医院实验动物工作科学管理的建议

随着科学技术的迅猛发展,实验动物科学已成为在现代科学带动下崛起的一门以生命科学为主体,以医学、生物学为核心的综合性的新兴学科,涉及生命科学各个领域的综合学科,是现代科学技术的重要组成部分;是生命科学的基础和条件,也是衡量一个国家或一个单位科研水平的重要标志.近年来,随着国家科学技术委员会<实验动物管理条例>的颁布和中华人民共和国卫卫部<医学实验动物管理实施细则>的发布实施.我国医学实验动物标准化管理工作已逐步步入规范化、法制化的发展轨道.作者从医院实际出发,医院实验动物工作的科学管理提出以下建议:

肝脂片抗大鼠脂肪肝的实验研究

目的:探讨肝脂片防治脂肪肝的疗效及其作用机理。方法:采用高脂饲料复制大鼠脂肪肝模型,同时分别给予不同剂量的肝脂片,观察肝组织病理形态的变化,测定肝组织总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量变化,以及肝超歧物过氧化物酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和维生素E(Vit E)含量的变化,并与模型组作比较。结果:肝脂片组的肝组织脂肪变性基本恢复正常,同时肝内TC和TG含量,及肝内SOD、MDA、GSH和Vit E含量恢复到接近正常。结论:肝脂片对脂肪肝的形成具有明显的防治作用,其机理除了减少脂肪自肠道的吸收外,还具有保护肝脏,提高肝抗氧化能力,促进其对脂质的氧化与转运功能的作用。

消脂饮对大鼠实验性高脂血症防治作用的研究

目的:探讨消脂饮对实验性高脂血症大鼠的影响。方法:采用饲喂高脂乳剂建立高脂血症模型,测定脂类代谢中生化指标,及血清、心肌中超歧过氧化物酶(SOD)活性和过氧化反应产物丙二醛(MDA)含量。结果:消脂饮各组与模型组比较均能明显的降低高脂血症大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量,降低血清和心肌中MDA含量,提高血清和心肌中SOD活性。结论:消脂饮对实验性高脂血症大鼠具有预防和治疗作用,其机理可能是通过清除自由基,提高机体抗氧化能力。

芪莲汤对2型糖尿病大鼠治疗作用的实验研究

目的从血糖、血清CRP及胰岛素抵抗和胰腺组织内细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)等指标观察芪莲汤对2型糖尿病(type2diabe-tes mellitus,T2DM)大鼠的保护作用及部分机制。方法应用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型,模型成功后每日灌胃给予芪莲汤(高剂量15g.kg-1.d-1,低剂量7.5g.kg-1.d-1)连续6周。实验结束后测血糖,取血清测定胰岛素含量和C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP),用免疫组织化学的方法检测胰腺组织中ICAM-1和TGF-β1蛋白表达。结果芪莲汤可显著降低2型糖尿病大鼠的血糖水平,给药组与模型组比较有显著性差别(P<0.05),血糖水平与药物剂量呈依赖关系,高剂量组和低剂量组比较有显著性差异(P<0.05)。两给药组与模型组比较胰岛素抵抗指数明显降低,统计有显著性差异(P<0.05),胰岛素抵抗指数有剂量依赖趋势,但高剂量组和低剂量组比较无统计学意义。芪莲汤能降低2型糖尿病大鼠血清CRP含量,两给药组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。免疫组化结果显示,给药组胰腺组织ICAM-1蛋白表达均低于模型组灰度值,比较有显著性差异(P<0.05),而给药组TGF-β1蛋白表达较模型组有升高,高剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论芪莲汤对2型糖尿病大鼠有明显的保护作用,其保护机制可能与降低胰腺组织中ICAM-1及升高TGF-β1蛋白表达有关。

芪莲汤颗粒剂对实验性糖尿病肾病大鼠肾组织NF-κB及MCP-1表达的影响

目的观察芪莲汤颗粒剂对实验性糖尿病肾病大鼠(diabetic nephropathy,DN)肾组织内核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达的影响,探讨芪莲汤颗粒剂对糖尿病肾病大鼠保护作用的作用机制。方法 40只大鼠分为正常对照组、模型对照组、芪莲汤颗粒剂高剂量组、芪莲汤颗粒剂低剂量组。除正常组外其它组大鼠用腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)联合高糖高脂饲料复制糖尿病肾病动物模型,用芪莲汤颗粒剂干预糖尿病肾病大鼠4个月。实验结束前用代谢笼收集大鼠12h尿液,测定尿蛋白含量;取动物血清测定血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatinine,Cr);取肾脏组织用Westernblot方法检测NF-κB、MCP-1及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehy de3phosphate dehydrogenase,GAPDH)的表达,用多媒体成像分析系统采集图像计算NF-κB、MCP-1与GAPDH的比值。结果模型对照组动物血糖、尿素氮、肌酐、尿蛋白含量较正常对照组高(P<0.01)。芪莲汤颗粒剂干预后各项指标都相应降低,给药组与模型对照组比较有差异(P<0.05或0.01)。模型对照组肾组织内NF-κB/GAPDH、MCP-1/GAPDH表达较正常对照组增高(P<0.01),芪莲汤干预后表达降低(P<0.05)。结论芪莲汤颗粒剂可以降低糖尿病肾病大鼠血糖、尿蛋白含量及血清尿素氮和肌酐,减轻糖尿病肾病大鼠的肾损害,该作用可能与下调NF-κB、MCP-1表达有关。

实验动物福利的基本要求

实验动物福利日益被人类所重视,在符合科学目的前提下通过采用更为合理的手段,充分体现实验动物福利。文章就动物实验过程中有关实验动物福利的基本要求进行探讨。

消脂饮防治大鼠高脂血症性脂肪肝的实验研究

目的研究消脂饮对大鼠实验性高脂血症性脂肪肝的防治作用。方法采用高脂乳剂建立大鼠高脂血症性脂肪肝模型,实验分为正常组、模型组、消脂饮高剂量组和低剂量组,以东宝肝泰为阳性组,以高、低剂量消脂饮和东宝肝泰进行干预,测定肝脂含量及肝中超歧物过氧化物酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和维生素E水平。结果用药各组肝中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)和肝MDA含量均明显降低;而肝SOD活性、维生素E水平和高密度脂蛋白(HDL-C)显著升高。结论消脂饮对大鼠高脂血症性脂肪肝具有预防和治疗作用,其机制可能是通过清除自由基,提高机体抗氧化能力。

叶酸联合成体神经干细胞治疗创伤性脑损伤大鼠的实验

目的观察叶酸联合成体神经干细胞对创伤性脑损伤大鼠的治疗作用,探讨其可能作用机制。方法 120只Wistar大鼠随机分为6组,正常组,模型组,假手术组,叶酸注射组,成体神经干细胞移植组,成体神经干细胞移植+叶酸注射组。倒置显微镜下观察神经干细胞形态学变化;流式细胞仪检测神经干细胞表面标记物CD105、CD45、CD44、CD29的表达;免疫荧光法检测神经元特异性烯醇酶(NSE成熟神经元的特异性标志)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP胶质细胞的标记物)的表达;平衡木实验检测大鼠运动协调与整和能力;Morris水迷宫实验测试各组大鼠的学习记忆能力;HE染色及Brdu免疫组化实验观察脑组织形态学变化;酶联免疫吸附试验检测大鼠脑组中脑源性神经生长因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)的表达;蛋白质印迹法检测脑组织中凋亡相关蛋白BCL-2、Bax、Caspase-3的表达。结果分离所得细胞能在体外传代培养,流式细胞仪检测发现细胞阳性表达CD44、CD29,阴性表达CD105、CD45,细胞经胎牛血清诱导分化后能形成NSE或GFAP阳性细胞。实验表明,叶酸与成体神经干细胞干预创伤性脑损伤大鼠模型后能显著改善其行为学变化,减轻脑组织的炎症反应,恢复受损神经细胞,增加脑组织内BDNF、NGF的含量,上调BCL-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达。结论叶酸联合成体神经干细胞干预创伤性脑损伤大鼠能显著改善中枢神经功能,对维持神经元微环境稳态具有重要的作用。

如意膏的药效学实验研究

目的 :如意膏的药效研究。方法 :采用多种炎症模型 ,观察如意膏的抗炎作用 ;用昆明种小鼠醋酸扭体镇痛实验、热板法镇痛实验、活血化瘀实验 ,对如意膏进行抗炎、镇痛及活血化瘀作用的研究。结论 :如意膏能减轻化学刺激 ( H+ )、物理刺激 (热 )所致的疼痛 ,具有良好的抗炎镇痛及活血化瘀作用。

氩氦刀冻融兔肝后局部结缔组织变化的实验研究

探讨氩氦刀冻融兔肝后局部结缔组织的变化过程,为临床上氩氦刀治疗肝脏肿瘤提供实验依据。将氩氦刀置于兔肝表面进行2个冻融循环,在不同时间点取局部肝组织,经HE和胶原染色后在光镜下观察。冻融后12、d,冻融区与未冻融区之间无结缔组织产生。冻融后第4 d,在近肝门的交界线的冻融区侧有纤细的结缔组织增生。第8 d近肝门侧的交界处的结缔组织增生带增宽,其余交界处亦形成较薄的结缔组织带。第16 d近肝门侧及周围的组织带进一步增宽。第30 d,周围的结缔组织带与表面的结缔组织带贴近或合并,形成一个盘状疤痕覆盖在新生的肝组织表面。说明氩氦刀冻融后冻融区内的结缔组织经历一个急速变性,缓慢变质并被逐渐吸收的过程。而冻融区周围则产生结缔组织并逐渐增厚形成结缔组织带,逐渐地底层的结缔组织带与表面的结缔组织带靠近进而相贴,形成一个圆盘状的疤痕贴在新生的肝组织表面。

组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞

背景:研究显示兔脂肪干细胞的体外分离方法大多数为Ⅰ型胶原酶消化法,采用组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞尚不多见。目的:采用组织块贴壁法从兔脂肪组织中分离培养兔脂肪干细胞,并进行成脂、成骨的诱导分化。方法:采用组织块贴壁法分离出兔脂肪干细胞,进行体外培养,观察其形态特征。取对数生长期的第3代细胞,用MTT法绘制其生长曲线;流式细胞仪检测其表面抗原CD29、CD44、CD45的表达情况;分别用成脂和成骨诱导培养液诱导其向脂肪细胞和成骨细胞分化,油红O、茜素红染色定性鉴定。结果与结论:体外培养的兔脂肪干细胞呈梭形纤维样细胞形态,生长力旺盛。流式细胞术分析结果显示,第3代兔脂肪间充质干细胞强表达CD29,CD44,阴性表达CD45。兔脂肪干细胞经成脂诱导14 d后,油红O染色阳性;成骨诱导培养14 d后,茜素红染色阳性。提示组织块贴壁法可以分离培养出兔脂肪干细胞。

葡萄籽原花青素对原代培养海马细胞氧化应激的影响

目的:研究葡萄籽原花青素(GSP)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠原代培养海马细胞氧化应激损伤的影响。方法:采用原代培养的方法,建立H2O2致海马细胞氧化损伤模型,观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活力;化学比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以及活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量。结果:1 mmol/L的H2O2诱导海马细胞24 h,细胞活力下降(均P<0.01),细胞内ROS和MDA含量增加,SOD、CAT及GSH-Px活性下降。而GSP可明显减少细胞损伤,使细胞内SOD、CAT及GSH-Px活性增加,并减少细胞内ROS和MDA含量。结论:GSP对H2O2诱导的海马神经细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高海马细胞的抗氧化能力有关。

刺五加多糖的抗氧化损伤作用研究

目的:研究刺五加多糖(Acanthopanacis senticosi polysaccharides,ASPS)对大鼠海马细胞有无抗氧化损伤作用,并探讨其可能的机制。方法:运用海马神经细胞原代培养技术,采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型。观察细胞形态学变化,MTT法测定细胞活性,免疫组化法检测细胞中P53蛋白表达,检测细胞外液中乳酸脱氢酶(LDH)的活力,细胞匀浆液中过氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)生成量。结果:形态学观察显示,与模型组比较,ASPS组细胞损伤程度明显减轻;ASPS组细胞活性(0.46)比模型组细胞活性(0.36)高(P<0.01),ASPS组P53表达量较低而模型组表达量较高;LDH活力及MDA生成量ASPS组明显低于模型组,但SOD活力ASPS组显著高于模型组。结论:ASPS能提高海马神经细胞的抗氧化能力,并具有一定的浓度依赖性。

莲房原花青素对高脂血症大鼠脂质过氧化及内皮素1的影响

目的研究莲房原花青素(Proanthocyanidins from Lotus Seedpod,LSPC)对食饵性高脂血症模型大鼠脂质过氧化和内皮素1(ET-1)的调节作用。方法Wistar大鼠随机分成4组,即对照组(C组)、高脂血症模型组(H组)、LSPC高剂量组(HD组)、LSPC低剂量组(LD组),除对照组饲普通饲料外,其余各组喂饲高脂饲料并进行干预实验比较。4周后检测大鼠血脂及血浆超歧物过氧化物酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、ET-1的变化。结果与对照组相比较,H组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平显著升高;血浆中MDA和ET-1含量明显增高,而SOD活性和NO含量明显降低。HD组和LD组血浆SOD活性和NO含量显著升高,MDA和ET-1含量明显降低,但对血脂水平无显著性影响。结论LSPC具有心血管保护作用,其作用机制与抗氧化作用和改善血管内皮功能有关。

额叶皮质损伤对大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

本实验探讨了前额叶皮质局限性损伤对大鼠学习、记忆功能及基底前脑胆碱能神经元的影响。用外科手术造成大鼠一侧前额叶皮质局限性损伤后不同时间 ,用Y型迷宫检测学习、记忆功能 ,用组织化学技术检测基底前脑含乙酰胆碱酯酶 (AChE)活性神经元。实验观察到前额叶皮质损伤后 1周 ,动物学习、记忆功能有所障碍 ,损伤同侧的基底前脑胆碱能神经元有所减少 ,但均无统计学意义。损伤后 2 ,3,4周 ,动物学习、记忆障碍明显 ,损伤同侧基底前脑胆碱能神经元明显减少 (P <0 .0 5) ,且两者变化相平行。结果表明单侧前额叶皮质局限性损伤不仅可引起动物学习、记忆功能障碍 ,且可引起同侧基底前脑胆碱能神经元丢失 ,且两者发展相平行 ,提示基底前脑胆碱能神经元逆行性变性在动物额叶皮质损伤引起的学习。

乌司他丁联合甲基泼尼松龙对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨乌司他丁联合甲基泼尼松龙对大鼠肺缺血再灌注损伤时血清水通道蛋白-1(AQP 1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为5组(n=8):正常对照组、模型对照组、甲基泼尼松龙组(30 mg/kg)、乌司他丁组(50 000 U/kg)及联合治疗组[甲基泼尼松龙(30 mg/kg)联合乌司他丁(50 000 U/kg)]。采用ELISA法检测血清AQP 1和TNF-α水平;考马斯亮蓝法检测肺泡灌洗液中蛋白质含量;检测肺湿/干质量并对肺进行形态学观察。结果与模型对照组相比,乌司他丁组或甲基泼尼松龙组血清AQP 1质量浓度明显增加,而TNF-α质量浓度明显降低,联合治疗组血清AQP 1与TNF-α的改变更为明显(P<0.01);乌司他丁组、甲基泼尼松龙组及联合治疗组的肺泡灌洗液中蛋白质含量及肺组织湿/干质量比值均明显降低(P<0.01)。结论乌司他丁联合甲基泼尼松龙对大鼠缺血再灌注急性肺损伤具有良好的治疗作用,其机制可能与提高血清AQP 1水平及降低TNF-α水平有关。

葡萄籽原花青素对海马细胞氧化损伤和凋亡的影响

目的:观察葡萄籽原花青素(GSP)对大鼠海马细胞氧化损伤的保护作用,及对凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法:建立H2O2致海马细胞损伤模型,观察GSP对细胞形态和细胞存活率的影响;并用免疫组化法检测GSP对凋亡相关基因Bcl-2与Bax蛋白表达的影响。结果:1 mmol/L H2O2诱导海马细胞损伤,细胞活力下降(P<0.001),细胞凋亡小体明显增多,细胞中Bcl-2表达下降和Bax表达升高。而GSP可明显减少细胞损伤,上调细胞中Bcl-2的表达,使细胞中Bax表达明显减少,(P<0.01),细胞凋亡明显改善。结论:GSP对H2O2诱导的海马神经细胞凋亡具有保护作用,与GSP可增加Bcl-2表达同时减少Bax表达有关。

刺五加多糖对氧化应激损伤的海马神经元iNOS mRNA表达的影响

目的研究刺五加多糖(Acanthopanacis senticosi polysaccharides,ASPS)对氧化应激损伤的海马神经元iNOS mRNA表达的影响,并探讨其可能机制。方法运用海马神经细胞原代培养技术,采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型。观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活性;化学比色法检测细胞匀浆液中一氧化氮(NO)的含量;RT-PCR法检测iNOS mRNA的表达。结果形态学观察显示:与模型组比较,ASPS组细胞损伤程度明显减轻,NO的含量和iNOS mRNA的表达显著降低,ASPS组细胞活性(0.46)比模型组细胞活性(0.36)高(P<0.01)。结论ASPS能够下调iNOS mRNA的表达,并对海马神经元氧化损伤有保护作用。