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人源极光激酶A在毕赤酵母和MCF-7细胞中的表达及纯化
被引量:
1
1
作者
于洋
于丽娜
+3 位作者
谢萍
王福启
麻薇
施维
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期266-270,共5页
目的:构建人源极光激酶A(AURKA)真核表达载体,检测其在毕赤酵母X33和MCF-7细胞中的表达及纯化。方法:将双酶切PCR扩增的目的基因与真核表达载体连接,构建重组质粒。电转法转染重组质粒,筛选后采用SDS-PAGE和Western blotting法检测AURK...
目的:构建人源极光激酶A(AURKA)真核表达载体,检测其在毕赤酵母X33和MCF-7细胞中的表达及纯化。方法:将双酶切PCR扩增的目的基因与真核表达载体连接,构建重组质粒。电转法转染重组质粒,筛选后采用SDS-PAGE和Western blotting法检测AURKA蛋白的表达,Ni-NTA柱法纯化表达的蛋白;放射自显影法检测AURKA的生物活性;细胞计数法检测转染重组质粒后MCF-7细胞增殖情况。结果:2种重组质粒经PCR均扩增出1 212bp目的基因,表明真核表达载体构建成功。重组AURKA蛋白相对分子质量约为50 000,且可磷酸化其底物组蛋白H3,表明重组AURKA具有活性。与转染空质粒和野生型MCF-7细胞比较,转染AURKA 24和48h后MCF-7活细胞数量明显增加。结论:AURKA在毕赤酵母和MCF-7细胞中成功表达和纯化,且其过表达可促进细胞增殖。
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关键词
人源激光激酶A
毕赤酵母X33
MCF-7细胞
细胞增殖
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职称材料
题名
人源极光激酶A在毕赤酵母和MCF-7细胞中的表达及纯化
被引量:
1
1
作者
于洋
于丽娜
谢萍
王福启
麻薇
施维
机构
广州体育学院运动与健康系运动生理学教研室
吉林大学生命科学
学院
分子酶学工程教育部重点实验室
广州
医科大学附属口腔医院牙周病科
广州
口腔病研究所口腔医学重点实验室
吉林出入境检验检疫局技术中心
吉林大学中日联谊医院心血管内科
出处
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期266-270,共5页
基金
吉林省科技厅科研基金资助课题(20130206010YY)
文摘
目的:构建人源极光激酶A(AURKA)真核表达载体,检测其在毕赤酵母X33和MCF-7细胞中的表达及纯化。方法:将双酶切PCR扩增的目的基因与真核表达载体连接,构建重组质粒。电转法转染重组质粒,筛选后采用SDS-PAGE和Western blotting法检测AURKA蛋白的表达,Ni-NTA柱法纯化表达的蛋白;放射自显影法检测AURKA的生物活性;细胞计数法检测转染重组质粒后MCF-7细胞增殖情况。结果:2种重组质粒经PCR均扩增出1 212bp目的基因,表明真核表达载体构建成功。重组AURKA蛋白相对分子质量约为50 000,且可磷酸化其底物组蛋白H3,表明重组AURKA具有活性。与转染空质粒和野生型MCF-7细胞比较,转染AURKA 24和48h后MCF-7活细胞数量明显增加。结论:AURKA在毕赤酵母和MCF-7细胞中成功表达和纯化,且其过表达可促进细胞增殖。
关键词
人源激光激酶A
毕赤酵母X33
MCF-7细胞
细胞增殖
Keywords
human Aurora A
Pichia pastoris X33
MCF-7 cells
cell proliferation
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源极光激酶A在毕赤酵母和MCF-7细胞中的表达及纯化
于洋
于丽娜
谢萍
王福启
麻薇
施维
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
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