中国大陆广州管圆线虫病首例死亡病区终宿主鼠类的调查研究

目的 了解中国大陆广州管圆线虫病首例死亡病区终宿主种类及鼠类自然感染情况。方法 采用药械诱捕鼠类 ,解剖心肺 ,收集统计虫体。结果 褐家鼠、黄毛鼠、板齿鼠、黄胸鼠和小家鼠自然感染率分别为 8 33% (6 / 72 ) ,6 2 5 % (3/4 6 ) ,5 2 6 % (2 / 38) ,3 33% (1/ 30 )和 0 % (0 / 35 )。平均自然感染率为 5 4 3% (12 / 2 2 1)。结论 存在广州管圆线虫阳性鼠类 ,表明该地是广州管圆线虫自然疫源地。小家鼠不是广州管圆线虫的适宜终宿主。

三十日龄Fmr1基因敲除小鼠的水迷宫实验观察

目的实验对30日龄的Fmr1基因敲除(KO)小鼠的经典Morris水迷宫实验进行观察。方法采用Morris水迷宫实验,测试1月龄KO小鼠与WT小鼠的学习记忆功能。水迷宫实验共训练4 d,记录每天的潜伏期与游泳轨迹,第5天去除平台,记录小鼠停留各象限的时间百分比。根据所获得的数据进行多因素方差分析处理。结果①空间航行实验第1天至第3天实验中KO鼠与WT鼠的潜伏期和穿越平台次数差异无统计学意义(P>0.05);在第4天实验中KO鼠的潜伏期和穿越平台次数比WT鼠差异有统计学意义(P<0.05)。②空间搜索实验4周龄WT鼠在目标象限停留时间比其它象限停留时间长;4周龄KO鼠在第二象限停留时间长。结论 30日龄KO小鼠存在认知功能障碍。

采用PCR方法检测Fmr1基因敲除小鼠的基因型

目的为Fmr1基因敲除小鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。方法设计两对引物扩增野生型Fmr1基因和Fmr1缺陷突变基因的DNA片段,用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度,并将所得基因型结果与经典的western blot方法比较。结果野生型仅在800bp处有一条条带,突变纯合子仅在500bp处有一条条带,杂合子则在500bp和800bp处出现两条条带。用PCR方法获得的Fmr1基因分析结果与经典的western blot方法获得的结果完全一致。结论用PCR方法分析Fmr1基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。

30日龄FMR1基因敲除小鼠的旷场行为观察

目的观察30日龄FMR1基因敲除小鼠的旷场行为进行。方法在旷场实验中采取4个区域分割采用VIEWER软件及目测对30日龄的FMR1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行旷场行为观察,数据采用多因素方差分析处理。结果采用VIEWER软件分析发现:FMR1基因敲除小鼠在第4区域的停留时间、运动长度、进入格次数、伸头较野生型小鼠显著增加,而在在第1区域的Tailmoves较野生型小鼠显著减少,FMR1基因敲除小鼠在各区的速度,站立不动与野生型小鼠无明显差别。FMR1基因敲除小鼠在第3区域的运动长度和进入格次数也较野生型小鼠显著增加,FMR1基因敲除小鼠在第2区域和第3区域的点头较野生型小鼠显著增加,P<0.05。采用目测分析发现:FMR1基因敲除小鼠在第4区域进入次数较野生型小鼠增加(P<0.05),FMR1基因敲除小鼠跨线次数较野生型小鼠显著增加,P<0.05。结论30日龄FMR1基因敲除小鼠的行为异常,运动性和兴奋性较野生型小鼠增高。采用VIEWER软件较目测更更加灵敏、客观、准确。

乳腺增生大鼠模型bc1-2蛋白表达及中药健乳灵的调节作用

目的观察乳腺增生大鼠模型中bc1-2蛋白的表达及中药健乳灵的调节作用。方法将雌性SD大鼠45只随机分为正常组、模型组和治疗组,造模后正常组和模型组给常规饲料,治疗组给含健乳灵的饲料。实验结束时取第2、3对乳房作石蜡切片,用SABC免疫组化染色观察bc1-2蛋白表达的情况。结果各组大鼠中可均见bc1-2蛋白的表达,但模型组大鼠bc1-2蛋白表达明显减少,治疗组大鼠bc1-2的表达明显高于模型组,与正常组相近。结论乳腺增生大鼠中bc1-2蛋白明显减少,中药健乳灵能明显上调bc1-2蛋白含量,可能起到防止乳腺癌发生的作用。

α-细辛醚对小鼠旷场行为的影响

目的探讨α-细辛醚对小鼠旷场行为的影响。方法将105只30dFvb wt小鼠分成7组,采用不同浓度α-细辛醚(1～24mg/kg)分别对小鼠进行处理,分析α-细辛醚对小鼠旷场行为的影响。结果高浓度(9～24mg/kg)α-细辛醚对小鼠探索性、兴奋性、运动性有抑制作用;低浓度(3～6mg/kg)α-细辛醚对小鼠的旷场行为有兴奋作用。结论α-细辛醚对中枢神经系统有双向调节作用。

Fmr1基因敲除小鼠的ABR阈值观察

目的对不同周龄的KO与WT小鼠听阈进行检测并对比,了解KO小鼠的听阈变化。方法采用PCR法鉴定FMR1基因敲除型(KO)纯合子(-/-)及其野生型(WT)纯合子(+/+)FVB近交系小鼠,实验动物150只分两组:(1)KO组(3、4、6、8、10周龄,每周龄15只,共75只;②WT组(3、4、6、8、10周龄,每周龄15,共75只,用于听性脑干反应(ABR)测试。数据及图像的采集:以ABR图形中Ⅱ波的阈值为小鼠的ABR阈值。结果 ABR阈值:3周及4周年龄组小鼠各基因型间KO小鼠的ABR阈值显著高于WT小鼠,差异有统计学意义(P<0.01);6、8、10周各组中各基因型小鼠的KO小鼠和WT小鼠的ABR阈值的差异无统计学意义(P>0.05)。结论幼年期FMR-1 KO小鼠听阈提高,成熟期FMR-1 KO小鼠听阈无异常,KO小鼠ABR的结果与AGS发生的年龄依赖性相一致。

Fmr1基因敲除小鼠的听源性惊厥行为的观察

目的对不同年龄Fmr1基因敲除小鼠的听源性惊厥行为观察。方法使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后对不同周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行听源性惊厥的观察,数据采用多因素方差分析处理。结果经PCR技术证实脆性X综合征小鼠模型是Fmr1基因敲除小鼠。Fmr1基因敲除小鼠在中央区的惊厥阈值较野生型小鼠显著短。Fmr1基因敲除小鼠鼠受声音刺激后表现为惊恐、奔跑明显的AGS前驱表现,最后发生跌倒、惊厥,呈角弓反张状,最后恢复活动能力或者反复发作,或者导致死亡。结论 Fmr1基因敲除小鼠的行为异常,其兴奋性较野生型小鼠增高。

锂对脆性X综合征小鼠模型的跳台行为及糖原合成酶激酶3β活性的影响

目的探讨氯化锂治疗是否能改善Fmr1基因敲除小鼠(ko鼠)学习跳台行为及糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的活性。方法选用30日龄的Fmr1基因敲除小鼠(ko鼠)及同日龄的野生型小鼠(wt鼠),两种小鼠均分别给予生理盐水和氯化锂30、60、90、120、200 mg/kg。观察用药后ko鼠及wt鼠分别在行为学跳台实验中的潜伏期和错误次数。同时用免疫印迹观察ko及wt鼠的海马和皮层的GSK3β和磷酸化GSK3β(P-GSK3β)的表达。结果与未治疗的wt鼠比较,未治疗的ko鼠跳台实验中的潜伏期时间短,错误次数增加,存在学习跳台障碍;免疫印迹实验结果:ko鼠P-GSK3β表达比wt鼠少。氯化锂治疗能够恢复ko鼠的学习跳台行为及增加P-GSK3β的表达量。氯化锂最佳使用剂量为30 mg/kg。结论锂能改善ko鼠的学习跳台能力,可能与锂改善P-GSK3β的表达增加有关,对Fmr1基因敲除小鼠有治疗作用。

Fmr1基因敲除小鼠耳蜗GAD的表达

目的对4周龄Fmr1基因敲除小鼠的耳蜗的GAD表达进行观察,探讨耳蜗GAD的表达是否受FMRP的影响。方法使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠各15只进行耳蜗的苏木精-伊红(HE)染色和GAD免疫组织化学的表达观察,数据采用多因素方差分析处理。结果耳蜗HE染色结果:4周龄组KO鼠较WT鼠形态学观察无差异。4周龄KO小鼠的耳蜗中GAD表达的平均阳性细胞数均高于WT小鼠,P<0.01,差异具有统计学意义。结论 GAD表达的改变可能与FMR1基因KO小鼠听源性惊厥发病有关。

柴胡桂枝汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠脑组织超氧化物歧化酶和丙二醛及一氧化氮的影响

目的利用超临界二氧化碳(CO2)萃取法获取柴胡桂枝汤挥发油,并在Fmr1基因敲除小鼠(脆性基因敲除小鼠)模型上观察柴胡桂枝汤挥发油的抗癫痫作用,及其与超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的关系。方法将30只30日龄的Fmr1基因敲除小鼠(KO)和30只30日龄的野生型小鼠(WT)分别分成两组(KO空白组和KO用药组,WT空白组和WT用药组),按1.7ml/kg的剂量腹腔注射柴胡桂枝汤挥发油,观察柴胡桂枝汤挥发油对小鼠旷场行为的影响,并取不同部位的小鼠脑组织制成1∶10(重量体积比)的组织匀浆,测定SOD活性及MDA、NO的水平。结果与空白组比较,用药组小鼠在旷场实验中运动的平均速度、总路程、穿过各区的次数减少;脑组织中SOD活性增高,而MDA、NO水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柴胡桂枝汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠的探索性、兴奋性、运动性均有抑制作用;其抗癫痫作用与清除自由基、阻止过氧化物生成,减少NO的神经毒性相关。

4周龄Fmr1基因敲除小鼠的高架十字迷宫行为观察

目的对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠的高架十字迷宫行为进行观察。方法采用SMART软件对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠(KO)和野生型小鼠(WT)进行高架十字迷宫行为观察,数据采用多因素方差分析处理。结果采用SMART软件分析发现:在高架十字迷宫实验中,与WT组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显增强,且KO组小鼠在开放区域活动时间,次数以及路程均明显高于WT组。结论 4周龄Fmr1基因敲除小鼠的行为异常,运动性和兴奋性较野生型小鼠增高。

Fmr1基因敲除小鼠耳蜗的GABAα1受体的表达

目的对4周龄Fmr1基因敲除小鼠耳蜗的GABAα1受体表达进行观察,探讨耳蜗GABAα1受体的表达是否受FMRP的影响。方法使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后,对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行耳蜗的GABAα1受体免疫组织化学的表达观察,数据采用多因素方差分析处理。结果耳蜗HE染色结果:4周龄组KO鼠较WT鼠形态学观察无差异。4周龄KO小鼠的耳蜗中GABAα1受体表达的平均阳性细胞数均低于WT小鼠,P<0.01,差异具有统计学意义。结论 GABAα1受体表达的降低可能与FMR1基因KO小鼠听源性惊厥发病有关。

CaMKⅡα在FMR1基因敲除小鼠脑组织中的表达

目的观察FMR，基因敲除型（KO）小鼠脑组织中钙／钙调素依赖蛋白激酶Ⅱα（CaMKⅡα）表达的改变，探讨CaMKⅡα是否为脆性X综合征相关蛋白（FMRP）的下调蛋白。方法PCR鉴定FVB近交系小鼠的基因型，按基因型的不同分为KO组和野生型（WT）组，每组10只。免疫组化染色检测K0及WT小鼠脑组织CaMKⅡα的表达与分布，用图像分析仪分别采集不同脑区免疫信号的吸光度（A）值进行比较。结果免疫组化染色检测显示KO与WT小鼠各个脑区普遍存存阳性信号；神经元胞浆尤其是靠近胞体的近端突起上信号呈强阳性,树突中亦有阳性信号，轴突上信号较弱；KO小鼠各脑区CaMKⅡα阳性信号的A值均较WT小鼠显著增高，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论CaMKⅡα在成年KO小鼠各脑区的表达均显著增多，提示FMRP负性调节CaMKⅡα的表达。