白芍、赤芍化学成分的高效液相色谱-飞行时间串联质谱分析

目的:分析白芍和赤芍的化学成分。方法:应用优化的高效液相色谱-飞行时间串联质谱法(HPLC-TOF/MS)对白芍和赤芍进行成分分析。结果:利用HPLC法分离得到单萜苷、鞣质、有机酸和黄酮类等化学成分,且在负离子检测模式下,由电喷雾质谱得到其准分子离子峰,结合串联飞行时间质谱信息推测出其中13种主要成分可能的化学结构,并分析了白芍和赤芍中主要化学成分的质谱裂解规律。结论:HPLC-TOF/MS能快速检测和鉴定白芍和赤芍中的化学成分。

中药喘可治对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用机理研究

目的研究中药喘可治(Chuankezhi,CKZ)对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用的机理。方法无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,分别加入巴戟天(Bajitian,BJT)提取物(50μg·mL-1)、淫羊藿(Yinyanghuo,YYH)提取物(100μg·mL-1)和喘可治(50μg·mL-1BJT+100μg·mL-1YYH),预孵育4h后,加入刺激剂,12h后,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69的表达水平。结果与对照组相比,巴戟天提取物处理组中CD3+T淋巴细胞CD69的表达水平明显升高;与刺激组相比,巴戟天提取物可以协同刺激CD69的表达。淫羊藿提取物对静息状态下的CD+3T淋巴细胞CD69的表达作用不明显,但可以抑制刺激剂引起的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。与前两者相比,喘可治则呈现明显的双向免疫调节作用,即上调静息状态的CD+3T淋巴细胞CD69的表达,下调刺激状态的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。结论喘可治对T淋巴细胞活化的双向调节作用是巴戟天和淫羊藿共同作用的结果,其中巴戟天具有促进免疫应答的作用,而淫羊藿具有抑制免疫应答的作用。

拟巫山淫羊藿的megastigmane糖苷和苯丙醇类成分

为了解拟巫山淫羊藿(Epimedium pseudowushanese B.L.Guo)的化学成分,其从地上部分水提物中分离得到2个megastigmane糖苷和4个苯丙醇类化合物。通过波谱分析,分别鉴定为淫羊藿次苷B6(1)、megastigman-5-ene-3,9-diol 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(2)、丁香酚芸香糖苷(3)、2-羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(4)、2,3-二羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(5)、2,3-二羟基-1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-丙酮(6)、二氢松柏基醇γ-O-α-L-鼠李糖苷(7)。其中化合物2和7为新化合物,所有化合物均为首次从拟巫山淫羊藿中分离得到。

喘可治注射液增强细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤活性的初步研究

目的通过喘可治注射液对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的表型及细胞因子分泌情况的影响,探讨喘可治注射液对CIK免疫活性的免疫调节作用。方法分离健康志愿者的外周血单个核细胞,在细胞因子的作用下,体外培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),在培养过程中同时加入喘可治注射液。LDH法检测不同浓度喘可治注射液培养条件下的CIK细胞的抗肿瘤活性。流式细胞术检测CIK细胞表型及细胞内因子的分泌情况变化。Annexin V/PI凋亡试剂盒检测CIK细胞的凋亡情况。结果喘可治注射液能提高CD3+CD56+双阳性的CIK细胞的比例,增强其杀伤肿瘤细胞的活性,促进具有抗肿瘤效应的Th1型的细胞内因子IFN-γ、TNF-α的分泌,而对CD4+CD25+抑制性细胞和Th2型的细胞因子IL-4的分泌影响不大。喘可治注射液对CIK细胞的凋亡没有明显作用。结论喘可治注射液可上调CIK细胞分泌Th1型的细胞因子,增强CIK细胞的抗肿瘤活性。

喘可治抑制灭活HIV-1颗粒诱导人CD4+T细胞凋亡机制研究

目的通过深入研究HIVp对CD4+T细胞凋亡的影响,以探讨HIV病中CD4+T细胞丢失的可能机制以及喘可治(CKZ)对CD4+T细胞凋亡的调控作用。方法 AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量;然后将HIVp加入到PBMCs中,使p24抗原终浓度为1 ng.mL-1;在相应的组中加入喘可治,使其终浓度为40μL.mL-1(v/v)。48 h后,运用荧光标记的An-nexin V染色技术结合流式细胞术评价CD4+T细胞的凋亡率;运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测CD4+T细胞CD95和DR5的表达;运用胞内免疫荧光抗体染色技术和分子探针染色技术结合流式细胞术检测CD4+T细胞Apo2.7和线粒体内膜膜电势(△ψm)的水平。结果与对照组相比,HIVp可以引起明显的CD4+T细胞凋亡(P<0.01),而喘可治能够有效抑制HIVp引发的CD4+T细胞凋亡(P<0.01)。结论 HIVp通过外源性凋亡途径和内源性凋亡途径删除CD4+T细胞,从而导致免疫缺陷;喘可治能够保护CD4+T细胞而有望开发成为艾滋病治疗的辅助药物。

苍耳子水提取物UPLC和HPLC特征图谱的比较研究

目的通过建立并比较苍耳子水提物的超高效液相色谱(UPLC)和常规高效液相色谱(HPLC)的特征化学图谱,筛选苍耳子药材品质控制的优化方案。方法分别建立苍耳子药材水提物的UPLC和HPLC特征化学图谱分析方法,比较2种方法的分离能力、分离效率以及检测灵敏度等。UPLC检测色谱条件如下:色谱柱为Agilent SB-C18柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm);柱温为35℃;流动相A为甲醇,B为0.1%(体积分数,下同)H_3PO_4(p H=2.3),梯度洗脱;流速为0.4 m L/min;检测波长为220 nm。HPLC检测采用Waters Symmetry C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温为35℃;流动相A为甲醇,B为0.1%(体积分数)H_3PO_4(p H=2.3),梯度洗脱;流速为1.0 m L/min;检测波长为220 nm。结果分别建立了27批不同产地苍耳子药材的UPLC和HPLC特征图谱,共检测到16个共有色谱峰,指认了其中10个色谱峰的化学归属。结果表明,UPLC法可大大缩短苍耳子药材水提取物的分析时间,且检测灵敏度也有显著提高,说明UPLC法在分离能力和分离效率方面明显优于HPLC法。结论与HPLC法相比,UPLC法既达到了分析的高通量,得到更高的分析灵敏度;又大大提高了分析速度,减少了有机溶剂的消耗。UPLC法测定中药材苍耳子水提取物的特征图谱可为其质量控制提供更为高效快速的检测方法。

喘可治注射液治疗慢性阻塞性肺疾病急性发作的疗效观察

目的观察肌肉注射喘可治治疗慢性阻塞性肺疾病急性发作(AECOPD)患者的疗效和安全性。方法将AECOPD患者90例随机分为治疗组60例和对照组30例,两组患者入院后进行常规持续低流量吸氧、解痉平喘、抗感染、化痰、维持水电质平衡及对症处理。治疗组在对照组治疗基础上,加用喘可治注射液肌肉注射治疗,疗程均为一周,比较治疗前后两组的肺功能指标第1秒用力呼气量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV1/FVC)的改善、疗效及不良反应。结果治疗组在改善肺功能及临床症状方面优于对照组,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);在不良反应方面,观察期间,治疗组未发现明显的不良反应。结论喘可治注射液治疗AECOPD安全、有效,值得临床进一步推广使用。

喘可治注射液缓解阿霉素对4T1移植瘤小鼠的心脏毒性

目的考察喘可治注射液(淫羊藿、巴戟天等)与阿霉素联合用药对4T1乳腺癌移植瘤小鼠的治疗作用和对阿霉素心脏毒性的缓解作用。方法建立小鼠乳腺癌移植瘤模型。随机分为4组,生理盐水组、阿霉素组、喘可治注射液组、联合用药组。测量各组小鼠生存情况、肿瘤体积、抑瘤率,计算联合用药参数Q值,测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性,心脏病理学切片。结果联合用药组生存率高于阿霉素组;联合用药组和阿霉素组的瘤质量及抑瘤率进行比较,没有显著性差异;联合用药组和阿霉素组的CK-MB分别为(1 123.26±166.56)U/L和(1 246.12±170.42)U/L;心脏病理学切片显示联合用药组的心肌损伤较阿霉素组轻。结论喘可治注射液与阿霉素抗肿瘤作用无明显协同效应,但能够降低阿霉素的心脏毒性。

巴戟天的高效高压差低温连续式提取技术(HHLSE)研究

目的采用高效高压差低温连续式提取技术(HHLSE)对巴戟天水提工艺进行研究,以期为羊藿巴戟天口服液的HHLSE工艺研究提供依据。方法以耐斯糖为检测指标,配合含固比,以加水量、提取次数、提取压差为考察因素,应用L9(34)正交试验,筛选HHLSE提取耐斯糖的最佳水提工艺条件。结果 HHLSE提取耐斯糖的最佳水提工艺条件为:药材加30倍的水在-0.1～35MPa压差下提取1次;耐斯糖的提取保留率可达80%以上,含固比也较高。结论该工艺过程稳定,可以为羊藿巴戟天口服液的HHLSE工艺研究提供技术支持。

西藏绿萝花中黄酮和还原糖含量测定研究

绿萝花作为一种降血压民间藏药已有很长的历史。本文采用光谱法对绿萝花中还原糖类和黄酮类成分进行定量测定,并利用正交设计优选总黄酮的提取条件。总黄酮提取的最佳条件是:用70%乙醇在50℃下超声波提取1.5h,1次,提取体积80mL。所得总黄酮的测定含量为0.994%,RSD=0.14%(n=4)。采取超声波提取法提取还原糖,并对其含量进行测定。所得还原糖的测定含量为1.486%,RSD=2.21%(n=4)。

淫羊藿中淫羊藿苷的高效高压差低温连续式提取技术(HHLSE)研究

目的:采用高效高压差连续式低温提取技术(HHLSE)对淫羊藿水提工艺进行研究,以期为羊藿巴戟天口服液的HHLSE工艺研究提供依据。方法:以淫羊藿苷为指标,配合含固比,以加水量、提取次数、提取压差为考察因素,应用L9(34)正交试验,筛选HHLSE提取淫羊藿苷的最佳水提工艺条件。结果:HHLSE提取淫羊藿苷的最佳水提工艺条件为:药材加15倍水在-0.1～35MPa压差下提取2次,每次1.5h;淫羊藿苷的提取率可达80%以上,含固比也较高。结论:该工艺过程稳定,为羊藿巴戟天口服液的HHLSE工艺研究提供了技术支持。

高效液相色谱法测定食品中胭脂虫红的含量

本文建立了食品中胭脂虫红的高效液相色谱检测方法。样品用磷酸水提取,经微孔滤膜过滤,采用C_(18)色谱柱分离,在乙腈-0.5%H_3PO_4溶液流动相下分离,检测波长为275 nm。结果表明:胭脂虫红在0.5~50 mg/kg范围内,具有较好的线性关系;方法定量限为0.1 mg/kg;加标回收率为89.3%~98.8%,相对标准偏差为1.58%~3.12%。该方法简便、准确度高,适于食品中胭脂虫红含量的测定。

时间分辨荧光免疫分析法测定沙丁胺醇的含量

采用直接竞争的方式,游离SAL和固相SAL-OVA包被原共同竞争有限的铕标SAL单抗,初步建立SAL时间分辨免疫分析方法。研究发现,优化的TRFIA半抑制量IC_(50)为1.6 ng/mL,检测范围为0.39~12.77ng/mL,最低检测限为0.136 ng/mL。

HPLC同时测定赤芍和白芍中没食子酸等6种成分的量

目的建立同时测定赤芍Paeoniae Rubra Radix和白芍Paeoniae Alba Radix中没食子酸、没食子酸甲酯、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷的HPLC方法,测定和比较32批不同产地和收集地赤芍和白芍中6种化学成分的量。方法采用HPLC法进行测定,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,体积流量0.8 m L/min,柱温30℃,检测波长为230 nm和270 nm。结果结果显示,没食子酸、没食子酸甲酯、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷分别在0.783~50.10、1.094~70.00、2.367~151.5、7.823~500.6、3.125~200.0和0.348~22.25μg/m L内具有良好的线性关系（r2=0.999）,平均回收率分别为102.1%、98.88%、99.25%、100.4%、104.2%、100.6%。结论赤芍和白芍药材样品中芍药内酯苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、没食子酸和没食子酸甲酯的量差异较显著,除芍药苷外,单萜苷类成分在白芍中量明显较高,而多元酚类化合物在赤芍特别是川赤芍中量普遍居高。

喘可治注射液联合化疗治疗老年非小细胞肺癌近期疗效观察

目的观察喘可治注射液联合化疗治疗Ⅲ、Ⅳ期老年非小细胞肺癌(NSCLC)的近期疗效。方法采用前瞻性、随机、对照的临床研究方法,将62例老年NSCLC病例按1∶1比例分为试验组(喘可治注射液+中医辨证论治+化疗)和对照组(中医辨证论治+化疗),其中试验组32例,对照组30例。观察喘可治注射液联合化疗对瘤体大小、临床症状、体力状况(PS)评分、体质量的影响及化疗副反应。结果试验组、对照组瘤体大小疗效评价:有效率(ORR)分别为31.3%、16.7%,稳定率(DCR)分别为84.4%、73.3%,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。试验组咳嗽、咯痰、夜尿频多、畏寒肢冷等临床症状缓解率优于对照组(P<0.05);试验组的PS评分改善优于对照组(P<0.05);试验组治疗后体质量增加率及稳定率均高于对照组(P<0.05);试验组骨髓抑制程度较对照组轻,其中白细胞及中性粒细胞变化有统计学意义(P<0.05)。结论喘可治注射液应用于Ⅲ、Ⅳ期老年NSCLC化疗患者具有增效减毒的协同作用,能明显改善临床症状、提高PS评分,维持体质量及有效减轻骨髓抑制。

喘可治注射液联合化疗对老年非小细胞肺癌患者生存质量的影响

【目的】观察喘可治注射液足三里穴位注射联合化疗对Ⅲ、Ⅳ期老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者生存质量的影响。【方法】采用前瞻性、随机、对照的临床研究方法 ,将62例老年NSCLC病例随机分为试验组32例(喘可治注射液足三里穴位注射+中医辨证论治+化疗)和对照组30例(中医辨证论治+化疗)。采用世界卫生组织(WHO)生存质量老年模块量表(WHOQOL-OLD)、肺癌治疗功能评价表(FACT-L V4.0)及简明疲劳量表(BFI)对治疗前后的生存质量变化进行评价分析。【结果】(1)在WHOQOL-OLD评价中,试验组治疗后在感觉能力、自主、过去现在和将来行为、社会参与等4个模块及总分均有显著改善(P<0.01),而对照组仅在社会参与模块及总分有改善(P<0.01),试验组的自主模块评分差值较对照组高(P<0.01)。(2)在FACT-L V4.0评价中,试验组治疗后在生理状况、情感状况、功能状况、附加关注等4个领域及总分均有显著改善(P<0.01),而对照组仅在情感状况、附加关注领域及总分有显著改善(P<0.01),试验组在生理状况、功能状况及附加关注等3个领域的评分差值较对照组高(P<0.01)。(3)在BFI评价中,2组均能改善老年NSCLC患者的疲劳程度及疲劳影响情况(P<0.01),且试验组的改善效果优于对照组(P<0.05)。【结论】喘可治注射液足三里穴位注射能够改善老年NSCLC化疗患者在感觉能力、自主、过去现在和将来行为、社会参与等模块,以及生理状况、功能状况、附加关注等领域的生存质量,并能改善患者疲劳程度及疲劳影响情况。

液质联用同时测定喘可治注射液中4种黄酮苷含量

目的建立同时测定喘可治注射液中朝藿定A,B,C和淫羊藿苷的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18柱（150 mm×2.1 mm,5.0μm）,以乙腈-0.1%甲酸水溶液（35∶65）为流动相进行色谱分离,流速0.22 m L·min^-1,柱温40℃;在负离子检测模式下采用多反应监控（MRM）,以柚皮苷为内标测定朝藿定A,B,C和淫羊藿苷。结果朝藿定A,B,C和淫羊藿苷4种成分在API 3000液质联用系统仪上的定量限均为0.04 ng·m L^-1、检测限均为0.05 ng·m L^-1。4种黄酮成分在1.0-1000.0 ng·m L^-1呈现良好的线性关系（r〉0.9950）,加样回收率在90.11%-100.3%之间,RSD〈2.89%（n=6）,方法重复性及精密度良好;4种黄酮苷在15批喘可治注射液中的含量比较稳定,且符合国家药品标准要求。结论所建立的液质联用定量方法灵敏、准确、稳定,适用于喘可治注射液4种主要黄酮苷的快速测定,可用于喘可治注射液的质量控制。

巴戟天寡糖在提取过程中化学稳定性的研究

摘要：目的考察巴戟天寡糖在不同溶媒中的化学稳定性。方法以水、乙醇、不同pH值水溶液为介质提取巴戟天寡糖，利用高效薄层色谱法检测其变化规律，探讨不同提取介质对其化学稳定性的影响。结果巴戟天寡糖在以不同提取时间的水溶液为介质进行提取时，0．5h后即开始水解，巴戟天寡糖含量逐渐下降，果糖与蔗糖含量逐渐增高，并产生新的未知成分；巴戟天寡糖在以不同体积分数的乙醇溶液为介质进行提取时，仅在乙醇溶液体积分数为10％～30％内发生少量水解，并产生少量未知成分；巴戟天寡糖在以不同pH值水溶液为介质进行提取时，在pH2和3时基本被水解，pH4和5时大部分被水解，并产生较多新的未知成分，pH为6～10时巴戟天寡糖趋于稳定。结论巴戟天寡糖在水中不稳定，在乙醇溶液中相对稳定，在不同pH值水溶液中变化差异较大。

喘可治注射液在大鼠体内的药物代谢研究

探讨喘可治注射液在大鼠体内的代谢转化。选择SD大鼠12只,分为两组,分别为对照组和肌肉注射给药组,收集给药后0~24 h、24~48 h粪便和尿液样品,给药后0.5、2和24 h血样,甲醇超声提取,沉淀蛋白,高效液相色谱-串联线性离子阱静电场轨道阱质谱仪检测。通过比较给药组和对照组的总离子流色谱图,对粪便、尿液以及血浆中推测的代谢物和标准物质的出峰时间及相关化合物的多级串联质谱数据进行了分析,结果在大鼠尿液中未检测到相关代谢产物;在大鼠给药后0.5 h血样中可检测到在喘可治注射液中含量较大的原形药物,如朝藿定C和淫羊藿苷,但未能检测到其他原形药物和相关代谢产物,而大鼠给药后2和4 h血样中则均未能检测到原形药物和相关代谢产物;在大鼠粪便中发现了12种黄酮类代谢产物,系统分析了这些代谢产物的代谢转化规律及可能结构。大鼠体内喘可治注射液所含化学成分的主要代谢转化途径为脱糖、脱水、氧化、甲基化和异构化代谢反应等。

热休克蛋白与肺癌相关性的研究进展

热休克蛋白作为细胞抵抗外界刺激的产物,能够快速清除异常或变性蛋白而保护细胞免受损伤。近年来研究发现肿瘤细胞中热休克蛋白的水平高于正常细胞,过度表达的热休克蛋白在肿瘤的发生发展过程中起重要作用,且影响肿瘤的治疗效果。本文概述了热休克蛋白与肺癌相关性的研究,总结用于肺癌治疗的热休克蛋白抑制剂的研究现状,并探讨了从中药中筛选高效低毒热休克蛋白抑制剂的可行性,为研究肺癌发病机理及开发高效肺癌药物提供相关参考。