日本血吸虫感染小鼠肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答

目的观察C57BL／6小鼠感染日本血吸虫后肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答。方法20只C57BU6小鼠随机分为感染组和对照组．每组10只，感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴，每鼠（40＋5）条。感染后5-6周分离小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细胞，分别用抗小鼠CD3单克隆抗体（anti-CD3，1μg／m1）和抗小鼠CD28单克隆抗体（anti-CD28，1μg/ml）刺激，培养4h后收集细胞，RT-PCR检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞中自细胞介素17（IL-17）和维甲酸相关孤独受体（ROR-γt）mRNA的转录水平；培养72h后，ELISA检测细胞培养上清液IL-17和1干扰素（IFN-1）的含量。同时用佛波酯（PMA，10ng／m1）和离子霉素（1μg／ml）刺激淋巴细胞5h后，胞内细胞因子染色，流式细胞术检测Th17细胞的含量和其他细胞因子的产生。结果ELISA检测结果显示，感染小鼠肠系膜淋巴结培养物上清液中IFN-γ[（214．3±62．6）pg／ml]和IL-17[（176．8±62．1）pg／ml]的含量明显高于健康小鼠[（46．7±13．9）和0pg／ml]（P〈0．05）。RT-PCR检测结果显示，IL-17和ROR-γt mRNA转录水平也明显高于健康小鼠。感染小鼠肠系膜淋巴细胞CD4＋T细胞中，Th17细胞的比例为（0．55±0．03）％，明显高于健康小鼠[（0．16±0．01）％]（只以05）。在CD4＋T细胞中，IL-17＋ IL4＋细胞占0．06％，IL-17＋IFNγt和IL-17＋IL5＋细胞各占0．02％，IL-17＋ IL-9＋细胞占0.01％，未检测到Tl-17＋IL-10＋和IL-17＋Foxp3＋细胞。结论日本血吸虫感染C57BIJ6小鼠的肠系膜淋巴结能诱导Th17细胞产生。Th17细胞能分泌IL-4，及少量的IFN-γ、IL5和IL-9，不分泌IL-10，也不表达Foxp3。

日本血吸虫感染小鼠肠系膜淋巴结T细胞亚群的变化

目的:观察C57BL/6小鼠感染日本血吸虫(Schistosome japonicum,Sj)4～6周肠系膜淋巴结T细胞亚群的改变。方法:用Sj尾蚴腹贴法建立Sj感染的小鼠模型。4～6周后取肠系膜淋巴结做淋巴细胞计数,使用细胞内细胞因子染色的方法,利用流式细胞仪检测肠系膜淋巴结淋巴细胞中分泌不同细胞因子的T细胞亚群含量的变化。结果:Sj感染C57BL/6小鼠4～6周后,肠系膜淋巴结细胞数量明显增多;流式细胞仪检测发现肠系膜淋巴结中CD4+T细胞中分泌IFN-γ的Th1细胞增多1倍,分泌IL-4和IL-5的Th2细胞增多近20倍,Th1/Th2轴发生偏移;分泌IL-17的Th17细胞也增多近5倍;分泌IFN-γ的CD8+T细胞也增多1倍。结论:日本血吸虫感染C57BL/6小鼠4～6周肠系膜淋巴结细胞增多,并向Th2和Th17型细胞极化。

C57BL/6小鼠γδT细胞的组织器官分布和功能特点

目的比较C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结中γδT细胞占所分离的淋巴细胞及其CD3+T细胞的百分比、表型和功能的特点。方法分离正常C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的淋巴细胞,应用细胞表面分子染色的方法,使用流式细胞仪观察γδT细胞占从不同组织分离的淋巴细胞及CD3+T细胞的百分比及其表型的特点。细胞经PMA和离子霉素刺激后,应用细胞内细胞因子染色的方法,通过流式细胞仪观察γδT细胞产生IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17细胞因子的情况。结果γδT细胞占分离淋巴细胞中的百分含量在肝脏明显高于肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结(P<0.05),而γδT细胞在肠系膜淋巴结CD3+T细胞的百分含量要显著的低于其他脏器(P<0.05)。不同组织器官中γδT细胞以CD4-CD8-表型为主,还存在少量CD8+γδT细胞。在肠系膜淋巴结γδT细胞中CD4+细胞的量明显高于其他器官,且明显可见一群CD4+CD8+细胞。不同组织中γδT细胞中IL-17+的细胞量要明显高于IFN-γ+和IL-4+细胞。γδT细胞基本不分泌IL-9。肺脏的γδT细胞分泌细胞因子的能力最强,其IL-17+细胞的量达到(26.6±12.1)%。IFN-γ+细胞的量在肝脏和肺脏中较高,分别为(1.36±0.37)%和(1.6±0.7)%。结论 C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结γδT细胞的含量、表型和功能方面存在显著性差异。

C57BL/6小鼠肝脏中NK细胞、T细胞和NKT细胞的特点

目的:观察C57BL/6小鼠肝脏中NK细胞、T细胞和NKT细胞的含量、亚型和细胞因子产生能力方法:分离正常C57BL/6小鼠肝脏的淋巴细胞,通过细胞表面分子染色以及流式细胞术(FCM)检测NK1.1^+NK细胞、CD3^+T细胞和CD3`+NK1.1^+NKT细胞的含量及其表面CD4、CD8分子的表达情况;细胞经过PMA+Ionomycin刺激后,应用细胞内细胞因子染色并结合FCM检测NK1.1^+NK细胞、CD3^+T细胞和CD3^+NK1.1^+NKT细胞产生IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17细胞因子的情况。结果:肝脏中NKT细胞的含量为(21.51±13.02)%,高于NK细胞和T细胞(P<0.05)。NK细胞以CD4^-CD8^-亚群为主,T细胞和NKT细胞均以CD4^+细胞亚群为主。NKT细胞分泌的IL-4的比例高于NK细胞和T细胞(P<0.05)。T细胞分泌IL-17的能力明显强于NK细胞和NKT细胞(P<0.05),IL-9^+细胞在三种细胞中含量不高(<0.03%)。结论:C57BL/6小鼠肝脏中NK细胞、T细胞和NKT细胞含量。

黄芪多糖佐剂对脾脏NK细胞及NKT细胞的作用

目的观察脾脏NK细胞及NKT细胞在黄芪多糖(APS)发挥免疫佐剂功能的作用。方法使用鸡卵白蛋白(OVA)与APS经皮下免疫C57BL/6小鼠3次。末次免疫7～14d,取血清,使用ELISA观察OVA特异性抗体的含量;分离脾脏淋巴细胞,使用流式细胞仪检测NK和NKT细胞的百分比含量;使用PMA和Ionimycin刺激淋巴细胞,使用细胞内细胞因子染色的方法检测IFN-γ和IL-4的分泌情况。结果 APS组小鼠OVA特异性抗体含量明显高于OVA组小鼠(P<0.05),但小鼠脾脏内NK和NKT细胞的百分比含量与OVA组和正常小鼠差别不大(P>0.05)。经PI刺激以后,APS组小鼠脾脏内NK细胞中IL-4+细胞明显高于OVA组和正常组(P<0.05),且IFN-γ+细胞的比例明显下降(P<0.05);虽然经过PI刺激以后,APS组小鼠脾脏内NKT细胞中IL-4+细胞升高不明显,但是IFN-γ+细胞的比例明显下降(P<0.05)。结论 APS可以通过调节NK和NKT细胞的功能来促进体液免疫应答。