量最高;在卵巢中(Ⅰ-Ⅲ期),Rcnanos1的表达量同样在360 dph(Ⅲ期)时达到峰值。由此推测,Rcnanos1基因可能在胚胎和性腺发育过程发挥一定的调控作用,可为揭示军曹鱼生殖细胞发生发育的分子机理提供理论基础。