医学院校生物技术专业普通生物学教学实践与探索

普通生物学是覆盖生命科学众多学科领域的综合性基础课程,也是生物技术类专业学生的一门专业基础课程,为了解决在医学院校低年级开设该课程所面临的教学内容多、知识面广、学时少、学生基本知识欠缺的突出矛盾,我教研室对普通生物学课程的教学内容和教学模式进行了改革与探索,旨在提高普通生物学的教学效果和质量,为培养高素质的合格人才提供科学保证。

研究性教学模式在医学细胞生物学教学的应用

研究性教学模式是以学生为主体,以问题为核心类似科学研究的方式去获取知识和应用知识的教学模式。从教经历出发,总结借鉴相关有益教学方法,主要从问题的导向性、主动探究、积极创新和课外延伸四个相互关联的层面探讨提高医学细胞生物学的教学效果的方法。

He-Ne激光照射对脑梗死患者淋巴细胞生物学的影响

目的探讨鼻腔内低强度激光照射治疗(ILILT)对脑梗死患者淋巴细胞增殖、畸变、凋亡和细胞周期动力学指数的影响,以及致突变性。方法对ILILT前、后的35例脑梗死患者和35例健康成年人外周血进行淋巴细胞培养,并进行细胞增殖指数(MI)、细胞周期动力学指数(CKI)、姐妹染色单体交换(SCE)频率和细胞凋亡的分析,观察ILILT对淋巴细胞的效应。结果ILILT后,脑梗死患者的淋巴细胞增殖活性比对照组和照射前有所提高,并且随着照射剂量的增加其增殖活性也增高(P<0.05,P<0.001),但对淋巴细胞周期的进程影响不大。各组间的SCE频率差异不显著(P>0.05)。ILILT前、后的CKI与对照组相比,差异无显著意义(P>0.05)。ILILT后脑梗死患者的细胞凋亡率比照射前和对照组比较均有极显著增加(P<0.001)。结论ILILT能提高脑梗死患者的淋巴细胞增殖活性,虽可诱发较高的淋巴细胞凋亡率,但对细胞没有致突变性。

蒲公英对环磷酰胺致小鼠骨髓细胞突变作用的抑制研究

目的 :研究蒲公英(TM)抗突变作用和对细胞增殖的影响。 方法 :采用小鼠骨髓淋巴细胞有丝分裂指数试验、染色体畸变试验、微核试验 ,观察蒲公英水煎液对小鼠骨髓淋巴细胞的遗传损伤效应的影响。结果 :①环磷酰胺(CP)单独作用时 ,能抑制小鼠骨髓淋巴细胞的增殖(P<0.01) ;与TM联合作用时 ,有丝分裂指数明显比阳性对照组提高(P<0.01)。②蒲公英低、中、高剂量组均能明显地抑制由于CP引起的染色体畸变率 ,其抑制率分别为39.62 %、58.49 %、54.72 % ,同时对CP诱发的微核率也有明显的抑制效应 ;蒲公英水煎液不会导致小鼠骨髓淋巴细胞的染色体畸变和微核率的增加(P>0.05)。结论 :蒲公英本身没有致突变性 ,能抑制CP诱发的染色体畸变和微核率 ,促进细胞的增殖能力。

高温诱导细胞凋亡的机制

高温诱导的凋亡是近几年研究的热点课题,它在临床上和抗癌药物、辐射一起使用能增加杀死肿瘤细胞的效率,但是其诱导凋亡的机 制目前还不是十分清楚。本文通过讨论热休克蛋白、活性氧和Ca^(2+)这三者在高温诱导凋亡所起的作用,试图介绍近年来探讨机制方面的进展。

板蓝根对试验性小鼠遗传毒性的影响

目的 :研究板蓝根水煎液在实验性小鼠体内是否具有遗传毒性。方法 :应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形实验 ,观察板蓝根水煎液在小鼠体内能否诱发体细胞和雄性生殖细胞遗传物质的损伤。结果 :板蓝根水煎液能明显诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和小鼠精子畸形 ,具有致突变作用。结论 :板蓝根水煎液作为一种临床常用的清热解毒和治疗肿瘤的中草药 ,在剂量较大时 ,具有致突变性 ,临床使用上应注意。

小鼠胚胎干细胞药物代谢酶CYP3a11基因敲除的实验研究

目的研究小鼠胚胎干细胞药物代谢酶CYP3a11基因的敲除。方法根据已知小鼠的CYP3a11基因组DNA序列,从129品系小鼠E14胚胎干细胞基因组DNA中,通过PCR的方法分别获得用于构建基因敲除载体的0.65kb的5'-短臂(short arm,SA)和(3.3+4)kb的3'-长臂(long arm,LA)片段,通过常规分子克隆技术,构建完成针对小鼠药物代谢酶CYP3a11基因的替代型基因敲除载体pCR-CYP3a11_KO,并对载体进行酶切鉴定。将线性化的pCR-CYP3a11_KO载体通过电穿孔技术转入E14胚胎干细胞。G418药物筛选4～6周直至克隆形成,用PCR和Southern blot技术对筛选出的细胞克隆进行鉴定。结果酶切结果表明基因敲除载体pCR-CYP3a11_KO DNA序列正确;转染后的E14胚胎干细胞经过G418筛选后,存活的细胞可形成单克隆集落,经过PCR和Southern blot技术鉴定,其中有5个单克隆被证实CYP3a11基因已被敲除。结论成功构建了小鼠CYP3a11基因敲除载体,并在小鼠E14胚胎干细胞的CYP3a11基因敲除中获得阳性克隆。

高表达重组Ret蛋白B16细胞株的建立

目的:探讨建立高表达重组Ret蛋白的B16细胞株的方法,为Ret抗原的免疫原性研究提供靶细胞。方法:通过常规分子克隆的方法,构建Fxyd3-Ret嵌合蛋白的真核表达质粒pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2;将该质粒转染293细胞以验证构建质粒的可行性;将该质粒转染B16细胞,通过筛选获得Fxyd3-Ret蛋白高表达的阳性细胞株。结果:PCR和酶切验证pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2的产物片段大小符合预期,Western blot对转染pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2质粒的细胞进行检测,发现在转染细胞内有目标蛋白高表达。结论:成功构建了pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2真核转染质粒;成功建立了Ret蛋白高表达的B16细胞株。

利用FRET技术实时检测Bid蛋白在TNF-α诱导PC12细胞凋亡过程中的作用

】目的在活细胞中实时检测TNF-α诱导PCI2细胞凋亡过程中Bid蛋白的作用并探讨PCI2细胞凋亡的信号通路。方法利用基于荧光共振能量转移（nuoreseence resonance energyt ransfer，FRET）原理设计的荧光探针pFRET-Bid（YFP-Bid-CFP）转染PC12细胞后，在激光共聚焦显微镜下实时检测Bid蛋白的切割情况，并采用专用软件进行数据分析。结果TNF-α诱导细胞凋亡的过程中，在短时间内（3h）就凋亡的细胞中观测不到bid的切割，而在8h后凋亡的细胞中却观测到了bid的切割。结论通过分析实验结果推测不同时间凋亡的细胞经过的信号通路是不同的，一个是不通过线粒体的较快途径，一个是需要通过线粒体的较慢途径。

蝙蝠SARS样冠状病毒S蛋白受体结合域在昆虫细胞中的表达和纯化

目的:在昆虫细胞表达系统中表达蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域,并探讨其表达动力学和纯化条件。方法:以PCR扩增蝙蝠SARS样冠状病毒Spike基因的受体结合域片段,产物连接到pMD-T载体,再亚克隆至供体质粒pFAST-HTB,经序列测定确认基因正确克隆,进一步将其转座入Bacmid中,在昆虫细胞Sf9中进行表达,采用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析,并通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。结果:在昆虫细胞表达系统中表达出蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段,当感染复数(multiplicity of infectiin,MOI)为2时,重组病毒感染细胞56 h后,重组蛋白的表达量达到峰值。结论:蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达,并可通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。

小鼠增龄过程中胸腺细胞的退行性改变

目的:探讨在小鼠增龄过程中胸腺细胞退行性改变的机制。方法:选用20只不同月龄的昆明小鼠,共分为4组(乳鼠组、1月龄鼠组、3月龄鼠组及6月龄鼠组),用颈椎脱臼法处死小鼠,取出胸腺,通过HE染色检测各月龄小鼠胸腺细胞的状态和分布变化;采用流式细胞仪检测各月龄小鼠胸腺细胞的自然凋亡率及细胞周期各时相的细胞比例。结果:6月龄鼠组小鼠胸腺严重萎缩,胸腺细胞自然凋亡率与其他组比较,差异具有统计学意义。各组小鼠不同细胞周期的胰腺细胞分布不同,S期细胞凋亡速度最快。结论:小鼠增龄相关的退行性改变可能主要作用于S期进入G_2期的相关蛋白。

中华眼镜蛇毒膜毒素对荷瘤小鼠S_(180)细胞增殖和Bcl-2表达的影响

目的:探讨蛇毒膜毒素(CTX)对移植性肿瘤的抑制及其对肿瘤细胞Bcl-2表达的影响。方法:选取ICR小鼠48只,随机分为四组,在各组小鼠右腋皮下接种S180肉瘤细胞,3d后各实验组小鼠分别腋下注射CTX0.8 mg/kg、0.4 mg,/kg、0.2 mg/kg各0.1 mL,连续10 d。分析统计荷瘤小鼠的体重变化和肿瘤抑制率,并通过核仁组织区银染技术(AgNOR)和bcl-2蛋白的免疫组化实验,探讨CTX对体内肿瘤细胞生长和增殖的影响。结果:CTX各剂量组荷瘤小鼠的平均瘤重和瘤/体比值与对照组相比显著地减少(P<0.01),并有明显的剂量反应关系;CTX对体内S180肿瘤细胞的核仁形成区有明显的抑制效应,底、中、高剂量组的AgNOR数(3.693、2.578、1.042)均比对照组(x=3.858)明显减少,且随着CTX处理的浓度越大,AgNOR的数目也越少(P<0.05,P<0.001);对照组肿瘤细胞的bcl-2蛋白表达强烈,经CTX处理后,bcl-2蛋白表达减弱或被完全抑制。结论:CTX对荷瘤小鼠体内肿瘤细胞生长的抑制作用,可能是通过抑制rDNA基因的活性和干扰bcl-2蛋白的表达,从而干扰和阻断肿瘤细胞的增殖。

马尾松树皮提取物抗肿瘤作用的实验研究

目的:探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)对S180腹水瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法:采用NIH小鼠S180腹水瘤模型,通过腹腔注射PMBE,观察PMBE对S180腹水瘤小鼠的体重增长、腹水瘤体积、抑瘤率、胸腺和脾脏的脏器系数、外周血白细胞数量、T淋巴细胞增殖率、凋亡率和细胞周期的变化。结果:PMBE对S180腹水瘤细胞表现出明显抑制作用。50,100,200 mg/kgPMBE剂量组的抑瘤率分别为9.95%、65.74%、88.04%;小鼠的体重增长相应下降;PMBE高剂量组能明显提高胸腺指数、脾脏指数、外周血白细胞数量和T淋巴细胞增殖率。PMBE中剂量组能明显诱导S180细胞凋亡,且细胞周期分析显示PMBE使S180细胞阻滞在S期。结论:PMBE通过增强免疫功能和诱导细胞凋亡来抑制S180腹水瘤生长。

蒲公英水煎液对环磷酰胺诱导的实验性小鼠精子畸形的影响

目的 :研究蒲公英水煎液对实验性小鼠生殖细胞遗传物质的影响。方法 :应用小鼠精子畸形实验 ,观察蒲公英水煎液本身能否诱发雄性生殖细胞遗物质的损伤 ;以及对环磷酰胺诱导的雄性生殖遗传物质损伤是否具有抑制作用。结果 :蒲公英水煎液本身不能诱发实验性小鼠精子畸形 ;对环磷酰胺诱导实验性小鼠精子畸形具有明显抑制作用。结论 :蒲公英水煎液具有一定的抗突变作用 ,可安全应于临床肿瘤治疗。

低能量He-Ne激光血管内照射对脑梗死患者淋巴细胞的影响

目的 探讨He Ne激光血管内照射 (ILIB)对脑梗死患者淋巴细胞增殖和凋亡的影响 ,以及有否遗传毒性。方法 对ILIB治疗前、后的脑梗死患者外周血进行淋巴细胞培养 ,并进行细胞增殖指数(MI)、细胞周期动力学指数 (CKI)、姐妹染色单体交换 (SCE)频率和细胞凋亡的分析 ,观察ILIB对淋巴细胞的效应。结果 经ILIB照射后 ,脑梗死患者的淋巴细胞增殖活性比对照组和照射前有所提高 ,并且随着照射剂量的增加 ,其增殖活性也增高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 0 1) ,但对淋巴细胞周期的进程影响不是很大 ,ILIB治疗前、后的CKI与对照组相比 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;各组间的SCE频率差异不显著 (P >0 .0 5 ) ;流式细胞仪 (FCM )检测后显示 ,经ILIB照射后的脑梗死患者的细胞凋亡率比照射前和对照组均有极显著增高(P <0 .0 0 1)。结论 低能量He Ne激光血管内照射能提高脑梗死患者的淋巴细胞增殖活性 ,虽可诱发较高的淋巴细胞凋亡率 ,但对细胞没有致突变性。

自噬途径对反式-BPDE诱导人支气管上皮细胞16HBE影响及其机制的探讨

目的:研究反式-BPDE诱导正常的人支气管上皮细胞16HBE发生恶性转化前后自噬水平的变化及其可能机制。方法:利用前期建立的细胞恶性转化模型,采用激光共聚焦扫描显微镜成像技术,在无损伤状态下,实时观测反式-BPDE恶性转化细胞(16HBE-T)和正常细胞(16HBE-N)中自噬体标记蛋白GFP-LC3的荧光强度及定位,并利用蛋白质印迹法技术检测细胞内自噬信号通路关键效应分子的表达。结果:16HBE-T细胞与16HBE-N细胞相比,GFP-LC3蛋白的点状聚集明显减少,只有16HBE-N细胞的1/3左右,表明自噬水平下降,蛋白质印迹法检测发现,mTOR激酶活性上升,Beclin 1表达下降。结论:反式-BPDE可能通过自噬途径参与诱导16HBE细胞恶性转化的癌变过程,将为预防和治疗肺癌提供重要信息。

中国女性对于FMR1突变产前筛查的态度调查(英文)

目的调查中国女性对于脆性X综合征产前筛查的态度。方法随机调查284位没有智力发育障碍及脆性X综合征家族史的女性,分为已婚已育(67/284)、已婚未育(54/284)及未婚未育(163/284)三组。结果各组愿意接受产前筛查的比率分别为77.6%、66.7%及74.9%。而各组选择在得知产前筛查结果阳性时愿意终止妊娠的比率分别为95.5%、92.6%及90.2%。结论在中国女性群体中对FMR1基因突变进行产前筛查有较高的接受度。大多数人选择接受针对脆X综合征的产前筛查。