Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的:研究骨肉瘤MG-63细胞中Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶(TG2)的抗凋亡作用,探讨其抑制肿瘤细胞凋亡的机制。方法:设计针对TG2的siRNA,建立骨肉瘤MG-63细胞体外缺氧培养模型,分为常氧组(细胞在常氧下培养)、单纯缺氧组(细胞在缺氧培养箱里培养)、对照siRNA缺氧组(转染对照siRNA后在缺氧培养箱里培养)和TG2siRNA缺氧组(转染TG2siRNA后在缺氧培养箱里培养)。观察各组骨肉瘤MG-63细胞在缺氧培养不同时间(6、12、24、48和72h)后Bax和Cyt C的表达及细胞凋亡率。微量滴定法检测TG2活性,RT-PCR法检测TG2和Bax mRNA表达水平,免疫组织化学法检测TG2和Bax蛋白在细胞内的分布,Western blotting法检测TG2、Bax和Cyt C蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与常氧组比较,单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组细胞TG2活性、TG2mRNA和蛋白表达水平明显增强(P<0.01),并随缺氧时间延长逐渐升高(P<0.01);Bax mRNA表达水平变化不明显(P>0.05),但Bax蛋白表达水平明显下降(P<0.01),细胞胞浆和线粒体内Cyt C蛋白水平及细胞凋亡率无明显变化(P>0.05)。与单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组比较,TG2siRNA缺氧组细胞各时间点TG2mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),Bax蛋白表达明显增加(P<0.01),胞浆内Cyt C蛋白水平明显增加(P<0.01),线粒体内Cyt C蛋白水平明显降低(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:TG2通过与Bax形成混合物而消耗Bax,阻止Cyt C释放至胞浆,从而抑制肿瘤细胞凋亡。