自由溶液和筛分介质条件下芯片DNA瞬间等速电泳预浓缩的比较

利用芯片电泳方法考察瞬间等速电泳-筛分电泳偶联分析的结果,比较了自由溶液和筛分介质中DNA瞬间等速电泳的预浓缩效果。结果显示,相比较于筛分介质条件,自由溶液瞬间等速电泳有利于改善预浓缩和后续筛分电泳分离效果。对此结果的解释是:自由溶液条件下DNA迁移速度的提高可以延长瞬间等速电泳持续时间,有利于提高预浓缩效率。此外,样品压缩区带在自由溶液-筛分介质界面的二次富集也是预浓缩效果得到改善的原因之一。

脑脊液单纯疱疹病毒和抗体及细胞学检查的意义

目的 :评价脑脊液 (CSF)单纯疱疹病毒 (HSV)和其抗体检测及细胞学检查的临床意义。方法 :收集中枢神经系统 (CNS)病毒感染及可能与病毒感染有关的疾病的CSF共 45例 ,应用实时荧光定量PCR (RT PCR)检测HSV DNA ,ELISA法检测特异性HSV抗体 ,玻片离心沉淀法MGG染色检查细胞学。结果 :45例HSV DNA检测有3例阳性 ,阳性率为 6 7% ,其在 12例病毒性脑炎和脑膜炎病人中 ,阳性率为 2 5 %。 45例特异性HSV IIgG、IgM检测均阴性。 45例病人中有 3 5例CSF细胞学有不同程度异常。结论 :RT PCR技术检测HSV DNA具快速、敏感及高特异性 ,但在CSF的阳性率不高。CSF特异性HSV抗体检测的阳性率比PCR结果更低。CSF细胞学检查快速、简便、阳性率高 ,是诊断CNS病毒感染。

辛夷对实验性变应性鼻炎红细胞免疫功能的影响

目的探讨辛夷对变应性鼻炎(AR)的治疗作用和对红细胞免疫功能的影响。方法8只为正常豚鼠不做模型,用单纯橄榄油滴鼻作对照(对照组1)。用橄榄油将甲苯-2,4-二异氰酸酯配成浓度为10%溶液作为致敏剂,滴鼻,建立豚鼠变应性鼻炎动物模型16只,其中8只以后用生理盐水滴鼻做对照(对照组2),8只用0.5%生理盐水辛夷挥发油滴鼻(辛夷组)。致敏结束、模型成功后取血,测定红细胞C3b受体花环率和红细胞IC花环率。结果①对照组2红细胞C3b受体花环率和IC花环率低于对照组1(P<0.05),显示AR状态下红细胞的免疫功能降低。②辛夷治疗组的红细胞C3b受体花环率和IC花环率高于对照组2(P<0.05),表明辛夷治疗AR后可以提高红细胞的免疫功能。③辛夷治疗组的红细胞C3b受体花环率和IC花环率与对照组1相当(P>0.05),表明辛夷治疗后,红细胞免疫功能可恢复到正常水平。结论辛夷可改善红细胞免疫功能,用于治疗变应性鼻炎。

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究与药敏分析

目的探讨广州地区部分医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及基因分布规律。方法用NCCLS推荐的表型确证试验确定临床标本中产ESBLs肺炎克雷伯菌62株,用Etest测定其最低抑菌浓度(MIC),分别用TEM,SHV,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-9组通用引物进行聚合酶链反应(PCR),并对结果进行分析。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌对多种抗生素耐药,对亚胺培南的敏感率最高(98.2%),其次是头孢吡肟(72.7%),头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/三唑巴坦分别为69.6%和63.6%。PCR扩增结果显示TEM,SHV和CTX-M基因的阳性率分别为16.1%,50%和61.3%,21%的菌株同时携带多个基因。结论广州地区肺炎克雷伯菌对亚胺培南酌敏感率最高,产ESBLs最常见的基因型是CTX-M型,其次是SHV,TEM型。

芯片瞬间等速电泳-筛分电泳偶联分析精确计算DNA长度

建立了基于相对迁移时间比例的方法,依据待侧DNA片段相对于上位及下位内标的迁移时间比例进行长度预测。实验结果显示,DNA片段的相对迁移时间比例在不同分析条件下具有良好的重现性。通过建立相对迁移时间比例相对于DNA片段长度的对应关系公式,实现了芯片瞬间等速电泳条件下DNA片段长度的准确预测。实际样品分析证实这种基于相对迁移时间比例的计算方法简单可靠,适合于芯片tITP-CGE分析中DNA长度的精确判定。

雌性Wistar大鼠、NIH小鼠性周期血清激素含量分析

目的通过测定Wistar大鼠和NIH小鼠性周期各期及超排后血清生殖激素雌二醇(E2)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)的含量,比较不同性周期实验动物的血清性激素水平,研究动物血清性激素随性周期变化的规律。方法用阴道涂片法判定动物的性周期阶段并进行分组,用放射免疫分析法测定各组动物血清E2、LH和FSH的含量,进行统计学处理和分析。结果Wistar大鼠和NIH小鼠E2各时期间无显著差异;LH以超排组最高,与其他各组比较有极显著差异(P<0.01);FSH在动情后期最高,与各组比较有极显著差异(P<0.01)。结论雌性大、小鼠的血清生殖激素在性周期的不同阶段其含量呈规律性变化,超排后动物血清LH的分泌增加,以促进卵子的排出和黄体的形成。

过滤式微流控芯片上的循环肿瘤细胞分选

目的本研究加工了一种封接有多孔聚碳酸酯薄膜的过滤式微流控芯片用于循环肿瘤细胞分选。方法依据肿瘤细胞与血细胞在粒径和变形能力方面的差别,这种微过滤式芯片可以选择性截留肿瘤细胞。循环肿瘤细胞分析整个过程,包括细胞过滤、固定、标记和计数,均在芯片上完成。使用8μm孔径滤膜,可以选择性截留Hela细胞。以Hela细胞为模型,实验优化了肿瘤细胞的分选条件并考查了分选效果。结果在500μL/min流速下,Hela细胞的回收率可以达到85%,而血细胞残留可以控制在3000个以下。截留细胞使用微小染色体维持蛋白7抗体标记,可以有效辨别肿瘤细胞与血细胞。结论基于过滤式微流控芯片上的循环肿瘤细胞分选方法简单、快速、廉价,有望成为一种实用的循环肿瘤细胞检测技术。

醛酮类物质染毒对小鼠肺脏抗氧化能力的影响

目的:通过模拟生物燃料烟气中主要醛酮类物质染毒小鼠观察其对小鼠肺脏抗氧化能力的影响。方法:选用小鼠40只,随机分为2组:实验组和对照组,每组20只,雌雄各半。取甲醛(0.0663 mg)、乙醛(0.1181 mg)、苯甲醛(0.147 mg)、丙酮(0.609 mg)加水至1000 ml,置于超声波雾化器中向已放入20只小鼠的染毒柜喷雾,每天喷雾1次,每次5 h,连续13 d。对照组放于另一柜中,除喷雾蒸馏水外,其它同实验组。以化学分析方法检测小鼠外周血和肺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。结果:染毒小鼠肺脏MDA含量明显高于对照组[(17.88±2.08)nmol/mgprotvs(8.00±2.89)nmol/mgprot,P<0.001)];SOD与GSH-Px活力明显降低[(24.08±2.04)NU/mgprotvs(38.77±8.95)NU/mgprot;(28.75±4.82)U/mgprotvs(34.76±1.43)U/mgprot],P<0.001),染毒小鼠外周血中MDA含量变化不明显[(6.06±1.91)nmol/mgprotvs(5.62±2.54)nmol/mgprot,P>0.05],但SOD与GSH-Px活力明显低于对照组[(81.78±8.83)NU/mgprotvs(108.63±14.13)NU/mgprot;(50.94±3.20)U/mgprotvs(60.46±4.14)U/mgprot,P<0.001]。结论:模拟生物燃料烟气中主要醛酮类物质染毒小鼠可影响肺脏的抗氧化能力。

雌性Fmr1基因敲除小鼠生殖功能的初步研究

目的初步研究敲除Fmr1基因对动物生殖功能的影响。方法6～8周龄雌性Fmr1基因敲除小鼠24只，分为对照组、春季超排组和冬季超排组，每组8只，进行超排，用放射免疫分析法测定超排前后血清雌二醇（E2）、孕酮（P）、促黄体生成素（LH）和促卵泡生成素（FSH）含量，以及不同季节的超排卵数，并进行统计学处理和分析。结果超排后小鼠血清中P和LH含量明显增加[（24．43±13．33）比（1．60±0．46）；（173．86±112．09）比（0．36±0．23）．P〈0．0ll。与冬季（11．44±5．93）比较，春季（37．25±13．91）的超排卵数明显增加（P〈0．01）。结论雌性Fmrl基因敲除小鼠的生殖系统功能没有明显异常。与正常小鼠一样，Frm1基因敲除小鼠机体内P和LH的分泌随动物的生理发育时期而变化。其超排效果随季节而有显著不同。

慢性鼻窦炎鼻咽部表面活性物质主要成分磷脂酰胆碱的变化

目的:探讨20例慢性鼻窦炎患者鼻咽部表面活性物质成分磷脂酰胆碱的变化,以反映对中耳和咽鼓管功能的影响。方法:采集本院耳鼻喉科慢性鼻窦炎患者和健康人鼻咽部灌洗液,用高效液相色谱方法对表面活性物质的成分磷脂酰胆碱的含量进行测定。结果:①两组鼻咽部均可测出磷脂酰胆碱。②慢性鼻窦炎组与对照组磷脂酰胆碱含量分别是(82.97±35.70)μg和(114.86±33.64)μg(P<0.05)。③慢性鼻窦炎各分型分期与对照组、各分型分期之间比较差异无统计学意义,但随分型分期进展,磷脂酰胆碱含量有降低的趋势。结论:①鼻咽部存在表面活性物质,可测出磷脂酰胆碱。②慢性鼻窦炎可引起鼻咽部磷脂酰胆碱含量减少,引起中耳、咽鼓管功能不全。

长爪沙鼠与NIH小鼠、SD大鼠血清雌性激素的对比研究

目的:比较长爪沙鼠、NIH小鼠和SD大鼠的血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,为长爪沙鼠的生殖和胚胎研究提供基础资料。方法:用放射免疫分析法测定上述动物生产前后血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,进行统计学分析。结果:不同阶段雌性沙鼠血清E2值差异无显著性(P>0.05),孕酮值差异有显著性(P<0.01);E2值比较,未生育期沙鼠与同期NIH小鼠和SD大鼠差异有显著性(F>F0.01),而在经产期的动物间水平接近(F<F0.05);孕酮值比较,未生育期沙鼠与NIH小鼠接近,与SD大鼠差异有显著性(F>F0.01);而经产期沙鼠在三种动物中是最高的(F>F0.01)。结论:长爪沙鼠血清E2、P的含量具种属特异性,并随动物的生理发育时期而变化。

变性高效液相色谱技术在细菌耐药基因检测中的研究进展

近年来，耐药问题一直困扰着公众健康，如何检测耐药菌株，更好地促进耐药菌株的分离是关键。最近，一项新的技术——变性高效液相色谱（DHPLC）被应用于细菌耐药性的检测。在相同的温度下，杂合双链比纯合双链解链早，DHPLC以此来检测DNA分子的突变；WAVEMAKER软件将结果转换成不同的图谱。DHPLC同时具备了全自动、准确、灵敏以及高通量的优点。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型及耐药性研究

超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是革兰阴性细菌对新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药最重要的机制，主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌产生。随着第三代头孢菌素在临床上的大量应用，产ESBLs的细菌种类不断增加，ESBLs基因表型也不断增加，成为细菌耐药机制研究的热点。

微流控芯片优选人类精子研究

目的:探讨微流控芯片技术对精子的优选能力。方法:自行设计和制造微流控芯片,利用芯片对40例人精液标本进行精子分选实验,优化其分选条件,观察芯片处理前后精液各参数变化。同时对其中30例精液标本(A组:a+b级精子<20%组,n=15;B组:a+b级精子≥20%组,n=15)同时用芯片法和密度梯度离心法分选,比较2种方法分离前后精子活力、形态等参数的变化。结果:①优选后精子活力和精子正常形态率都可见显著提高(P<0.001;P<0.01)。②在精子活动力优选上A、B组芯片法均明显优于密度梯度离心法(P<0.01),尤其在A组这种优势更为明显(P<0.001)。而在精子形态优选上,2种方法无显著差异(P>0.05)。结论:微流控芯片技术在优选精子中具有较高的分选效率,且具有操作简单、分选时间短,对精子损伤小的特点,在辅助生殖技术中特别是体外受精中将有良好的应用前景。