广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL136基因的序列特征及多态性

目的研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代株UL136基因的序列特征与基因多态性。方法从10例广州感染新生儿体内分离获得2株（D2、D3）临床HCMV分离株，经多重PCR鉴定后进行UL136基斟全序列扩增。PCR产物纯化后进行基因克隆，构建HCMVUL136-pMD18-T重组质粒。经基冈测序及应用生物信息学分析方法，分析其核酸序列稳定性、编码蛋白质的二级结构与特衙。结果成功分离2株HCMV临床分离株，测序结果显示，D2、1）3及与GenBank中公布的11株临床分离株（4J、51C、39J、33J、63J、22M、10J、32C、29C、27C、Toledo）中，UL136序列高度保守。同源性分析显示在UL136全基因序列1019个核苷酸中，存在30个位点变异，所有的变异均为碱基替换，无插入及缺失突变。编码蛋白的氨基酸序列也高度保守，240个氨基酸残基巾，不同临床分离株氨基酸变异率为1．6％～3．7％。不同分离株的UL136蛋白巾参与形成二级结构的氨基酸数目及等电点不同。进化树分析结果显示D2和D3均属于1a群。结论广州地区临床低传代分离株HCMVUL136基因核苷酸序列及其氨基酸序列极为保守，但仍存在一定多念性。其基因的稳定性提示HCMVUL136开放阅读框（ORF）可能是一个具有重要功能的基因。其编码后修饰位点提示UL136可能与膜受体介导的细胞信号转导通路有关。

人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的超微结构

目的:培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs),体外向心肌细胞(CMs)定向诱导分化,进行超微结构观察,为hMSCs体外向CMs诱导分化提供理论依据。方法:体外分离培养扩增hMSCs并进行流式细胞仪分析鉴定;选用生长良好,纯度高的P5代hMSCs,用5-氮杂胞苷(5-Aza,10μmol.L-1)体外定向向CMs诱导分化,对其进行Desmin检测,在倒置显微镜及透射电镜下观察细胞形态学和超微结构。结果:流式细胞仪检测显示体外分离纯化培养扩增出细胞不表达CD34,高表达CD44,表明扩增细胞为hMSCs。hMSCs经5-Aza诱导分化后其形态发生改变,逐渐由长梭形变为多角形及星形,并表达Desmin。透射电镜下可见细胞大小不一致,细胞表面有许多微绒毛;细胞器丰富,胞质内可见丰富的线粒体、粗面内质网;部分细胞内可见大量糖原颗粒沉积,小部分细胞内可见髓样小体;胞浆内可见肌丝样结构,细胞间存在细胞连接。结论:体外分离培养扩增的hMSCs经5-Aza诱导,可分化成具有CMs超微结构特性的心肌样细胞。