外源抗菌肽在转基因鱼腥草中的表达及抗茎腐病研究

[目的]鉴定转基因鱼腥草中外源抗菌肽的表达,分析抗茎腐病的能力。[方法]通过SDS-PAG电泳和Western blot方法检测转基因鱼腥草植株中外源抗菌肽的表达,接种不同浓度的立枯丝核菌孢子,比较转基因植株与非转基因植株的染病情况。[结果]外源抗菌肽能在转基因鱼腥草中表达;立枯丝核菌的最佳侵染孢子浓度为3×105/ml,观察时间以3d为宜,转基因鱼腥草较非转基因鱼腥草的抗茎腐病能力增强。[结论]外源抗菌肽的表达能增强转基因鱼腥草植株的抗茎腐病能力。

外源抗菌肽在转基因鱼腥草中的表达及抗茎腐病研究(摘要)(英文)

[目的]鉴定转基因鱼腥草中外源抗菌肽的表达,分析抗茎腐病的能力。[方法]通过SDS-PAG电泳和Western blot方法检测转基因鱼腥草植株中外源抗菌肽的表达,接种不同浓度的立枯丝核菌孢子,比较转基因植株与非转基因植株的染病情况。[结果]外源抗菌肽能在转基因鱼腥草中表达;立枯丝核菌的最佳侵染孢子浓度为3×105/mL,观察时间以3d为宜,转基因鱼腥草较非转基因鱼腥草的抗茎腐病能力增强。[结论]外源抗菌肽的表达能增强转基因鱼腥草植株的抗茎腐病能力。

转抗菌肽基因鱼腥草的筛选及稳定性分析

【目的】筛选转基因鱼腥草,并初步分析外源基因在鱼腥草植株中的稳定性。【方法】以选择培养基中生长的转基因鱼腥草为材料,通过卡那霉素(Kan)叶片涂抹法进一步筛选抗性植株,并进行Kan抗性基因nptⅡ和目的基因CN(cecropin B/NP-1)的PCR分析。【结果】Kan叶片涂抹法筛选的最佳浓度为5 000 mg/L,观察时间以4 d为宜;经PCR检测验证,Kan抗性植株的nptⅡ基因阳性率达到96%,其中目的基因CN阳性率为37%。【结论】建立了适用于转基因鱼腥草的快速筛选方法,转基因鱼腥草中目的基因CN的稳定性低于抗性基因。

鱼腥草叶片总蛋白的提取及双向电泳体系的建立

【目的】比较鱼腥草叶片蛋白质提取方法,建立适用于鱼腥草蛋白质组双向电泳分析方法。【方法】以鱼腥草叶片为材料,分别采用凯基试剂盒、三氯乙酸/丙酮沉淀法、尿素/硫脲提取法及酚法4种方法提取鱼腥草叶片总蛋白,使用Bradford法测定蛋白质浓度,计算蛋白提取率,并对所提取的蛋白样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及双向电泳(2-DE)分析,所得2-DE凝胶图片采用PDQuest软件进行分析。【结果】4种方法的提取率分别为2.90、2.55、3.90、3.80 mg/g,分别检测到186、153、356、315个蛋白点,酚法提取蛋白质的2-DE图谱效果较好,结果的重复性较好。【结论】不同方法提取鱼腥草叶片总蛋白的2-DE结果存在差异,以酚法提取的2-DE效果较好,适用于鱼腥草叶片蛋白质组分析。