脂联素基因标签单核苷酸多态性与非酒精性脂肪肝病的相关性

目的探讨脂联素基因多态性与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)遗传易感性的关系。方法从2005年及2009年广东省汉族人群NAFLD流行病学调查的人群中筛选出2次调查均为NAFLD的119例患者为NAFLD组,2次调查均正常的350例为对照组,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测脂联素7个标签单核苷酸多态性:rs182052、rs16861205、rs822396、rs7627128、rs1501299、rs2241767、rs3774261,用多因素logistic回归分析危险因素,并用SHEsis软件进行单体型分析。结果 rs2241767的GG基因型是NAFLD患病的危险因素(OR=7.471,95%CI为2.836～19.684,P<0.001),rs1501299的TT基因型是NAFLD患病的危险因素(OR=5.040,95%CI为1.919～13.236,P=0.001),rs3774261的GG基因型是NAFLD患病的危险因素(OR=3.546,95%CI为1.402～8.972,P=0.008),单体型分析结果显示,ATA单体型是NAFLD的保护因素(OR=0.144,95%CI为0.037～0.558,P=0.001),GGA单体型是NAFLD的危险因素(OR=12.086,95%CI为2.422～60.302,P<0.01),GTG单体型是NAFLD的危险因素(OR=15.355,95%CI为3.946～59.748,P<0.001)。结论 rs2241767、rs1501299、rs3774261基因多态性与NAFLD遗传易感性相关。

肿瘤坏死因子-α基因多态性对非酒精性脂肪性肝病发病和病程进展的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单核苷酸多态性(SNP)与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病及病程进展的相关性。方法在2005年对普通人群NAFLD流行病学调查的基础上进行队列追踪到2009年(中位数4年),其中696例愿意接受复查,每例再行问卷、体检、血生化和B超检查,应用PCR-RFLP方法检测TNF-α3个位点:-238、-308和-857的SNP。结果 2005年NAFLD标化患病率为21.29%,至2009年显著升高达46.11%。Hardy-Weinberg检验-238位点基因频率未达到遗传平衡(P<0.05),故予剔除,而-308及-857位点纳入研究。NAFLD患者与正常对照者比较,TNF-α-857位点的基因型及等位基因频率差异均有统计学意义(P<0.05),等位基因T型者的发病危险率(RR)是正常对照者的1.463倍;而-308位点两者差异无统计学意义(P>0.05)。有序logistic回归分析显示,性别对病程无显著影响(P>0.05),年龄影响显著(P<0.001);校正性别和年龄后,-857位点T/T基因型与病程进展呈正相关,其危险性(OR)是C/C型的8.65倍(P<0.001),而C/T型与C/C型比较差异无统计学意义(P=0.072);-308位点各基因型对病程均无显著影响(P>0.05)。结论 TNF-α-857位点C→T变异(而非-308位点)与NAFLD发病易感性及病程进展两者均呈正相关,T/T型增加疾病发生和进展的风险。

miR-122表达下调与脂肪性肝病的关系

目的探讨肝脂肪变时肝细胞株L-02 miR-122表达水平的变化。方法用油酸诱导法建立L-02脂肪变肝细胞株模型,于24、48、72 h用激光共聚焦显微镜检测细胞三酰甘油含量,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,用荧光定量PCR检测miR-122的表达,并与正常肝细胞株作对照。结果成功建立脂肪肝细胞株模型,随着油酸诱导时间延长,细胞内三酰甘油含量增加,miR-122在脂肪肝细胞表达下调,其拷贝数仅为正常肝细胞的1/16.68(P<0.05)。结论肝细胞株脂肪变时miR-122表达显著下降。

TMX基因多态性与先天性肥厚性幽门狭窄的相关性研究

目的探讨硫氧还蛋白相关跨膜蛋白1基因(thioredoxin-related transmembrane protein 1,TMX)多态性位点rs7161242[c.492T>G]与先天性肥厚性幽门狭窄(congenital hypertrophic pyloric stenosis,CHPS)发病的关系。方法采用病例-对照的方法,应用PCR和测序对31例CHPS散发病例及60例无血缘关系正常对照者针对TMX基因位点rs7161242[c.492T>G]多态性进行检测,分析rs7161242[c.492T>G]多态性与中国汉族人群CHPS之间的相关性;并采用在线软件对此多态性位点是否影响RNA的二级结构进行预测。结果CHPS组的GG基因型频率及G等位基因频率均明显高于正常对照(70.97%vs36.67%;83.87%vs61.67%),携带G等位基因的纯合子GG发病风险明显增加(OR=4.222,95%CI:1.655～10.772,P=0.002);此位点位于第6外显子剪接受点(acceptor site)区域内,TT基因型的自由能及最大熵值均低于GG基因型。结论硫氧还蛋白相关跨膜蛋白1基因rs7161242[c.492T>G]多态性与中国汉族人群CHPS发病相关,GG基因型为CHPS发病的危险因素。

钙网织蛋白在胃癌细胞株中的表达及意义

目的观察钙网织蛋白(calreticulin,CRT)在不同分化的胃癌细胞株中的表达水平,评价其在胃癌发生发展中的作用。方法正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及3种胃癌细胞株(MKN28、SGC-7901、BGC-823)培养于含胎牛血清的RPMI 1640培养液中,采用实时荧光定量PCR测定上述4种细胞株CRT mRNA水平,结合细胞免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜技术检测CRT蛋白水平。结果 CRT mRNA在4种细胞系均有表达,表达强度依次为GES-1>MKN28>SGC-7901>BGC-823(P<0.05);细胞免疫荧光染色显示CRT蛋白主要表达在细胞浆中,在4种细胞系的表达变化趋势与mRNA一致。结论 CRT基因在胃癌细胞株中呈低表达状态,其表达水平与胃癌的恶性程度有一定的关系,说明CRT是一项有潜在价值的肿瘤相关标志物。