柯里拉京抑制LPS和ATP激活的NLRP3炎症小体和巨噬细胞焦亡

目的探讨柯里拉京对细菌脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的调控作用和机制。方法采用CCK8试剂检测不同浓度柯里拉京对J774A.1细胞活力的影响;碘化丙啶(PI)染色和乳酸脱氢酶(LDH)释放检测柯里拉京对LPS+ATP诱导的细胞死亡的影响。Western blot法检测细胞上清液中炎症小体活化标志物caspase-1 p20(Mr20000)和成熟IL-1β(Mr17000)的表达水平,以及检测细胞内NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β前体(pro-IL-1β)和焦亡执行蛋白GSDMD的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平。活性氧(ROS)荧光探针H2DCFDA染色观察柯里拉京对ROS产生的影响。结果柯里拉京浓度小于40μmol·L-1时对细胞活性影响较小。柯里拉京减少LPS+ATP刺激的细胞内PI阳性细胞的比例和LDH的释放。柯里拉京抑制LPS+ATP刺激的巨噬细胞内GSDMD蛋白N末端(GSDMD-NT)的表达,以及减少细胞释放caspase-1 p20和成熟IL-1β到培养上清。柯里拉京抑制细胞分泌炎症因子IL-1β和减少ROS的产生。然而ROS的诱导剂鱼藤酮能拮抗柯里拉京抑制NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的作用。结论柯里拉京抑制LPS+ATP诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡依赖于抗氧化作用。

穿梭质粒匹配pHT254电转枯草芽孢杆菌WB800N方法优化

目的 枯草芽孢杆菌虽已广泛应用,但不同质粒转化困难或成本较高,限制了其应用。本研究主要观察了生长培养基、电击缓冲液、复苏培养基中添加如山梨醇、甘露醇、聚乙二醇等不同组合添加剂对枯草芽孢杆菌转化效率及稳定性的影响。方法 用穿梭质粒PHT254电转化枯草芽孢杆菌WB800N,研究生长培养基、电击缓冲液和复苏培养基等因素对转化效率的影响。结果 同一电场压力下高渗体系转化效率较常规体系明显提高且稳定性较好,同一电场压力和高渗体系中使用聚乙二醇PEG6000的电击缓冲液转化效率比使用山梨醇或海藻糖高6倍。结论 高渗电击转化法能够提高转化的稳定性,使用聚乙二醇PEG6000作为缓冲液可以获得更高的电转化效率。

敲低剪接因子Prp17对小鼠肝组织形态学和肝功能的影响

目的探讨敲低剪接因子Prp17对小鼠肝组织形态学和肝功能的影响。方法构建敲低剪接因子Prp17腺病毒(Ad-shPrp17)。随机将C57BL/6小鼠分为Control组和Ad-shPrp17组,每组8只。Ad-shPrp17组通过内眦静脉注射Ad-shPrp17。10 d后采集小鼠血清和收集肝组织。用苏木精-伊红染色法观察肝组织形态学变化;酶法测定血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性;荧光定量聚合酶链式反应分析基因表达情况。结果与Control组比较,Ad-shPrp17组小鼠:(1)肝的质量和肝指数显著增加(P<0.01);(2)肝细胞排列散乱,细胞肿胀,胞质疏松化,肝细胞由多角形变成圆形,胞质透明,呈气球样变,部分细胞发生坏死;(3)血清AST和ALT的酶活力显著升高(P<0.01);(4)肝组织TNF-α、IL-1β表达升高(P<0.05)。结论敲低剪接因子Prp17可造成小鼠肝组织形态发生病理改变和肝功能损伤,其机制可能与诱导肝炎症反应有关。这为肝疾病的防治提供新的治疗靶点和理论依据。

自发性高血压大鼠延髓microRNA差异表达分析

目的探讨自发性高血压大鼠延髓microRNA(miRNA)差异表达谱及其靶基因生物信息学分析。方法采用自发性高血压大鼠模型(SHR组),同周龄SD大鼠为对照组(Control组)。利用miRNA芯片检测大鼠延髓中miRNAs差异表达谱。结果与对照组比较,SHR组尾动脉收缩压显著升高(P<0.0001);SHR组延髓组织miRNAs有显著差异表达谱,16个miRNAs表达上调和7个miRNAs表达下调(1.5-fold change cutoff, P<0.05)。qRT-PCR验证结果显示,与对照组比较,SHR组延髓miR-153、miR-193及miR-301a表达显著下降,与芯片结果一致。生物信息学分析显示,差异表达miRNAs可能调控2775个靶基因(target score≥(Phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K)通路等。结论自发性高血压大鼠延髓组织中miR-153、miR-193及miR-301a明显下调,且生物信息学分析提示PI3K通路介导神经炎症可能作为高血压中枢相关差异表达miRNAs调控靶基因介导的主要致病通路。

幽门螺杆菌对肝癌HepG2细胞C‐Met基因表达的影响

目的研究幽门螺杆菌(Hp)对肝癌HepG2细胞原癌基因C-Met表达的影响。方法将Hp与HepG2细胞共同培养,设置空白对照组、Hp组、C-Met抑制剂空白组和C-Met抑制剂Hp组,每组设副孔5个,采用CCK8试剂盒检测HepG2细胞增殖活性,采用Western blot和qPCR方法检测C-Met原癌基因蛋白和mRNA表达水平。结果相较于空白对照组,Hp处理组HepG2细胞增殖活性升高且与时间呈正相关,而C-Met抑制剂可以抑制HepG2细胞的增殖活性。同时,Hp组HepG2细胞C-Met基因蛋白和mRNA表达水平均上调,C-Met抑制剂组则显著下调。相较于Hp共培养12 h,共培养24 h C-Met蛋白和mRNA表达水平均上调。结论Hp促进HepG2细胞的增殖可能与其提高原癌基因C-Met的蛋白及其mRNA表达水平有关,为后续更深入研究肝癌发生发展的复杂机制提供了理论依据。