套式逆转录聚合酶链反应在黄热病毒快速检测中的应用

目的建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RTPCR)快速检测黄热病毒方法。方法参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对镁离子、dNTP及引物浓度,PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的套式RTPCR快速检测黄热病毒方法,并以同属于黄病毒科的登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎病毒为对照,验证其特异性。结果外引物扩增可获得404bp左右的特异性扩增片断,阴性对照毒株未见设计大小的扩增片断,但可见非特异性片断;内引物扩增可获得349bp左右片断,阴性对照无扩增条带。结论套式RTPCR可快速、灵敏、特异的检测黄热病毒。

广东省江门地区登革病毒分离株的鉴定及结构蛋白序列分析

目的 对广东省江门地区 2 0 0 1年夏、秋季一批发热、出疹患者进行确诊 ,并从分子水平分析流行株的可能来源。方法 分别采用免疫荧光、细胞毒力、乳鼠毒力实验以及逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术进行病毒鉴定 ,并对其结构蛋白基因序列进行克隆、测序及同源性搜索。结果37份患者血清登革病毒 (DV)IgM抗体阳性率为 97% (36 37) ,IgG抗体阳性率为 59% (2 2 37) ,最高抗体滴度均可达 1∶640。所得病毒可致C6 36细胞病变 ,具有乳鼠神经毒力 ;其结构基因序列长度为2 32 5bp ,编码 774个氨基酸 ;与其他登革 2型病毒株TSV0 1、GD0 6 93、NGC、44、ThNH、0 4、GD0 8 98及S1进行比较 ,其核酸序列同源性 (% )分别为 98、96、94、94、92、92、92、91。结论 2 0 0 1年江门地区登革热流行为登革 2型病毒感染所致 。