兔不同部位脂肪来源干细胞体外成肌诱导能力的比较

目的对兔不同部位的脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外成肌诱导能力进行比较,观察部位来源是否与干细胞分化能力有关,以便为尿路组织工程种子细胞的提取选择较佳取材部位。方法从1只4月龄雄性新西兰大白兔附睾附近、腹膜后、颈背部无菌取出脂肪组织,Ⅰ型胶原酶酶解法提取ADSCs,体外培养并传代后差速贴壁培养进行纯化,用鼠源性兔CD44分子的单克隆抗体做免疫细胞化学染色行初步鉴定,然后取各部位第5代ADSCs行成脂、成骨、成肌多向诱导分化,采用油红O染色行成脂诱导鉴定,von Kossa染色行成骨诱导鉴定,RT-PCR法对诱导对照组(含10%FBS的L-DMEM培养基培养)及诱导组(成肌诱导培养基培养)细胞行肌肉早期标志物α-actin基因的检测。结果 3个部位脂肪均可获取贴壁的ADSCs;差速贴壁培养细胞呈铺路石样生长;兔CD44免疫细胞化学染色呈阳性。各部位第5代ADSCs行成脂诱导14d油红O染色可见红色脂滴;成骨诱导28d后von Kossa染色可见细胞外不同程度黑色钙沉积。RT-PCR检测示,成肌诱导42d后诱导对照组α-actin条带较弱,诱导组呈强阳性条带;各部位ADSCs成肌诱导42d的α-actin增长率分别为:附睾附近38.446%±4.852%,腹膜后28.622%±4.879%,颈背部35.471%±3.434%,腹膜后增长率与其余2个部位比较差异均有统计学意义(P<0.05),其余2个部位间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论兔不同部位ADSCs在体外培养时表现出不同的成肌分化能力,附睾附近和颈背部脂肪可作为下尿路组织工程种子干细胞来源的较佳取材部位。

经后增殖方对超排卵大鼠卵母细胞分泌因子的影响

目的观察经后增殖方对超排卵大鼠卵母细胞分泌因子的影响。方法 30只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、中药治疗组。模型对照组和中药治疗组建立超排卵模型,中药治疗组给予经后增殖方颗粒剂灌胃,模型对照组和空白对照组给予生理盐水灌胃,经颈椎脱臼处死后取卵巢组织。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白印迹法(Western Blot)分别检测大鼠卵巢组织中GDF9、BMP15、FGF10mRNA及蛋白的表达。结果模型对照组GDF9、BMP15、FGF10 mRNA及蛋白表达均下降,与空白对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。中药治疗组各因子mRNA及蛋白表达水平均高于模型对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。中药治疗组GDF9、BMP15表达与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),FGF10表达显著低于空白对照组(P<0.05)。结论中药经后增殖方能促进超排卵大鼠卵母细胞分泌因子GDF9、BMP15、FGF10 mRNA及其蛋白的表达,推测中药通过提高其表达而改善卵母细胞质量。

提前48h解冻胚胎移植用于重复异位妊娠反复IVF-ET失败患者:2例报道及分析

自1983年澳大利亚Trouson等通过冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer,FET）获得首例临床妊娠,此后该技术逐步广泛应用,大量IVF周期剩余胚胎被冷冻保存,提高了IVF周期剩余胚胎被冷冻保存，提高了IVF取卵周期的累计妊娠率。目前胚胎复苏时机多数中心采用移植当日复苏，培养2b后进行移植，