中药种质资源生物化学的学科探讨

中药种质资源生物化学是现代科学技术迅速发展并不断向中药资源学渗透而产生的一门二级交叉学科,指利用生物化学及分子生物学、化学等技术手段,系统研究中药基原物种种质(简称:中药种质)的遗传变异、基因转录、蛋白表达与物质代谢,阐明中药种质特征及其形成的分子调控机制,旨在为中药种质鉴别、优化,中药及药效活性成分的生产提供生物化学理论知识基础。本文就中药种质资源生物化学学科产生的时代背景、概念、意义、定位、研究内容等进行了论述,冀求广大同仁的共鸣与探讨。

南药青天葵资源和分子生物学研究进展

对青天葵资源和分子生物学研究进展进行综述。近年来青天葵资源和分子生物学的研究涉及青天葵原植物与生药学鉴定、人工栽培和组织培养、分子鉴定及功能基因等方面,这些技术研究内容主要包括青天葵多倍体培养、分子鉴定、遗传多样性、转录组特征及功能基因克隆等。应用现代分子生物学技术已实现了青天葵及其近缘种、混伪品的分子鉴定,全面揭示了其遗传多样性及品种间的亲缘关系;通过构建青天葵转录组数据库,促进了对该植物的生长发育和代谢调控等相关功能基因的研究。近年来青天葵资源和分子生物学研究虽已取得一定成果,但尚未能真正解决青天葵资源匮乏的关键问题。今后可利用青天葵转录组数据及其基因资源,大规模挖掘基因信息,深入研究候选基因的功能,明确青天葵生长发育过程中的基因调控网络,利用基因工程手段保护青天葵的种质资源和促进种质资源开发进程。

中药破壁饮片安全性研究进展及思考

本文初步总结了影响中药破壁饮片安全性的潜在风险因素,并对中药破壁饮片安全性研究的进展进行综述,就其存在的问题进行了思考及探讨,并提出破壁饮片安全性研究需要重点深入探索重复给药毒性、对胃肠道组织影响、不同剂量对肠道菌群影响的变化规律、安全性评价方法研究等关键要点,以期进一步推动破壁饮片安全性研究的深入开展。

中药饮片中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的液质联用检测分析

目的应用高效液相色谱-串联质谱联用技术,建立中药饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和玉米赤霉烯酮等5种霉菌毒素的同时检测方法,并对市售中药饮片进行分析。方法样品经84%乙腈提取,浓缩后不经纯化步骤直接进C18色谱柱分离,选用4.0 mmol/L NH4Ac-0.1%甲酸水溶液和甲醇作为流动相,在20 min内经线性梯度洗脱将5种真菌毒素得以分离。质谱采用ESI源,在选择反应监测模式下进行正负离子同时检测。结果经方法学验证,5种真菌毒素在各自定量范围内呈现良好的线性关系,r>0.990,平均回收率在62.4%～124%之间。结论该方法具有预处理简便、快速等优点,适用于多种中药饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和玉米赤霉烯酮的测定。

茜草中大叶茜草素、羟基茜草素含量测定方法优化的实验研究

目的 优化茜草中大叶茜草素、羟基茜草素的HPLC含量测定方法。方法采用LUBEXEcosilC18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-乙腈-0．05％磷酸水（25：50：25），流速1．0mL·min-1检测波长为250nm。结果大叶茜草素和羟基茜草素分别在19．34—161．20μg·mL-1（r=0．9999）和12．16～101．30μg·mL-1（r=0．9999）范围内呈良好线性，平均回收率分别为97．27％（RSD=1．91％）和100．00％（RSD=1．87％）。结论该方法操作简单，重复性好，可作为茜草中大叶茜草素和羟基茜草素的含量测定方法，为合理制定茜草的含测方法提供参考。

中药粉体的发展历史概述

鉴于中药粉体入药的重要性,主要从中药生药粉和中药浸膏粉的历史演变、中药粉体出现并流传的原因、存在的不足以及改革的必要性进行综述,为进一步对中药粉体入药的研究提供参考。

从中药的不同业态看中药产业的整体发展趋势

本文对几种中药应用形式(传统饮片、配方颗粒、经典名方标准颗粒、中成药、天然药物)的市场表现及相应的技术特点进行简要分析。在一定时期内,几种应用形式在各自发展的情况下相互补充,难以形成一枝独秀的局面。随着饮片代煎服务的进一步完善、经典名方标准颗粒的上市,可能会解决目前中药配方颗粒和中成药面临的问题,进一步提升中药的市场竞争力。而疗效确切的天然药物、中药小复方有望成为中药行业新的增长点。

改进的CTAB法提取32种中药破壁饮片DNA及物种鉴定

中药破壁饮片是由传统中药饮片经过气流破壁技术加工而成,已失去了原药材原有的外观性状特征,传统的鉴别方法已很难鉴别其真伪。本研究选用ITS2序列作为DNA条形码对32个中药破壁饮片品种进行研究,验证DNA条形码技术应用于中药破壁饮片上的可行性。通过提取32个品种的DNA、PCR扩增及双向测序获得ITS2序列,在中药材DNA条形码鉴定系统和NCBI数据库中进行比对。实验结果表明:32个品种通过改良的CTAB法均能成功提取DNA,PCR扩增及测序后均能得到高质量的ITS2序列。因此,基于ITS2序列的DNA条形码技术可有效地鉴定中药破壁饮片,为中药破壁饮片真伪鉴别提供有效手段。

两面针与混伪品及近缘种DNA条形码鉴定研究

【目的】探讨DNA条形码技术对两面针真伪鉴定的可行性,为两面针种质资源的鉴定提供参考。【方法】对两面针及其常见混伪品和同属近缘种(10种31份样品)进行DNA提取、PCR扩增和双向测序,所得序列经CodonCode Aligner软件处理和人工校对,采用TaxonGap法比较rbcL、trnH-psbA和ITS2等3条序列的物种鉴定力大小;选择适用条形码在不同物种样品范围内进行分析,检查种内种间距离变化情况。【结果】ITS2和trnH-psbA两条序列对10个试验物种的鉴定效率均为100.0%,rbcL在实验物种范围内不存在最小种间遗传距离;ITS2序列在样品鉴定范围由12个物种33个数据扩大为33个物种132个数据时,鉴定成功率从100.0%下降至84.8%,种内变异大于种间变异的比例由71.4%上升至90.1%。【结论】ITS2和trnH-psbA序列可作为两面针真伪鉴定的标准条形码,实际应用中应注意确定物种鉴定样品数及种内充分取样。

化州柚花挥发油的GC-MS分析及其对肺癌细胞A549增殖、迁移的影响研究

目的:提取化州柚花挥发油,鉴定其成分,并评价其对肺癌细胞A549增殖、迁移的体外抑制作用。方法:采用水蒸气蒸馏法提取化州柚花挥发油;采用气质联用法(GC-MS)分析其化学组成,以峰面积归一化法计算各组分的相对百分含量;采用MTT法检测其对肺癌细胞A549增殖的抑制作用,计算细胞相对活力和增殖抑制率;采用细胞划痕实验评价其对肺癌细胞A549迁移能力的影响,计算相对迁移面积和迁移抑制率。结果:从100 g化州柚花中提取得到挥发油0.7 g,得率为0.7%。共从中分离得到了46个组分,鉴定了其中35个组分,占总峰面积的96.95%;相对百分含量较高的化合物包括D-柠檬烯(28.43%)、γ-萜品烯(20.74%)、β-月桂烯(11.97%)、芳樟醇(7.41%)等。与空白对照组比较,120 mg/L化州柚花挥发油可显著降低肺癌细胞A549的相对活力(P<0.05),增殖抑制率上升至21.72%;而1、5、10、20、40、60、80、100 mg/L化州柚花挥发油对肺癌细胞A549的相对活力均无显著影响(P>0.05)。作用24、48 h时,60、120 mg/L化州柚花挥发油可显著缩小肺癌细胞A549的相对迁移面积(P<0.05),迁移抑制率分别为132.46%、125.08%(24 h)和124.54%、124.66%(48 h);而30 mg/L化州柚花挥发油对肺癌细胞A549的相对迁移面积均无显著影响(P>0.05)。结论:GC-MS法可用于鉴定化州柚花挥发油的化学组成。化州柚花挥发油以D-柠檬烯、γ-萜品烯、β-月桂烯等成分为主,对肺癌细胞A549的增殖、迁移能力具有一定的体外抑制作用。

榴莲皮提取物抗炎作用研究

【目的】探讨榴莲皮提取物(DPE)的抗炎效果及其作用机制。【方法】采用角叉菜胶致小鼠足跖肿胀及2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)引起小鼠变应性接触性皮炎实验模型评价DPE的体内抗炎效果;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法以及脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞炎症模型评估体外抗炎效果。【结果】在体内实验,与空白组比较,DPE各剂量组对角叉菜胶诱发的小鼠足跖肿胀抑制效果显著(P<0.01或P<0.001),DPE对2,4-DNFB所致小鼠变应性接触性皮炎也呈现明显的抑制作用,且作用效果具有较好的量效关系。在体外实验,在给定的浓度下DPE不影响细胞增殖;25 mg/L与50 mg/L DPE可有效地抑制炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、一氧化氮(NO)以及转录因子核因子-кВ(NF-кВ)含量,提高白细胞介素-10(IL-10)等抗炎因子含量。【结论】DPE具有较好的抗炎作用,其作用可能与DPE抑制NF-кВ信号通路相关。

岗梅种苗质量分级标准研究

目的：研究岗梅种苗质量分级标准。方法：测量1年生岗梅种子实生苗的株高、株径、根长等参数,通过多种方法进行分级获得分级标准,以不同级别存活苗分布情况来评价3种质量分级方法。结果：确定以种苗参数K-聚类法进行质量分级,将岗梅种苗分为三级,其中一级种苗株高≥59cm,根长≥22cm,株径≥6.96mm;二级种苗株高43～59cm,根长18～22cm,株径4.88～6.96mm;三级种苗株高15.5～43cm,根长10～18cm,株径2.18～4.88mm。结论：建立了适用于生产实践的岗梅种苗质量分级标准。

青天葵及其混伪品的rbcL基因序列鉴定研究(英文)

本研究旨在利用植物DNA条形候选片段rbcL基因的序列信息鉴别青天葵及其混伪品。采用试剂盒法提取青天葵及其混伪品的叶片总DNA,一对通用引物应用于PCR扩增和双向测序。采用DNAMAN、CLUSTALX和MEGA4.0等软件进行序列拼接比对、遗传距离分析和聚类分析。获得的青天葵及其混伪品rbcL基因序列长度为502 bp,3个类型的青天葵序列完全一致,它们与毛叶芋兰之间存在5处差异;青天葵种内K2P遗传距离小于其与混伪品的种间K2P遗传距离;NJ聚类树显示,各物种均表现出单系性,并与其它物种相互区别。表明rbcL基因可用于鉴别青天葵及其混伪品。

岗梅根、茎体外抗呼吸道病毒的作用比较研究

目的:观察比较岗梅根和岗梅茎水提物对多种呼吸道病毒的抑制作用,为岗梅药材扩大药用部位提供参考。方法:分别接种甲1型流感病毒FM1株、呼吸道合胞病毒、鼻病毒R14型、腺病毒3型和副流感病毒3型于MDCK、A549、HEL和LLC-MK2细胞,采用鸡红血球凝集法观察岗梅根、茎水提物对甲1型流感病毒FM1株的抑制作用,采用细胞病变抑制法(CPE)观察岗梅根、茎水提物对呼吸道合胞病毒、鼻病毒R14型、腺病毒3型和副流感病毒3型的抑制作用。结果:在无毒浓度下,岗梅根水提物能抑制甲1型流感病毒FM1株、腺病毒3型、合胞病毒RSV和副流感3型病毒,而岗梅茎水提物仅能抑制腺病毒3型及呼吸道合胞病毒RSV。结论:岗梅根、茎水提物均有一定的体外抗呼吸道病毒作用,岗梅根水提物体外对呼吸道病毒的抑制作用略优于岗梅茎。

止咳平喘类中成药中9种非法添加化学成分的定性定量检验方法研究

【目的】建立检测止咳平喘中成药中9种非法添加化学成分的定性定量检验方法。【方法】采用超高效液相色谱—四级杆—飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF)联用技术对止咳平喘类中成药中非法添加的9种化学成分进行定性筛查,经筛查为阳性的样品用高效液相色谱法(HPLC)对止咳平喘中成药中非法添加的9种化学成分进行含量检测。色谱柱采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈及甲酸铵缓冲液(p H 3.65),梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,检测波长为225 nm和280 nm。【结果】通过对5批止咳平喘类中成药进行检测,检出1批样品含有磷酸可待因,含量为0.84 mg/m L。【结论】本法简便准确,灵敏度高,适用于止咳平喘类中成药中9种非法添加化学成分的检测。

岗梅种子检验规程研究

目的建立岗梅种子的检验方法。方法参考《国际种子检验规程》和《农作物种子检验规程》的方法,通过对岗梅种子扦样、真实性、净度、发芽率、含水量、生活力及千粒重等7项指标进行研究,确定各指标标准检验方法。结果扦样时种子批的最大总质量可选为5000 g,送检样品的质量最少为150 g;真实性可利用岗梅种子外观结构、大小和颜色等形态特征进行鉴定;净度分析可按照GB/T 3543.1-1995《农作物种子检验规程总则》中的相关方法进行;发芽试验条件为50 mg·L^(-1)赤霉素浸种24 h后于20℃、光照10 h,砂上发芽;种子水分测定采用高恒温[(130±2)℃]烘干法烘2 h;生活力测定采用四氮唑(TTC)染色法,浸种时间为4 h,种子横向切去1/3后于40℃、0.5%TTC溶液中避光染色24 h;质量测定采用百粒法。结论确定了可控指标检验的最优条件,本规程可用于岗梅种子的质量检验。

新胃乃安片的质量标准研究

目的建立新胃乃安片（黄芪、三七、红参、人工牛黄和珍珠层粉）的质量标准。方法采用薄层色谱法对处方中的黄芪、红参和三七中的多种指标成分进行同时鉴别;采用薄层色谱法对人工牛黄进行鉴别;采用HPLC-ELSD法对方中黄芪的黄芪甲苷进行测定。结果薄层色谱特征明显,在同一薄层板上能同时鉴别黄芪、红参和三七药材;黄芪甲苷在1.539～15.39μg（r=0.999 8）范围内呈良好的线性关系,其平均回收率（n=6）为97.0%（RSD=1.5%）。结论建立的薄层色谱和HPLC定量测定方法简便、重复性好,专属性强,可用于新胃乃安片的质量控制。

白木香叶片外植体愈伤组织诱导研究

以白木香叶片为试材,研究了叶龄、外植体大小、外植体接种方式、光照和激素浓度及组合等因素和水平对愈伤组织诱导的影响。结果表明:选择叶龄为12d的叶片剪成0.5cm2大小,以正面向上的方式接种在MS+2,4-D 1.0mg/L+ZT 1.0mg/L培养基中,黑暗培养,愈伤组织诱导率达100%。

溪黄草DNA条形码鉴定研究

目的:研究DNA条形码技术在溪黄草药材品种鉴定中的适用性。方法:选取rbcL、psbA-trnH、matK和ITS2等4个条形码标记,对41份溪黄草药材样品(含溪黄草Rabdosia serra、线纹香茶菜R.lophanthoides和纤花香茶菜R.lophanthoides var.graciliflora)进行DNA提取、PCR扩增及双向测序,对测序结果进行质量检查、人工校对和序列拼接获取标准碱基序列信息,通过比较序列获得成功率以及物种鉴定力(TaxonGap法),筛选适合溪黄草基原鉴定的DNA条形码序列。结果:条形码序列获得成功率依次为rbcL(100%)、psbA-trnH(90.2%)、ITS2(87.8%)和matK(70.7%);物种鉴定力方面,rbcL、psbA-trnH和ITS2等3条序列均可有效鉴定不同物种,但不适于分辨种下单位。结论:综合考察序列易得性和物种鉴定力,rbcL可作为溪黄草品种鉴定的首选条形码。

蓝百合提取物镇咳作用的初步研究

目的探讨蓝百合提取物(Agapanthus africanus L extracts,AE)的镇咳效果及其初步作用机制。方法采用雾氨、二氧化硫诱导小鼠咳嗽实验以及辣椒素诱导豚鼠咳嗽实验来评价AE镇咳的效果;采用辣椒素诱导鼠肺泡及血清释放C-纤维P物质,观察AE外周镇咳作用途径。结果与对照组相比,高剂量的AE(400 mg·kg-1)不但可有效地延长雾氨以及二氧化硫诱导小鼠咳嗽的潜伏期(P<0.01),也可有效减少咳嗽次数(P<0.05),且各剂量间有较好的量效关系;高剂量的AE可显著地抑制辣椒素诱导的豚鼠咳嗽次数(P<0.01)。与对模型相比,AE对辣椒素诱导豚鼠肺泡及血清C-纤维P物质的释放有显著的抑制作用(P<0.05)。结论 AE具有较好的镇咳作用,其效果可能与AE抑制C-纤维P物质的释放有关。