广州军队医院SARS病例流行病学特点分析

目的 分析广州市军队医院收治的SARS病例的临床流行病学特点 ,为防治对策和措施提供科学依据。方法 采用查阅病历、面对面访谈、电话调查及现场调查相结合的方法 ,收集SARS病例流行病学和临床诊治资料 ,利用SPSS软件 10 0分析SARS病例分布特点和恢复期血清IgG抗体情况。 结果 14 7例SARS临床诊断病例中 ,10 9例分布于广州市各个辖区 ,有 38例来自外地 ;发病年龄主要集中在 18～ 4 8岁 ;37例属于聚集性病例 ,4 9例有明确的接触史 (33 33% ) ;死亡 7例。检测 90例恢复期血清特异性IgG抗体 ,阳性 4 6例 ,有同类病例接触史者血清抗体阳性率为 85 2 9% ,高于无接触史者的 2 7 6 6 % (P <0 0 0 1)。发热时间≥ 7d者血清抗体阳性率为 6 8 89% ,高于发热 <7d者的 30 95 % (P <0 0 0 1)。结论 广州军队医院收治的SARS病例流行病学特点与广东省疫情态势基本一致 ;流行病学接触史加血清学结果有助于病例确诊 ;存在未明的传染来源或传播方式。

12家部队医院细菌分布及耐药监测分析

目的调查不同地区部队医院患者血液、尿液等标本中的细菌分布及耐药情况,为合理使用抗菌药物提供实验室依据。方法收集12家部队医院2006年1-12月临床分离的1099株不重复细菌,采用琼脂稀释法测定抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度(MIC),计算MIC50、MIC90,并按美国临床实验室标准化协会(CLSI)2007年标准判断敏感率(S%)、中介率(I%)、耐药率(R%),利用WHONET5.4软件进行分析。纸片法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),3-氨基苯酚硼酸(APB)纸片增强法检测AmpC酶。结果共获得革兰阳性菌436株(39.7%),革兰阴性菌663株(60.3%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)检出率分别为62%和92%,未发现万古霉素耐药的肠球菌和葡萄球菌。大肠埃希菌(E.coli)、肺炎克雷伯菌产ES-BLs的比率分别为51.1%和45.1%,二者产AmpC酶的比率分别为11.3%和16.2%。血液中E.coli和肺炎克雷伯菌对头孢他啶、阿米卡星、头孢噻肟、头孢西丁和左氧氟沙星的耐药率普遍低于尿液中的相应细菌,而血液中铜绿假单胞菌和不动杆菌对美罗培南、头孢他啶、多黏菌素、米诺环素的耐药率均显著高于尿液中的相应细菌。结论MRSA、MRSCN以及产ESBLs、AmpC酶的耐药细菌在部队医院的发生率较高;自血液和尿液分离的细菌对抗菌药物的耐药性差异较大。

SARS病毒核衣壳蛋白、膜蛋白在大肠杆菌中的高效表达和纯化

通过反转录 PCR获得了SARS冠状病毒核衣壳蛋白 (N)和膜蛋白 (M)基因 ,其序列分析结果与加拿大多伦多株完全一致。将M基因和N基因克隆到大肠杆菌表达载体pET2 2b和pBV2 2 2上 ,并在大肠杆菌中以包涵体及可溶形式获得高效表达。通过离子交换、金属螯合层析纯化获得电泳纯制品。所获得的核衣壳蛋白具有良好的抗原性 。

CK-MB/CK倒置22例CK-MB质量检测结果分析

目的:在CK-MB/CK倒置时,通过对CK-MB质量及其活性检测结果进行比较分析,为临床提供准确的结果。方法:样本先用日立7600/或7170全自动生化分析仪测定CK、CK-MB活性,检出CK-MB/CK倒置者再立即进行CK-MB质量测定。CK-MB质量采用免疫化学发光法进行检测,CK-MB活性采用选择性抑制法进行测定,并用(x±s)表示测定结果。结果:22例CK-MB/CK倒置的患者中,CK-MB质量平均水平为(6.88±19.96)ng/mL,CK-MB活性平均水平为(176.00±150.51)U/L。CK-MB活性及其质量的样品均数与总体均数进行t检验,CK-MB活性差异有显著性(t=5.059;P=0.000);CK-MB质量差异无显著性(t=0.700;P=0.471)。结论:CK-MB/CK倒置时,CK-MB活性受到诸多因素的干扰,使测定结果远远高于真实值,出现假性升高的检测结果给临床造成误解,而CK-MB质量能够避免干扰,测定结果更准确可靠。

全硅橡胶和乳胶导尿管留置导尿的临床比较

目的探讨不同材料导尿管留置导尿对尿道黏膜的影响,以其指导临床合理选择导尿管。方法将需要留置导尿病人随机分为全硅橡胶及硅化乳胶导尿管两组,每组各为30例,分别检测尿常规、记录留置导尿管期间病人的感觉。结果插管初期硅橡胶导尿管比乳胶导尿管镜下血尿发生率低,插管期间硅橡胶导尿管组病人不适感觉少见。结论插管过程中内固定囊压迫膀胱黏膜或者病人活动牵拉导管可能是造成尿道或膀胱损伤的原因之一。全硅橡胶导尿管相对于乳胶导尿管对尿道黏膜损伤轻,建议对需要长期留置导尿管的病人尽量使用对尿道刺激和损伤小的全硅橡胶导尿管。

高血糖症引起红细胞平均体积假性增高

探讨高血糖症对仪器测定红细胞平均体积（ＭＣＶ）的干扰及其纠正方法。通过ＣｏｕｌｔｅｒＪＴ－ＩＲ和ＣｏｕｌｔｅｒＡｃＴ８两种仪器测定系列高血糖浓度血样的ＭＣＶ和离心法测出各血样的红细胞压积（ＨＣＴ），与血糖浓度进行相关性检验。结果ＣｏｕｌｔｅｒＪＴ－ＩＲ随血糖浓度升高，ＭＣＶ出现假性增高的结果，与血糖浓度相关显著（ｒ≥０．９１４５，Ｐ＜０．０５）；ＣｏｕｌｔｅｒＡｃＴ８全血和预稀释模式都不受干扰，离心法测的ＨＣＴ亦不受高血糖的影响，结果恒定。结果显示，高血糖症会引起ＣｏｕｌｔｅｒＪＴ－ＩＲＭＣＶ假性增高，可用离心法测ＨＣＴ换算后得到纠正。

小干扰RNA抑制HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒复制与表达

目的了解基于载体的siRNA对HepG2.2.15细胞中HBV的抑制作用,观察特异性siRNA载体对细胞的毒副作用及可能的非靶向效应,探讨新的抗病毒治疗手段。方法根据GenBank收录HepG2.2.15细胞系中HBV基因全序列,设计构建针对HBV的C基因区的3条siRNA的双链复合体,经退火连接入p-Silencer-Cmv4.1载体,连接产物转化JM109细胞,载体经聚丙烯酰胺凝胶电泳及测序鉴定后中量超纯提取质粒,定量后与转染试剂siPort XP-1转染HepG2.2.15细胞。免疫荧光及Western blot检测病毒蛋白HBsAg、HBeAg的表达;RT-PCR检测HBV RNA的表达变化;Real-time PCR定量检测HBV DNA拷贝变化。同时采用MTT法检测细胞的生长曲线与生长率。ELISA法检测IFN-α的表达变化。结果Western Blot结果显示在转染第3天p-C2对HBsAg、HBeAg的抑制率分别为(81.15±0.69)%、(88.12±0.92)%,免疫荧光显示同样结果。RT-PCR检测结果显示C基因特异的表达性siRNA可以显著抑制HBV的mRNA表达,对C区HBV mRNA的抑制达96.9%。定量PCR检测显示特异性siRNA使HBV DNA拷贝数降低102个数量级。而MTT检测表明该特异性siRNA表达载体不影响细胞的生长曲线与生长率,治疗组与对照组比较无差异。ELISA法检测表明特异性siRNA并不影响细胞干扰素的表达,p-C1、p-C2、p-C3组与未转染组、p-NC组比较表达均无差异。结论基于载体的特异性siRNA在体外可抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制和表达。该抑制作用是特异性的,同时对细胞无明显毒副作用。该作用为基因水平的裂解作用,不会出现耐药现象。

四聚体技术检测原发性胆汁性肝硬化患者血循环中抗原特异性T细胞

目的：定量检测原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者体内抗原特异性T淋巴细胞含量，探讨其在PBC发病机制中的作用。方法：采用四聚体技术检测15例HLA-A＊0201阳性（A2^＋）PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）经抗原肽诱导生长的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）中PDC-E2 159～167aa与PDC—E2 165～174aa特异性CD8^＋T细胞频率，以A＊0201阴性（A2^-）PBC患者与A2^＋的其他慢性肝病和健康自愿者为对照组：结果：在A2^＋PBC患者PDC-E2 159～167aa与PDC-E2165～174aa诱导的CTL中可检测到其相应的四聚体／CD8^＋细胞，平均频率分别为0．42%±0．24％（0．17％～1．08％）、0．27%±0．17%（0．05％～0．56％），各对照组的四聚体阳性细胞频率均低于0．1％，差异非常显著（P〈0．001）；A2^＋PBC组中PDC-E2 159～167aa特异性的CTL频率与PDC—E2 165～174aa特异性的CTL无显著性差异（P〉0．05）：处于临床Ⅰ、Ⅱ期的A2^＋PBC患者中CD8^＋特异性CTL频率均较Ⅲ期的要高（P〈0．05）：PDC—E2159～167aa特异性CTL与PDC—E2165～174aa特异性CTL频率在抗．PDC阳性PBC组和抗．PDC阴性组之间均无显著性差异（P〉0．05）：结论：HLA—A＊0201限制性的PDC-E2159～167aa和PDC-E2165～174aa特异性CD8^＋CTL在PBC疾病进展中起重要作用，抗线粒体抗体阴性或抗-PDC阴性PBC患者与阳性患者可能有着相似的T细胞介导的免疫发病机制。

血清降钙素原对重症颅脑损伤继发感染的诊断价值

目的探讨血清降钙素原(PCT)对重症颅脑损伤继发感染的诊断价值。方法选取重症颅脑损伤继发感染31例(感染组),未继发感染的重症颅脑损伤30例(未感染组),健康体检者30例(对照组);观察三组间血清PCT、白细胞计数(WBC)及C-反应蛋白水平(CRP)。另观察6例重症感染者PCT水平的动态变化与预后的关系。结果入院第1天感染组PCT水平高于未感染组和对照组(P<0.001);感染组C-反应蛋白水平与未感染组之间差异无统计学意义(P>0.05),但都明显高于对照组(P<0.001);感染组与未感染组的WBC水平差异无统计学意义(P>0.05),但都高于对照组(P<0.001)。重症感染的6例中3例PCT水平持续>7.3ng/ml者死亡,3例存活患者随着临床症状的改善PCT水平呈下降趋势。结论 PCT水平与临床感染症状的严重程度密切相关,对诊断重症颅脑损伤继发感染有重要的意义,也可作为判断其预后的参考指标。

细胞因子抗体芯片筛选脓毒症患者血清蛋白标记物

目的:应用细胞因子抗体芯片(CAC)分析脓毒症患者血清中炎性细胞因子表达的变化。方法:采用CAC技术平台,测定9例脓毒症患者(脓毒症组)和4例正常健康人(对照组)血清中79种细胞因子。以两组样本中每组至少有4个样品的杂交信号值超过400为有表达的蛋白,筛选出有表达的蛋白38个。应用芯片差异显著性分析(SAM)软件对38个有表达的蛋白进行差异表达分析。结果:筛选到胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)、肝细胞生长因子(HGF)、骨桥蛋白(Osteopotin)、胰岛素样生长因子结合蛋白-4(IGFBP-4)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和B淋巴细胞趋化因子(BLC)等6个在脓毒症患者血清中高表达的细胞因子,以及血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、表皮生长因子(EGF)和白介素-1β(IL-1β)等6个在脓毒症患者血清中低表达的细胞因子。聚类分析表明,上述这12个差异表达的细胞因子能够区分脓毒症和正常健康对照。结论:CAC是一种高效、快速的蛋白质组学技术,利用CAC从血清中筛选脓毒症相关蛋白分子标记物是可行的。

动态监测血清降钙素原水平对脓毒症诊断的临床价值

目的探讨动态监测血清降钙素原(PCT)水平对判断脓毒症的严重程度及预后的临床意义。方法以本院ICU病房2008年1月至2010年12月收治的111例脓毒症患者为研究对象,在诊断为脓毒症的第1、3、5、7天分别抽取静脉血,进行血清PCT水平的动态监测,并同时检测CRP、WBC和记录APACHEⅡ评分。结果 111例患者中存活92例(存活组),死亡19例(死亡组)。死亡组血清PCT水平第3、5、7天分别是(16.2±5.2)、(14.3±3.6)、(13.9±2.7)ng/mL明显高于存活组的(9.4±2.3)、(3.8±1.2)、(2.2±0.7)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。同时,死亡组的CRP、WBC、APACHEⅡ评分均明显高于存活组,并呈持续上升趋势,而存活组上述指标呈持续下降趋势。结论脓毒症的严重程度和预后与患者血清PCT水平明显相关,动态监测PCT水平有助于判断脓毒症的严重程度和预后。

HITACHI 7170、7600以及ROCHE Cobas C501全自动生化分析仪分析灵敏度的评价

目的对HITACHI 7600、7170及罗氏Cobas C501全自动生化分析仪进行分析灵敏度的评价。方法根据临床实验室标准化协会(CLSI)文件要求,选定3个项目[血糖(GLU)、总蛋白(TP)、胆固醇(TC)]的空白样品进行连续10次批内重复测定,对系列检测限样品进行10 d的重复测定,以计算出3种全自动生化分析仪的检测低限、生物检测限和功能灵敏度。结果 3个项目的实验结果均远小于其试剂说明书提供的参考值下限,检测低限结果与ROCHE试剂说明书提供的数据吻合。结论 HITACHI7600、7170及ROCHE Cobas C501的GLU、TP、TC分析灵敏度高,符合临床检测要求。

血小板功能检测及其应用的研究进展

血小板在正常止血过程中十分重要 ,当血小板数量或功能发生变化时 ,机体易于发生出血或血栓。目前 ,检测血小板功能的方法日益增加 ,包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力等。近年来随着对血小板激活机制的深入研究以及生物化学、免疫和分子生物学技术的不断发展 。

结核分枝杆菌临床实验室检测方法研究进展

近年来，结核分枝杆菌的耐药情况愈发严重，疾病治疗负担重，防治工作十分艰巨。为解决这个全球性的问题，临床实验室不断研究以期找到一种快速、准确的检测方法。目前使用的方法大致可分为病原学检测、免疫学检测与分子生物学检测等，这些检测方法各有利弊。笔者汇总临床实验室常用的检测结核分枝杆菌方法，并进行比较，综合分析其在结核病诊断上的价值。

人巨细胞病毒检测方法的比较

人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒，由162个壳粒，正20面体构成，有典型的疱疹病毒结构。HCMV在人群中感染非常广泛，在我国成人感染率可达80％～97％^[1]。感染者可长期或间隙地经口腔、生殖道、胎盘、输血或器官移植等多途径，

GP73在肝癌早期诊断中的应用价值

【目的】探讨高尔基体蛋白73（GP73）作为一个原发性肝癌早期诊断的血清标志物的价值。【方法】采用酶联免疫吸附试验定量测定103例原发性肝癌、49例乙型病毒肝炎患者和50名健康人的血清GP73的水平。【结果】肝癌组中血清GP73的水平显著高于肝炎纽及健康对照组（P〈0．05）。通过ROC曲线确定诊断肝癌的GP73临界值为】13．2μg／L，和甲胎蛋白（AFP）的临界值为13．3μg／L时，GP73和AFP单项检测的敏感度分别为68．0%和56．3％，特异度分别为94．8％和91．8％，两者联合检测的敏感度为80．6％，特异性为89．9％。在血清AFP浓度低于7μg／L的肝癌患者中，有52％（17／33）的患者血清GP73浓度高于临界值。【结论]GP73高表达于肝癌患者的血清中，可能成为肝癌早期诊断的一个更好的血清标志物，与AFP联合检测可有效的提高肝癌诊断的敏感度，特别有助于APF阴性肝癌患者的诊断。

致弱尾蚴感染血清对日本血吸虫尾蚴和成虫抗原免疫识别初步研究

众所周知,血吸虫减毒尾蚴可诱导宿主产生较高免疫保护力,但是,刺激宿主免疫系统的究竟是哪些目标抗原,目前仍未定论.血清被动转移实验证明减毒尾蚴多次免疫后血清可诱导宿主产生针对幼虫期的免疫保护,因此我们用多次免疫兔血清初步筛选日本血吸虫可溶性尾蚴中的保护性抗原,以期为血吸虫疫苗的研制提供一些新的线索.

临床标本采集量对凝血系统检测结果的影响

目的:探讨临床标本采血量的准确性对凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)测定的影响。方法:用BE-RockRotor全自动血凝仪和配套试剂分别对15例临床患者不同抽血量标本进行检测,观察不同的采血量对PT、APTT检测结果的影响,并将所得检测结果采用统计方法处理。结果:与标准采血量为1.8mL相比,采血量大于或小于1.8mL时测得的PT、APTT结果有显著性差异。结论:临床标本采集量对凝血系统检测结果的准确性有直接影响;必须严格按照标准采血量规定采集标本,才能确保凝血系统检测结果的准确,为病人疾病的诊断提供可靠的实验室依据。