广州城市慢性阻塞性肺疾病住院患者的疾病认知行为状况调查

目的：了解患者对慢性阻塞性肺疾病（COPD）的认知行为状况，为进一步的认知行为干预（如卫生宣教和康复锻炼）提供依据。方法：采用系统抽样方法，选取广州医学院第一附属医院2008年1月-2008年12月住院的住院号尾数为双数住院的COPD患者共209例，对其进行有关COPD认知行为的横断面调查。入选的患者采用自制的认知行为问卷进行调查。结果：200例患者完成认知行为问卷调查其调查率为95．7％（200／209）①其中，男性180人（90，0％），女性20人（10．0％）；平均年龄为（68．8±9．5）岁，Ⅲ、Ⅳ级COPD患者分别占31．5％（63／200）和45．5％（91／200）。②患者对COPD的认知仍然相当贫乏。仅有127（63．5％）人听说过COPD；43．2％（86／199）的患者不了解急性加急慢阻塞解性AECOPD；10．5％不知道COPD有哪些症状；22．0％不知道COPD的危险因素；23．5％的患者不知道吸烟是COPD的危险因素；超过80％的患者不知道生物燃料和职业接触与COPD有关。⑧患者并没有采取对COPD积极的、有益的行为模式，仍有13．7％（27／197）的COPD患者现吸烟，仅63．0％（126／200）的患者遵医嘱服药；7．5％（15／200）的患者参加过COPD防治知识讲座；仅26．5％（53／200）的患者被告知治疗药物的作用；只有21．0％（42／200）的患者进行过肺康复治疗。结论：广州市三甲医院住院的中、重度COPD患者对COPD的认知行为仍然较差，亟待加强。

痰咳净不同剂型体外抗甲型流感病毒的实验研究

目的:探讨痰咳净不同剂型(溶液剂、粉雾剂、散剂)体外抗甲型流感病毒作用,以及剂型与作用的关系。方法:以利巴韦林作阳性对照药物,采用存留细胞结晶紫染色法测定痰咳净提取液(溶液剂)不同给药方式对甲型人流感病毒H3N2的体外抑制作用,确定具体作用方式;并以有效的给药方式对比研究痰咳净不同剂型的抗病毒作用;再运用血清药效学方法比较痰咳净不同剂型的大鼠血清样本的体外抗病毒作用。结果:痰咳净溶液剂有一定的抗甲型人流感病毒的作用,包括综合抑制作用和抑制病毒吸附后的复制增殖作用,其最高抗病毒有效率为利巴韦林注射液的66.40%。溶液剂、粉雾剂和散剂在质量浓度为0.062g/mL时的抗流感病毒的有效率分别为43.50%、41.50%和37.36%。血清药效学研究结果表明药物溶出较快的剂型药物吸收较多,血清抗病毒药效较好。结论:痰咳净不同剂型均有一定的体外抗甲型人流感病毒作用,粉雾剂效果优于散剂。

广州地区泛耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学调查

目的调查广州地区4家医院2005年3月至2007年3月泛耐药铜绿假单胞菌株之间的同源性，了解是否有该耐药株暴发流行。方法用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对134株泛耐药铜绿假单胞菌株进行分型，明确其是否为同一菌株的克隆。结果134株铜绿假单胞菌PFGE图谱分为56型，其中主要流行型A型有45株，主要在医院A的中心ICU传播流行。其余3家医院也存在各自的流行株，即B、C、D医院的流行株分别为B型、C型、D型，占各医院的总分离株数的22．6％（7／31）、33．3％（6／18）、31．6％（6／19）。克隆株Q型同时存在于B医院与D医院，B医院和C医院分别有1株菌与A医院的A型同源性在80％以上，其余菌株在各医院间无同源性。对A医院ICU环境、纤维支气管镜、呼吸机管道采样，未发现A型克隆株存在；但有6例携带A型克隆株的患者在调查时间里多次入住ICU的情况。耐药机制分析，42株A克隆产IMP-9金属β内酰胺酶，B、C、D克隆不产金属酶。结论在2年的调查中，广州地区4家大型医院均存在不同规模的泛耐药铜绿假单胞菌株克隆株传播，虽然未发现优势克隆株在4家医院大规模传播，但部分医院间已有共同的克隆株存在。加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控可能是控制克隆株继续传播的关键。

大黄素脂质纳米微泡对机械牵张引发的Ⅱ型肺泡上皮细胞MAPK信号通路和炎性介质的影响

目的:研究大黄素脂质纳米微泡对机械牵张引发的Ⅱ型肺泡上皮细胞MAPK信号通路和炎性介质的影响和作用机制。方法:以卵磷脂和PVP为载体材料,采用静电纺丝技术制备纳米纤维膜,填充全氟丙烷,通过自组装技术形成大黄素脂质纳米微泡。分离纯化原代大鼠AT-Ⅱ细胞,应用Western-Blot和ELISA方法观察AT-Ⅱ细胞在20%机械牵张应力的4、8、16、24、48h刺激作用下,p-P38/P38、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK蛋白表达和TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平的动态变化;及进一步将大黄素脂质纳米微泡加入AT-Ⅱ细胞对VILI进行干预,并检测干预效果。结果:牵张刺激后,AT-Ⅱ细胞p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白表达的水平显著升高,并在4～16h范围内表达水平持续升高,但p38、ERK、JNK蛋白表达无变化;AT-Ⅱ细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平在8h内均无变化,而在随后16h的牵张刺激逐渐显著升高。在VILI刺激下,加入大黄素脂质纳米微泡进行干预,均可以不同程度下调p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白表达和抑制TNF-α、IL-1β、IL-6的释放水平。结论:大黄素脂质纳米微泡对机械所致肺损伤(VILI)有保护作用,其机制可能与下调MAPK信号通路蛋白表达来调节炎性介质释放有关。

痰咳净粉雾剂对流感病毒FM1感染小鼠肺部炎性损伤的影响

目的:探讨痰咳净粉雾剂对流感病毒感染小鼠肺部炎性损伤的影响及作用机理。方法:以流感病毒甲型鼠肺适应株(FM1)滴鼻感染小鼠建立病毒性肺炎模型,随机分为正常对照组、模型组、痰咳净粉雾剂低、中、高剂量组、利巴韦林组。运用Western-Blot检测感染24 h后NF-κB在肺组织中的表达,阐明药物的调控作用;采用ELISA法检测感染3 d后,肺组织炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化;同时观察痰咳净粉雾剂不同剂量对小鼠肺指数及病毒致小鼠死亡率的影响。结果:痰咳净中、高剂量有以下作用:①对感染病毒24 h后的小鼠肺组织中NF-κB表达有下调作用;②能降低小鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平(P<0.05);③能降低肺指数;④能改善感染小鼠的临床症状,减少15 d内小鼠的死亡数,并能延长其平均存活时间(P<0.05)。结论:痰咳净粉雾剂可通过调节NF-κB以及炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平,从而减轻FM1流感病毒引起的小鼠肺部炎性损伤。

静电纺丝制备淫羊藿黄酮PVP载药纳米纤维膜

目的:静电纺丝制备淫羊藿黄酮纳米纤维膜,提高淫羊藿黄酮体外溶出率。方法:通过溶解度试验筛选合适溶剂,以静电纺丝制备淫羊藿黄酮纳米纤维膜,采用扫描电镜对纤维膜表面形态进行观察,通过体外溶出度测定的评价淫羊藿黄酮的溶出效果。结果:甲醇与二甲基乙酰胺混合溶剂的溶解性及纤维成型性较好;载药纤维直径分布均匀(400～600 nm),表面光滑无药物颗粒,药物与聚合物之间通过氢键作用,具有良好的相容性,体外溶出结果表明所制备的纳米纤维膜中淫羊藿黄酮能在30 s内释放完全。结论:淫羊藿黄酮纳米纤维膜的电纺制备工艺简单易行,该工艺能有效提高淫羊藿黄酮的体外溶出度。

大黄素脂质纳米微泡的制备及性能研究

目的:制备大黄素脂质纳米微泡,并对其理化性能进行初步研究。方法:以卵磷脂和PVP为载体材料,采用静电纺丝技术制备纳米纤维膜,填充全氟丙烷,通过自组装技术形成脂质纳米微泡,并对其粒径、分布、形态、表面电位等性能进行研究。结果:所制备的脂质纳米微泡为圆形,粒度分布均匀,平均粒径235.9 nm,电位-31.6mV,多分散指数PDI=0.331。结论:整合运用高压静电纺丝技术和自组装技术制备大黄素脂质纳米微泡是可行的,该方法简单可靠,有开发的前景。

胆固醇-聚乙烯亚胺共聚物的制备及其表征

目的用胆固醇(Chol)对聚乙烯亚胺(PEI)进行改性,制备适用于基因转染的非病毒类载体。方法用胆固醇甲酰氯(Chol-Cl)连接聚乙烯亚胺的氨基形成PEI-Chol脂质共聚物,分别用IR、1H-NMR、凝胶色谱法、DSC对聚合物进行表征。结果在IR图谱上可见1 800 cm-1峰为Chol-Cl的羰基特征峰,形成PEI-Chol后,羰基特征峰迁移至1 700 cm-1,表明聚乙烯亚胺与胆固醇成功连接;根据1H-NMR谱图计算PEI的胺基接枝率、组成及相对分子质量,达到试验预期效果,表明反应可控;凝胶色谱法测定发现聚合物为单峰,表明连接成功,且聚合物相对分子质量的测定值与1H-NMR估算值比较接近;DSC图谱显示PEI连接胆固醇,Chol-Cl的吸收峰消失,熔融峰(Tm)升高变钝,表明PEI-Chol刚性增强。结论成功合成了PEI-Chol脂质共聚物。

291例肺血栓栓塞症住院病例回顾分析

目的:对PTE临床病例进行回顾分析,以提高早期正确的诊断率。方法:收集本院2004年1月-2009年6月291例临床诊断PTE住院病例(其中确诊209例),综合分析一般资料、临床表现、实验室检查、首诊科室分布、相关危险因素等。结果:PTE首诊科室以呼吸内科为首,散在分布于多个科室,其中呼吸内科222例(76.29%),心血管内科20例(6.87%),胸外科16例(5.5%),骨科6例(2.06%),消化内科6例(2.06%),妇产科5例(1.72%),整形科4例(1.37%),普外科3例(1.03%),中医科3例(1.03%),颅外科2例(0.68%),神内科2例(0.68%),内分泌科1例(0.34%),风湿科1例(0.34%);PTE临床症状复杂多样,无特异性,确诊病例中出现呼吸困难84.21%,咳嗽74.64%,咳痰62.68%,胸闷胸痛46.41%,发热24.40%,咯血15.79%,晕厥3.83%,合并呼吸困难、胸痛、咯血三联征只有4.78%。确诊病例中19.62%无明显PTE相关危险因素,实验室检查明显异常心电图(3.35%)、彩色超声心动图肺动脉高压(38.76%)、D-二聚体增高(>500 ng/L)(88.52%)。结论:PTE临床表现复杂,涉及多学科领域,需保持对其高度警惕性,综合分析临床表现、实验室检查等,才能提高其诊断水平。

Ⅰ期非小细胞肺癌CT形态学征象和预后的相关性研究

目的探讨Ⅰ期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)CT形态学征象与预后的相关性。方法搜集161例具有完整胸部CT影像资料及手术病理结果的Ⅰ期NSCLC患者的资料,均具备完整的患者的5年总生存期。结果 161例Ⅰ期NSCLC患者5年总生存率(overall survival,OS)为71.4%;按性别分成两组,单因素生存分析差异具有统计学意义(P=0.041),而多因素分析差异无统计学意义;按患者年龄(≤60岁、>60岁)、病理类型及发病部位进行分组,经多因素生存分析,差异均无统计学意义(P>0.05);肿瘤分期T1a、T1b及T2a期对应患者的5年OS分别为87.2%、70.7%和58.9%,单因素生存分析,结果显示差异具有统计学意义(P<0.05);按IA、IB期分类,对应5年OS分别为78.1%和58.9%,单因素及多因素生存分析,结果显示差异均具有统计学意义(P<0.05)。根据肿瘤的密度分类,经单因素及多因素预后分析,结果显示差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤的边缘、周围情况及与邻近胸膜的关系方面,单因素预后分析结果显示差异均具有统计学意义,而多因素预后分析结果显示病灶"毛刺征"、"胸膜凹陷征"具有统计学意义(P<0.05)。结论 CT像上肿瘤的大小、"短毛刺征"、"胸膜凹陷征"是影响Ⅰ期NSCLC患者的独立预后因素。

聚乙烯亚胺-胆固醇结合脂质微泡介导的基因转染系统

本文研究了聚乙烯亚胺-胆固醇阳离子聚合物(PEI-Chol)基因载体的性能及其结合中性脂质、聚乙二醇修饰脂质微泡介导的基因传递系统(微泡/PEI-Chol/DNA)的体外细胞基因转染效率。采用胆固醇甲酰氯与聚乙烯亚胺(Mw1800)通过酰胺化制得PEI-Chol,并运用IR、1H NMR和MADI-TOF-MS(基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱)对其结构和分子量进行测定,平均相对分子质量约为2000。采用反相挥发法制备DPPC、DSPE-PEG2000和全氟丙烷构建的粒径为2～8μm的脂质微泡,并运用自组装技术将PEI-Chol/DNA复合物与微泡融合,构建微泡/PEI-Chol/DNA(bubble/PEI-Chol/DNA)基因转染系统;以pEGFP-Cl(enhanced green fluorescent protein,增强型绿色荧光蛋白)为报告基因,用凝胶滞留试验考察PEI-Chol的DNA压缩能力,同时在A549和MCF-7两种细胞中比较以PEI-Chol为核心构建的各种载体系统的细胞毒性、抗血清沉淀作用以及细胞转染效率。结果发现,当N/P比值为4以上时,PEI-Chol能有效压缩DNA;PEI-Chol和构建的微泡系统对A549和MCF-7两种细胞几乎没有毒性;本微泡介导基因转染系统,一方面降低PEI-Chol的毒性,提高抗血清蛋白沉淀作用,另一方面提高其基因转染效果。研究表明新型bubble/PEI-Chol/DNA是一种高效低毒的非病毒基因载体系统。

腹腔感染细菌流行病学调查

目的监测2006年10月至2007年10月我国不同地区14家教学医院分离的腹腔感染病原菌的菌种分布及其体外药物敏感性。方法按设计方案收集来自腹腔感染的病原菌。菌株经中心实验室复核后,采用琼脂稀释法测定10类共29种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),数据输入WHONET5.4软件进行耐药性分析。结果此次监测收集的腹腔感染病例数为742例,分离出的病原菌为743株,其中革兰阴性菌占76.7%(570/743),革兰阳性菌占23.3%(173/743)。病原菌中分离率位于前5位的分别为大肠埃希菌(38.8%)、肺炎克雷伯菌(10.2%)、铜绿假单胞菌(9.2%)、屎肠球菌(8.2%)和金黄色葡萄球菌(4.4%)。对于所有肠杆菌科菌,敏感率高于90%的抗菌药物包括美罗培南、亚胺培南、替加环素、阿米卡星和他唑西林-三唑巴坦。对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和克雷伯菌,敏感性大于90%的药物包括亚胺培南(100%)、美罗培南(100%)、替加环素(100%)和他唑西林-三唑巴坦(91.5%～91.7%)。铜绿假单胞菌中多重耐药菌株的检出率为14.7%,鲍曼不动杆菌为61.3%。金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林(MRSA)的发生率为69.7%,所有菌株对替加环素、万古霉素和替考拉宁均敏感。替加环素对所有粪肠球菌和屎肠球菌均保持了100%的敏感率。粪肠球菌中敏感性较高的抗菌药物还有万古霉素(100%)、替考拉宁(100%)和氨苄西林(81.5%)。屎肠球菌中敏感性较高的抗菌药物还有万古霉素和替考拉宁(96.7%)。结论引起腹腔感染的病原菌以革兰阴性菌特别是肠杆菌科菌为主。替加环素、碳青酶烯类、他唑西林-三唑巴坦和阿米卡星对腹腔感染肠杆菌科菌保持了较高的抗菌活性,非发酵的革兰阴性杆菌的耐药性令人担忧。替加环素、万古霉素和替考拉宁对院内革兰阳性球菌保持了较高的抗菌活性。

淫羊藿苷纳米纤维膜自组装囊泡的制备及表征

目的采用静电纺丝制备淫羊藿苷纳米纤维膜,并通过自组装技术形成纳米囊泡,改善淫羊藿苷在体内的相容性及吸收性能。方法通过溶解度实验筛选合适溶剂,以静电纺丝技术制备淫羊藿苷纳米纤维膜,采用扫描电镜对纤维膜表面形态进行观察,采用X射线晶体衍射(XRD)和差示扫描量热分析(DSC)检测纤维膜中药物的存在状态,通过红外光谱分析药物与纤维材料之间的相互作用。并通过透射电镜观察纳米纤维膜自组装纳米囊泡的性能。结果甲醇与二甲基乙酰胺混合溶剂的溶解性及纤维成型性较好;载药纤维直径分布均匀(400～600 nm)、表面光滑无药物颗粒,药物与聚合物之间通过氢键作用,具有良好的相容性,水中溶解试验发现纳米纤维膜能自组装成纳米囊泡。结论药物以无定形态高度分散于纳米纤维中,电纺制备工艺简单易行;且淫羊藿苷纳米纤维膜能自组装成纳米囊泡。

RAD51基因135G/C多态与人群发生肺癌的易感性研究

目的 探讨DNA双链断裂修复基因RAD51的5＇-UTR区135G/C多态与我国人群肺癌发病的关联.方法 采用PCR-RFLP技术,检测300对肺癌病例与正常对照RAD51基因135FG/C多态位点的基因型.用SAD9.13软件进行非条件Logistic回归,校正混杂因素的影响,分析该位点变异与肺癌发病的关联.结果 病例及对照组中,皆未检测出135CC基因型.病例组135GC基因型频率显著低于对照组（26.7%比34.7%,P=0.0336）.以携带GG野生基因型个体为参照,携带GC基因型能显著减少个体发生肺癌的危险性（调整优势比=0.72 95%置信区间=0.49～0.98 P=0.042）.结论 RAD51的5＇-UTR区135G/C多态与我国人群肺癌发病存在显著性关联,135C可能是我国人群肺癌发生的一个遗传保护因素.

人ω干扰素克隆、表达及体外抑制冠状病毒昆徐株作用的研究

目的制备人ω干扰素（hIFN—ω）并初步研究其体外抗普通冠状病毒活性。方法制备hIFN—ωcDNA，并在大肠杆菌BL-21中高效表达、纯化后，测定了hIFN—ω的抗滤泡口膜炎病毒（VSV）和冠状病毒昆徐株活性。结果成功地获得了hIFN—ωGST融合蛋白，利用WISH—VSV系统检测hIFN—ω的抗病毒活力为7．81×10^4kU／L；与基因工程α干扰素（IFN—α2b）的比较发现，hIFN—ω可以明显抑制冠状病毒昆徐株的活性，而IFN—α2b未见此活性。结论hIFN-ω具有抑制冠状病毒昆徐株的活性，有独特的抗呼吸道病毒作用；不同的干扰素亚型对不同的病毒敏感性有所差异。