抗风疹病毒IgM类抗体生物素-亲合素时间分辨荧光免疫分析捕获法的建立与性能评价

目的建立抗风疹病毒IgM类抗体(RV IgM)生物素-亲合素时间分辨荧光免疫分析捕获法(BA Mac TrFIA)并评价其分析性能。方法用鼠抗人μ链单克隆抗体(抗-μMcAb)作为包被抗体,生物素化RV重组抗原为桥接抗原,链霉亲合素标记铕作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,测定抗RV IgM抗体,并对其检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、试剂热稳定性进行评价,与同类方法学比对检测1 020例样本,比对实验的一致性分析采用Kappa检验。结果本方法检测国家检测限参考品L1、L2和L3的结果均为阳性反应(S/CO≥1.00),批内变异系数(CV)<15.00%,国家阴性参考品符合率为10/10,国家阳性参考品符合率为5/5;本方法的试剂盒于37℃恒温放置6 d后,检测性能无明显改变;与珠海海泰公司试剂结果符合率为98.82%,Kappa=0.96。结论本方法灵敏度高,特异性强,精密度好;与同类方法学检测结果相关性好,能满足临床应用需要。

时间分辨荧光免疫法检测胎盘生长因子的方法建立及性能评价

目的建立检测胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)的时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA),并对其性能进行评价。方法利用捕获PLGF单克隆抗体包被微孔板,铕标记检测PLGF单克隆抗体,建立一种双抗体夹心TRFIA定量测定孕妇血清中的PLGF浓度。对该方法的检测低限、生物检测限、功能灵敏度、精密度、线性、干扰试验、交叉反应试验和HOOK效应等性能指标进行评价。选择125例孕期在9~40周,无溶血、黄疸和脂血的孕妇血清剩余样本,用于方法学比对研究,比对试验结果的相关性采用线性回归分析。结果该方法的捕获抗体包被浓度为7.0μg/ml,铕标记物使用工作稀释度为1:500,样本最适反应时间为90 min,检测低限为1.00 pg/ml,生物检测限为8.00 pg/ml,功能灵敏度为10.00 pg/ml,批内CV和批间CV均在5.00%以内,线性范围为9.00~10500.00 pg/ml,分别在低浓度和高浓度质控品中添加有干扰物质的16种干扰样本与基础样本检测结果的相对偏倚在-3.49%~2.20%内;检测5000 pg/ml糖基化PLGF-1,5000 pg/ml糖基化PLGF-2,5000 pg/ml未糖基化PLGF-3,10000 pg/ml未糖基化血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)/PLGF-1异二聚体,50000pg/ml糖基化VEGF165和40000 pg/ml可溶性FMS样酪氨酸激酶-1,交叉反应率分别为41.82%,27.86%,19.68%,0.042%,0.063%和0.0045%;检测样品PLGF浓度高达115000 pg/ml时仍未出现HOOK效应;样本PLGF浓度在5.74~4197.00 pg/ml间,与电化学发光法(electrochemiluminescence,ECL)检测结果的线性回归方程为Y=1.0709X-30.192,(r=0.9806,tr=55.42,P<0.05)。结论该方法灵敏度高、精密度好、线性范围宽、抗干扰能力强、特异度好、检测范围宽,与参比方法检测结果的相关性良好,可以满足临床需要。

新生儿滤纸干血片自动打孔检测系统检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的性能评价

目的评价新生儿滤纸干血片自动打孔检测系统检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的性能,并探讨在新生儿G6PD缺乏症筛查中的应用可行性。方法选取2020年12月至2021年7月来源于临床科研合作单位的104份新生儿滤纸干血片剩余样本,采用新生儿滤纸干血片自动打孔检测系统(简称自动打孔法)进行新生儿滤纸干血片G6PD检测,并对其检测低限、线性、准确度、精密度和一致性等性能指标进行评价,并与直接打孔法试验结果进行对比。结果自动打孔法检测G6PD的检测低限为0.29 U/gHb;在0.96~10.20 U/gHb范围内的样本,实测浓度与理论浓度的线性相关系数达0.9996,检测浓度与理论浓度的相对偏倚均在1/3允许总误差(±10%)内;检测质控品C1和C2的批内变异系数(CV)均在1/4允许总误差(小于7.5%)内,批间CV均在1/3允许总误差(小于10%)内;与直接打孔法平行检测临床样本的结果间差异无统计学意义(P>0.05),两种方法检测结果间具有高度相关性(r=0.9991,P<0.05),阳性判断值(2.50 U/gHb)预期偏倚的95%置信区间在可以接受范围内,采用Bland-Altman分析,两种方法有97.12%(101/104)的样本结果偏差在一致界限范围内。结论自动打孔法检测G6PD的检测低限、线性、准确度和精密度等性能指标均符合可接受标准,且自动打孔法与直接打孔法检测结果一致性良好,可用于新生儿滤纸干血片样本G6PD检测。

纸浆纤维悬浮液物性参数对流动特性的影响

分析了纸浆的物性参数对两相流动模拟的影响,这些物性参数主要包括浆流种类、纤维的尺寸等参数,通过Phoen-ics软件的模拟得出结论,对于同类型的纸浆而言,随着浓度的增大,流体的速度梯度增大,剪切应力增大,径向浓度差增大;对于不同类型的纸浆,木浆的剪切应力大于同样浓度草浆的剪切应力;管道中浓度分布呈中心高,壁面低的单调递减趋势,很不均匀;对于不同类型的纸浆,草浆的径向浓度差小于木浆的径向浓度差.

利用大豆蛋白制作模拟干酪(cheese analogs)的研究进展

综述了植物蛋白,特别是大豆蛋白制作模拟干酪的研究进展。热处理的大豆蛋白能大幅度地增加大豆蛋白与酪蛋白的凝结效果,蛋白的微粒倾向聚结,并粘附于酪蛋白分子上。干酪在微观结构上微孔更大,结构更松散,经酶改性的大豆分离蛋白制作的混合干酪弹性、咀嚼性、融化延展性明显提高。

C-肽时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制血清C-肽的时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立C-肽TRFIA试剂盒，并进行方法学评价。结果C-肽可测量范围为0．4-20ng／mL；分析敏感性为0．23ng／mL；分析批内、批间精密度分别为7．99％、11．97％；C-肽回收率为99．57％；与胰岛素和胰岛素原无交叉反应。稳定性试验表明，试剂可以贮存在4℃稳定9个月，37℃稳定7d；该试剂盒测试200份正常人血清样本，其参考范围为0．358-3．590ng／mL；收集122份血清样本，用该试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测，其相关系数为0．9432，线性方程为Y=0．9854X＋0．5063。结论C-肽TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求，适合临床推广使用．

基于G6PD/6GPD比值法的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒性能分析

目的:对基于G6PD/6GPD比值法的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒进行性能分析。方法:从试剂盒灵敏度、重复性及与对照试剂盒进行临床对比方面评价试剂盒的性能。结果:试剂盒对G6PD和6PGD的分析灵敏度分别为0.03 U/g Hb和0.02μg/ml;20次检测质控品C1和C2,变异系数分别为4.18%和6.12%;该试剂盒对1000例临床样本的敏感度、特异性及总符合率均为1.00,误诊率为0.001,漏诊率为0,P=1.000>0.05,差异无统计学意义。Kappa=0.962(P<0.01),广州丰华公司的试剂盒与对照试剂盒的临床检测结果具有高度的一致性。结论:广州丰华公司的试剂盒操作简单,结果可靠,由于该方法能检出G6PD缺乏症杂合子,弥补了荧光法检测G6PD缺乏症的不足,更适合推向市场。

总甲状腺素时间分辨荧光免疫分析方法的建立

目的建立总甲状腺素（TT4）时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）竞争检测法。方法用羊抗鼠IgG包板，对应的抗T4抗体（Anti-T4）为竞争抑制抗体，用Eu^3＋标记T4-BSA做标记物，以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液，竞争法TrFIA检测人血清中的TT4。结果TT4-TrFIA的灵敏度达6．895nmol／L（1．000nmol／L=0．7778ng／ml）；批内CV为4．12％～5．62％。批间CV为5．58％～8．61％；特异性好；平均回收率为99．16％；线性范围在11．0～300．0nmol／L之间；热稳定性好；与TT4微粒子酶免疫分析技术（MEIA）比对，相关系数达0．9544。结论建立的TT4-TrFIA法具有灵敏度高，特异性强，稳定性好，测定范围宽，检测时间短和非放射性等优点，具有良好的应用价值。

时间分辨荧光免疫法人巨细胞病毒IgG抗体定量测定试剂盒的研制

目的建立人巨细胞病毒IgG(HCMV IgG)抗体时间分辨荧光免疫法(TrFIA)并研制其试剂盒。方法采用HCMV pp150+pp52+pp65抗原作为包被抗原,铕标记羊抗人IgG作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主的增强液,应用间接TrFIA法测定HCMV IgG抗体,将自制试剂盒与同类试剂盒进行方法学比对试验,比对定量结果的等效性采用线性回归分析。结果自制HCMV IgG抗体试剂盒的最低检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率均能达到国家检定标准;检测标化的企业校准品,其实测值与理论值相对偏差均在±20.0%以内;在2.0 RU/mL^256.0 RU/mL范围内,线性相关系数不低于0.9900;于37℃恒温箱放置6天后,检测性能无明显改变;临床研究评价一致程度百分比达99.4%,1020例临床样本定量结果的线性回归方程为Y=0.9594X+0.3252,r=0.9918。结论自制试剂盒测定HCMV IgG抗体灵敏度高、特异性强、精密度好、准确度高、线性范围宽;与同类检测结果相关性好,能满足临床需要。

液相色谱-串联质谱法测定25-羟基维生素D

目的建立液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)同时测定血清中25-OH VD2和25-OH VD3的方法。方法采用蛋白沉淀(PPT)和液液萃取(LLE)相结合的方法对待测的人血清样本进行前处理,然后取样本提取液用LC-MS/MS系统中进行分析。以25-OH VD同位素作为内标,通过对校准品中25-OH VD2和25-OH VD3的峰面积及其内标峰面积的比值对相应的校准品浓度拟合标准曲线,再将其他检测样本中25-OH VD2和25-OH VD3峰面积与相应内标峰面积的比值代入拟合的标准曲线方程中计算浓度,从而LC-MS/MS快速测定25-OH VD2和25-OH VD3的方法。结果本实验条件下可同时快速检测血清25-OH VD2和25-OH VD3,分析时间仅为2.8 min,特异性高,25-OH VD2和25-OH VD3的信噪比(S/N)最小为69,25-OH VD2和25-OH VD3分别在2~100 ng/mL和5~250 ng/mL范围内具有良好线性关系,峰面积比与对应的浓度线性相关系数均>0.999,重复性的变异系数CV最大为3.67%和3.39%。结论本研究成功建立了LC-MS/MS简单快捷、灵敏度高、准确测定血清25-羟基维生素D的方法。

TR-FIA与RIA法检测HBV标志物的比较分析

铕 (Eu)标记时间分辨荧光免疫技术 (TR -FIA)是新近推出的一种非放射性标记微量检测技术 ,将其与RIA比较分析 ,结果表明 :TR -FIA法较RIA法灵敏度高 ,测量范围宽 ,准确度相近 ;在乙型肝炎病毒标志物(HBVM)常见的 8种组合模式中 ,有 7种完全符合 (符合率为 10 0 % ) ,只有HBSAg +抗 -Hbe +抗 -HBc组合模式符合率为 73.3% ,而HBeAg值差异较大。

血清甲胎蛋白和游离β绒毛膜促性腺激素双标记时间分辨荧光免疫试剂盒的研制与评价

目的研铺一种用于产前筛查的母血清甲胎蛋白（AFP）和游离β绒毛膜促性腺激素（freehCGB）双标记时间分辨荧光免疫法（TrFIA）试剂盒。方法采用AFP单克隆抗体铕（Eu^3＋）标记物和freehCGis单克隆抗体钐（Sm^3＋）标记物作为示踪物，以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分制备增强液，应用双抗体夹心法研制出hAFP和freehCG卢双标记时间分辨荧光免疫法试剂盒，并对其进行分析性能评价，平行比对试验采用线性回归分析。结果自制试刺盒AFP和freehCGβ的剂量-反应曲线线性相关系数（r）可达0．9990以上；批内、批间CV（％）均小于10．00％；AFP和freehCGP的灵敏度分别为0．12U／ml和0．08ng／ml；以国家标准品为对照，AFP和freehCG8的标准品效价比在0．900～1．100间；检测AFP和freehCG8的线性范围分别为0.25U／ml-500U／ml和0．2ng／ml-200ng／ml；试剂盒在4℃保存下可至少稳定12月；与国外同类试剂比对，AFP和freehCGβ的回归方程的线性相关系数（r）分剐为0．9730和0．9927。结论自制试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确度好、线性范围宽等优点，与国外的同类产品检测结果相关性好，能满足临床需要。

游离甲状腺素时间分辨荧光免疫试剂盒的研制

目的研制一种人游离甲状腺素(FT4)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)试剂盒。方法采用直接竞争法建立FT4检测方法(固相包被T4-复合物,与样本中的FT4竞争结合Eu标记的T4单克隆抗体),并对该试剂盒各项性能指标进行评价。结果该试剂盒的分析灵敏度为不高于2.0pmol/L,工作范围为2.0～120.0pmol/L。分析内变异系数为4.4%～5.7%、分析间变异系数为6.5%～8.2%,其总变异系数小于9.0%。与T3、FT3、rT3和rT4的交叉反应率分别为:1.12%、0.34%、0.56%和1.51%。稳定性试验表明该试剂盒可以在2～8℃稳定1年,37℃稳定7d。用该试剂盒对500份健康人血清标本进行测试,统计该试剂盒的正常参考值范围是11.5～22.7pmol/L。200份血清标本用本试剂盒与国外的化学发光试剂盒同时检测FT4,其相关系数为0.993。结论该试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外化学发光法的同类产品试剂盒。

时间分辨荧光免疫技术在HBV定量检测中的应用

目的 探讨铕标记时间分辨荧光免疫技术 ( TR- FIA)对乙型肝炎病毒标志物 ( HBV M)定量检测在临床的应用价值。方法 TR- FIA法、放射免疫 ( RIA)法及 ELISA法检测并统计分析。结果 TR- FIA法较 RIA法灵敏度高 ,测量范围宽 ,准确度相近。结论 在乙肝病毒标志物定量检测上 ,两种方法检测结果的临床符合性基本一致 ,TR- FIA较 RIA测量范围宽 ,标记物稳定 ,无放射性污染 ,具有良好的应用价值。

癌胚抗原时间分辨荧光免疫分析法的建立及方法学评价

目的建立癌胚抗原(CEA)时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)法。方法采用两株CEA单克隆抗体(CEAMcAb),一株用于固相包被(4.00μg/mL),另一株用于标记铕(Eu3+)制备Eu3+-CEA McAb(1∶1600),固相双抗体夹心二步分析法检测人血清中的CEA,并对此方法进行方法学评价。结果本方法与甲胎蛋白(AFP)和糖类抗原19-9(CA19-9)的交叉反应率分别为0.25%和3.58%,而与其他常用肿瘤标志物无交叉反应;低、中、高浓度的CEA质控批内实验变异系数分别为4.75%,4.25%和2.89%,批间实验变异系数分别为9.55%,7.38%和3.69%;平均回收率为95.94%;试剂盒37℃烘烤7d后检测性能基本稳定;并与CEA化学发光免疫分析技术(CLIA)比对试验结果相关系数达0.9986;CEA-TrFIA法检测系统的检测低限(LLD)、生物检测限(BLD)和功能灵敏度(FS)分别为0.4315ng/mL、1.000ng/mL和1.000ng/mL;线性范围为1.000～500.0ng/mL。结论CEA-TrFIA法具有灵敏度高、特异性强、精密性好、线性范围宽、试剂有效期长和非放射性等优点,具有良好的临床应用价值。

时间分辨荧光免疫法风疹病毒IgG抗体定量测定试剂盒的研制与性能评价

目的建立风疹病毒（RV）IgG抗体时间分辨荧光免疫法（TrFIA）并研制其试剂盒。方法采用RV抗原作为包被抗原，铕标记羊抗人IgG作为示踪物，配制以β一萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液，应用TrFIA法测定RVIgG，并对自研试剂盒的最低检测限、准确度、线性、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、热稳定性进行评价，与同类试剂盒进行方法学比对试验，比对试验定量结果的等效性采用线性回归分析。结果自研试剂盒的最低检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率均能达到国家检定标准；检测国际参考品（10IU／mL）或企业校准品，其实测值与理论值相对偏差均在正负20．0％以内；在2．0～256．0IU／mL范围内，线性相关系数不低于0．9900；于37℃恒温箱放置6d后，检测性能无明显改变；临床研究评价一致程度百分比可达100％。结论自研试剂盒灵敏度高、特异性强、精密度好、准确度高、线性范围宽，与同类产品检测结果相关性好，能满足临床需要。

一种新型的PKU荧光仪的研制及其临床评价

针对传统PKU测量仪器由于不能监测激发光强度的波动,从而导致所测得的荧光数据具有较大不稳定误差的缺点,本文构建了一套新型的以N型光纤为核心的光路检测系统,研制出一种专用于PKU检测的光纤型荧光仪。根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件,美国质量协会(ASQ)的QS-9000标准以及相关文献,采用将研制的荧光仪和国家规定的标准仪器(雷勃仪器,THERMO Varioskan Flash全波长多功能酶标仪)相比较的方法,提出了一种可定量评价仪器相关各项指标的评价方案。并运用其标准对所研发的荧光仪进行了全面评价,结果表明荧光仪的各项指标均符合要求,同时为仪器的进一步改进指明了方向。

时间分辨荧光免疫法乙型肝炎病毒e抗原定量测定试剂盒的研制与性能评价

目的对自研时间分辨荧光免疫法(TRFIA)乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)定量测定试剂盒进行性能评价。方法 2株单克隆抗体分别用于固相包被和铕标记,固相双抗体夹心二步分析法检测人血清HBeAg,并对自研试剂盒线性范围、精密度、分析灵敏度、特异度等进行评价,与对照试剂盒平行检测1 020例样本,检验结果采用线性回归分析,一致性采用Kappa检验。结果自研试剂盒线性范围为0.60～160 NCU/mL,相关系数达0.99,批内和批间变异系数均小于10%,灵敏度达0.05NCU/mL,检测国家标准物质或自制参考品的效价比为0.90～1.10,检测国家参考品符合国家的质量检定标准,37℃恒温箱烘烤6d后检测性能无明显改变,与同类试剂检测结果线性相关系数达0.95,临床研究试验总符合率达100%,Kappa指数为1。结论自研试剂盒精密度好、灵敏度高、准确性好、线性范围宽、符合率高,可取代对照试剂盒,值得推广应用。

双抗原夹心时间分辨荧光免疫法检测梅毒螺旋体特异性总抗体的性能研究

目的对双抗原夹心时间分辨荧光免疫法(TRFIA)检测梅毒螺旋体(TP)特异性总抗体的性能进行研究。方法采用重组TP优势多表位嵌合抗原,应用双抗原夹心TRFIA检测TP特异性总抗体。评价该方法学的精密度、检测低限、准确度、线性、参考品符合率等分析性能指标,并进行临床比对试验研究,方法间结果差异比较采用χ~2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果该方法的批内与批间的CV均不高于10%;检测低限可达0.05mIU/ml;检测国家标准物质的相对偏差不超过10%;在1.50~155.00mIU/ml内,线性相关系数可达0.999 9;检测国家参考品能达到检定要求;检测标化的血清盘结果符合率为100%;与梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)平行比对试验,总符合率为99.56%,Kappa指数为0.990 6。结论该方法精密度好、灵敏度高、准确性好、线性范围宽,临床符合率高,能满足临床检测需要。