家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达(英文)

目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为GGC,C-端终止密码子TAA前加进一个天冬酰胺(Asn)密码子AAC,命名为mCecropin。mCecropin基因序列克隆至融合表达载体pGEX-4T-1中。酶切分析和测序鉴定后,将阳性重组子质粒转入不同的大肠杆菌宿主细胞中进行融合表达。经SDS-PAGE分析,选用E.coliBL21(DE3)作为表达宿主菌。表达的融合蛋白GST-mCecropin通过GSTrap亲合柱纯化后用凝血酶酶切GST标签,mCecropin经HiTrap柱进一步纯化后,具有较强的抗菌活性。

PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体的构建、鉴定与表达

目的运用pADxsi系统构建带人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。方法采用基因克隆技术,将目的基因NKX6.1克隆至pShuttle-GFP-CMV中,得到pShuttle-GFP-CMV-NKX6.1;将PDX1克隆至pShuttle-CMV-GFP/CMV-NKX6.1上,替换掉GFP,得到pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1;将CMV-PDX1/CMV-NKX6.1从pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1,在293细胞中进行包装与扩增活病毒,病毒滴度测定;体外感染人胎肝间充质干细胞。结果分别酶切重组人PDX1与NKX6.1基因表达穿梭质粒与腺病毒载体质粒,阳性克隆均获得与理论相一致的目的条带;重组腺病毒感染人胎肝间充质干细胞比例达90%以上;RT-PCR结果表明目的基因在人胎肝间充质干细胞内能稳定表达;免疫细胞化学与间接荧光检测目的PDX1与NKX6.1蛋白分子均特异在细胞核表达。结论应用pADxsi系统重组技术成功构建了人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。

慢性肾脏病3~5期红细胞参数特征分析

目的:分析广东省中医院总院住院单纯慢性肾脏病(CKD)3~5期病人的红细胞参数,探讨CKD病人红细胞参数的特征及其临床应用价值。方法:收集CKD 3~5期各期病人各120例,使用Sysmex XE-5000型全自动血细胞分析仪及配套试剂检测所有研究对象红细胞计数(RBC)、血细胞比容(HCT)、血红蛋白(Hb)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白(MCH)水平、红细胞平均血红蛋白(MCHC)水平、红细胞分布宽度(RDW),并对参数结果进行统计分析。结果:同一病程不同性别以及同一性别不同病程的各组病人年龄差异均无统计学意义(P>0.05);在不考虑性别时,不同病程病人的年龄差异有统计学意义(P<0.05)。男性的MCHC数量在各期均高于女性(P<0.05~P<0.01);男性RBC、Hb、HCT数量在CKD 3期、4期均高于女性(P<0.01),在5期差异无统计学意义(P>0.05);RDW在CKD3期、4期的差异无统计学意义(P>0.05),在5期男性高于女性(P<0.05);MCV、MCH在各期的性别差异均无统计学意义(P>0.05)。男、女性病人的RBC、Hb和HCT数量均随着分期的升高呈减少趋势(P<0.01),而RDW呈增加趋势(P<0.01);MCV和MCH数量在女性病人中随着分期的升高呈减少趋势(P<0.01),在男性病人中各期之间差异无统计学意义(P>0.05);男、女性的MCHC数量在各期间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:RBC、Hb、HCT水平变化与CKD的发展密切相关,根据红细胞参数特征建立的红细胞参数范围可为临床医生评估CKD 3~5期病人的病情提供参考。

中国汉族和维吾尔族RHD基因结构的比较研究

目的对比研究中国汉族和新疆维吾尔族随机非血缘关系RhD阴性个体RHD基因结构。方法采用序列特异性引物-聚合酶链反应方法检测RHD基因的上、下游和杂交的Rhesus盒,以及RHD基因的10个外显子。结果RhD阴性个体RHD基因型检测结果显示,新疆维吾尔族人与同组汉族人RHD-/RHD-基因型组差异有统计学意义(94.44%vs61.40%,P<0.01),两者与RHD+/RHD-基因型组(该组代表RHD单基因组)比较差异有统计学意义(2.78%vs34.21%,P<0.01),但与RHD+/RHD+型组比较差异无统计学意义(2.78%vs4.39%,P>0·05)。78名汉族RhD阴性个体RHD单基因结构研究显示,53名(67.95%)为RHD(1-10)型(其中非表达的14名),15名(19.23%)为RHD-CE(2-9)-D2基因型,5人(6·41%)为RHD-CE(2-7)-D2基因型,2人(2.56%)与RHD-CE(3-6)-D型相似,1人(1.28%)为RHD-CE(5-6)-D型,2人为RHD-CE(6)-D或点突变。2名新疆维吾尔族RhD阴性个体RHD单基因型中1人为RHD(1-10)型,1人为RHD-CE(2-9)-D2。结论汉族RhD-/RHD+单基因型最常见非表达的等位基因依次为RHD-CE(2-9)-D2、RHD(1-10)、RHD-CE(2-7)-D2。新疆维吾尔族携带汉族常见而在白人罕见的非表达的RHD等位基因RHD-CE(2-9)-D2,显示维吾尔族和汉族两大民族基因的融合特征。

miR-29下调AKT信号通路中多个基因的表达

目的 AKT信号通路在心力衰竭的病理机制中扮演重要角色,本研究旨在筛选调节AKT信号通路的microRNA,为进一步研究microRNA在心力衰竭发生发展中的作用奠定基础。方法首先用Gene-SetEnrichmentAnalysis方法及Targetscan和RNAhybrid软件寻找可能调节AKT信号通路的microRNA,然后用双荧光素酶报告系统验证microRNA对AKT信号通路基因3'-UTR的调节作用。结果 GeneSetEnrich-mentAnalysis分析提示:miR-15/16、miR-21、miR-29、miR-103、miR-126、miR-128、miR-129、miR-200和miR-493共9个microRNA家族可能调节AKT信号通路;利用Targetscan和RNAhybrid软件反向验证以上9个候选microRNAs,miR-29与AKT信号通路中的10个基因(TGFβ3、HDGF、VEGF、LEP、PDGFRB、PIK3RI、AKT1、AKT2、AKT3和HIF1A)的3'-UTR杂交分值较高,进一步实验验证发现TGFβ3、VEGF、LEP、AKT1、AKT2、AKT3和HIF1A都是miR-29的靶基因。结论 AKT信号通路中的多个基因都是miR-29的靶基因,可受到miR-29的负调节作用。

液态芯片检测妇女HPV感染及基因亚型分布

目的探讨广州地区女性人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及其与年龄的关系。方法取妇女宫颈脱落细胞,利用液态芯片技术检测26种HPV亚型。结果在743例女性标本中,检出HPV阳性297例,检出率39.97%,其中单纯高危型HPV阳性211例,检出率28.40%;单纯低危型HPV阳性55例,检出率7.40%;高低危混合型HPV阳性31例,检出率4.17%。所有阳性标本中,单一感染232例(78.11%),二重感染61例(20.54%),三重感染4例(1.35%)。单一感染主要以HPV16和HPV52为主;多重感染中以HPV52合并HPV16、33亚型感染,以及HPV16合并HPV6、11亚型感染最为多见。单一HPV亚型的感染率在20岁以下年龄段明显高于其他年龄段(P<0.01);而HPV亚型双重感染主要发生在21～25岁年龄段,这个年龄段的双重感染率显著高于其他年龄段(P<0.0001)。HPV各亚型感染在年龄上的分布差别无统计学意义(P>0.05)。结论广州地区妇女宫颈HPV感染常见型别为HPV52、16、6、11、58,HPV感染与女性年龄密切相关,但HPV亚型的分布与年龄无关。

CD56和CD117不同表达模式在多发性骨髓瘤中的临床特征及预后分析

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者CD56和CD117的不同表达模式与疾病临床特征及预后的关系。方法根据流式结果CD56/CD117的表达模式将50例初发MM患者分为双阴组(CD56-CD117-)(n=21)、双阳组(CD56+CD117+)(n=4),CD56阳组(n=20)和CD117阳组(n=5),分析各组患者的一般资料、临床特征、实验室检查结果及预后。结果双阴组骨损害发生率56.8%,均高于双阳组(10.8%)、CD56阳组(32.4%)和CD117阳组(0.0%),差异均有统计学意义(P均<0.0083)。双阴组β2微球蛋白(β2-MG)和肌酐(Crea)水平低于CD117阳组(5.6 mg/L vs.12.2 mg/L;110.0μmol/L vs.469.0μmol/L),CD56阳组Crea水平明显低于CD117阳组(97.5μmol/L vs.469.0μmol/L),差异均有统计学意义(P<0.0083);双阴组免疫固定电泳IgA-L和IgG-K发生率高于CD56阳组,而IgG-L和轻链发生率低于CD56阳组,差异均有统计学意义(P均<0.0083);CD117阳组的IGH重排发生率(80.00%)明显高于双阴组(4.76%),差异均有统计学意义(P<0.0083);四组间国际分期系统(ISS)预后分期差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD56和CD117的不同表达模式与MM患者的临床特征密切相关,可提示其预后。