龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍大鼠HPA轴负反馈功能的影响及其机制

目的探讨龟鹿二仙胶(Guilu Erxian Jiao,GEJ)对创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)轴负反馈功能影响及其可能机制。方法采用单一延长应激(single prolonged stress,SPS)的方法制备PTSD大鼠模型。96只SD大鼠按照随机数字表分为正常组(Control)、模型组(SPS)、龟鹿二仙胶组(GEJ)和帕罗西汀组(paroxetine,PRX),每组24只。除正常组外,其余大鼠均进行造模。造模后第8天开始,龟鹿二仙胶组(3.6 g/kg)和帕罗西汀组(10 mg/kg)大鼠分别灌胃给药,连续21 d;正常组和模型组大鼠则给予等量纯水灌胃,1次/d。连续灌胃21 d后,每组随机选取12只大鼠用于地塞米松抑制实验(dexamethasone suppression test,DST),6只大鼠用于RT-PCR实验,6只大鼠用于免疫组化实验。采用Elisa法检测血浆促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone,ACTH)含量,RT-PCR和免疫组化法检测海马和杏仁核中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor,MR)、促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体(corticotropin releasing factor 1 receptor,CRF1R)和促肾上腺皮质激素释放因子Ⅱ型受体(corticotropin releasing factor 2 receptor,CRF2R)的表达。结果(1)在DST中,模型组血浆ACTH含量较正常组明显下降[(145.89±19.41)μg/L,(203.59±35.78)μg/L,t=3.16,P<0.01];帕罗西汀组和龟鹿二仙胶组较模型组则显著升高[(218.47±37.55)μg/L,t=3.98,P<0.01;(205.33±66.54)μg/L,t=3.26,P<0.01]。(2)在RT-PCR实验中,模型组海马GR mRNA、MR mRNA表达较正常组明显升高[(1.29±0.02),(1.00±0.06);t=6.88,P<0.01;(1.38±0.02),(1.00±0.05),t=7.97,P<0.01];龟鹿二仙胶组较模型组则显著下降[(0.96±0.07),t=7.87,P<0.01;(0.86±0.13),t=11.03,P<0.01]。(3)免疫组化实验结果显示,模型组海马GR、MR阳性细胞表达较正常组明显升高[(84.33±12.82),(69.33±8.19),t=2.50,P<0.05;(77.33±6.65),(56.33±11.79),t=2.25,P<0.05];龟鹿二仙胶组较模型组则显著下降[(68.33±4.55),t=2.67,P<0.05;(59.50±4.18),t=2.25,P<0.05]。杏仁核中,模型组GR、MR和CRF1R阳性细胞表达较正常组均明显下降[(62.67±6.89),(77.17±10.70),t=3.10,P<0.05;(60.50±11.66),(91.83±15.63),t=3.43,P<0.05;(54.50±19.96),(88.17±22.43),t=2.31,P<0.05],龟鹿二仙胶组较模型组则显著上升[(74.33±5.85),t=2.11,P<0.05;(83.67±12.55),t=2.53,P<0.05;(88.67±16.28),t=2.35,P<0.05]。结论龟鹿二仙胶能抑制SPS引起的HPA轴负反馈功能增强,其作用机制可能和龟鹿二仙胶调节海马和杏仁核中GR、MR和CRF1R的表达有关。