不同铁负载水平影响肝星状细胞活化和凋亡的抗肝纤维化机制研究

目的：探讨不同铁负载水平影响肝星状细胞（HSC）活化和凋亡的抗肝纤维化机制。方法根据细胞内不同铁负载水平将肝星状细胞株（HSC-T6细胞）分为空白对照组、铁沉积模型组、50μmol/L去铁铵组和25μmol/L去铁铵组共4组。用定量聚合酶链反应（PCR）检测HSC-T6细胞Ⅰ型胶原和转化生长因子-β1（TGF-β1）的mRNA表达；免疫组化法检测HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达；原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测HSC-T6细胞的凋亡；电镜下观察HSC-T6细胞超微结构。结果与空白对照组比较，铁沉积模型组TGFβ1 mRNA表达虽有所增强，但差异无统计学意义（1.594±0.168比1.477±0.126，P＞0.05），Ⅰ型胶原mRNA表达则显著增强（1.354±0.076比1.197±0.104，P＜0.01）。50μmol/L和25μmol/L去铁铵均能下调Ⅰ型胶原和TGF-β1的mRNA表达，且50μmol/L去铁铵组优于25μmol/L去铁铵组（Ⅰ型胶原mRNA：0.391±0.076比0.688±0.060，TGF-β1 mRNA：0.421±0.068比0.714±0.090，均P＜0.01）。铁沉积可诱导HSC中α-SMA大量表达，却仅见有较少的凋亡细胞。而经去铁铵处理后HSC表达α-SMA明显减少，但HSC发生了凋亡。结论细胞内不同铁负载水平能够诱导HSC活化或凋亡，表明铁在调节HSC活化和凋亡过程中发挥重要作用，而且也揭示了铁螯合剂治疗肝纤维化的潜在作用。

铁沉积于巨噬细胞对转化生长因子及炎症介质基因表达的影响

目的 探讨铁沉积于巨噬细胞对肝纤维化发生发展的作用机制.方法 以柠檬酸铁胺（FAC）与巨噬细胞株（RAW264.7细胞）共同温育,体外建立铁沉积于巨噬细胞模型.①将RAW264.7细胞分为FAC 1 mmol/L、100 μmol/L组及对照组,每组8孔.观察铁沉积于RAW264.7细胞对转化生长因子-β1（TGF-β1）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达的影响.②另将RAW264.7细胞分为对照组、铁沉积组、去铁铵组;对照组为正常培养的RAW264.7细胞,铁沉积组加入100 μmol/L FAC,去铁铵组分别加入100 μmol/L FAC和1 000、200、40、8、1.6、0.32 μmol/L的去铁铵,每组3孔.观察不同浓度去铁铵对铁沉积于RAW264.7细胞表达TGF-β1、iNOS、TNF-α mRNA的影响.结果 ①铁沉积于RAW264.7细胞主要使TGF-β1 mRNA表达明显降低,iNOS、TNF-α mRNA表达显著升高,以100 μmol/L FAC作用显著,与对照组比较差异有统计学意义（TGF-β1 mRNA：0.60±0.18比1.42±0.21,iNOS mRNA：3.79±1.48比1.10±0.33,TNF-α mRNA：1.72±0.37比1.07±0.10,P〈0.05或P〈0.01）.②去铁铵能使RAW264.7细胞出现与铁沉积后相反的基因表达变化,以较高浓度1 000 μmol/L、200 μmol/L（TGF-β1 mRNA：3.13±1.03、2.39±0.29,iNOS mRNA：3.28±0.62、5.36±1.04,TNF-α mRNA：3.04±1.35、3.35±0.52）作用显著,与铁沉积组（TGF-β1 mRNA：0.22±0.09,iNOS mRNA：18.57±8.44,TNF-α mRNA：6.30±1.00）比较差异有统计学意义（均P〈0.01）.结论 铁沉积于巨噬细胞可能是通过诱导一氧化氮（NO）过度合成,促进炎症的形成并进一步促进肝纤维化的发生发展,而不是通过上调TGF-β1 mRNA表达来实现的.

复方肝毒清对铁超载肝星状细胞活化和凋亡的影响

【目的】观察复方肝毒清对铁超载肝星状细胞(HSC)活化和凋亡的影响。【方法】体外培养HSC-T6细胞,分为正常对照组、模型组、中药组(给药浓度为0.08 g/L)。以柠檬酸铁胺(FAC)与HSC-T6细胞共同温育,建立HSC铁超载模型。采用免疫组化法检测HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,半定量聚合酶链反应(PCR)法检测细胞转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达,TUNEL法检测HSC-T6细胞的凋亡,电镜观察HSC-T6细胞超微结构。【结果】正常对照组和模型组HSC-T6细胞α-SMA大量表达,未见或仅见有较少细胞发生凋亡,而中药组HSC细胞α-SMA表达明显减少,TGF-β1 mRNA表达显著降低(P<0.05),且出现明显细胞凋亡。【结论】中药复方肝毒清可能通过调节细胞铁的代谢,抑制HSC活化并诱导其发生凋亡,从而在体外发挥抗肝纤维化作用。

替比夫定对慢性乙型肝炎患者肌酸激酶升高的多因素分析

目的:探讨替比夫定对慢性乙型肝炎(CHB)患者肌酸激酶(CK)升高的影响因素。方法:对2010年1月至2011年6月我院使用替比夫定抗病毒治疗的60例CHB患者进行回顾性分析,记录患者年龄、性别、他汀类药物使用史、运动史、肝硬化病史、联合抗病毒治疗史,以及CK、天门冬氨酸转氨酶(AST)等5项实验室检测指标。采用Logistic逐步回归和多元线性回归分析。结果:Logistic回归显示男性、运动等是替比夫定治疗时影响CK水平升高的独立危险因素。多元线性回归显示CK的变化与AST、乳酸脱氢酶(LDH)有线性回归关系,且AST对CK的影响最大。结论:运动是替比夫定治疗时血清CK水平升高的危险因素。因此,建议在替比夫定抗病毒治疗时尽量避免运动疲劳,以防止CK水平升高甚至肌病的发生。

补中益气汤对慢性乙型肝炎患者肌酸激酶和乳酸脱氢酶影响观察

目的:观察补中益气汤对慢性乙型肝炎患者的疗效。方法:对2010年1月——2011年6月我院使用替比夫定抗病毒治疗期间血清肌酸激酶(CK)升高的34例慢性乙肝患者进行多元线性回归分析,筛选出影响患者血清CK升高的因素。将患者随机分为对照组(14例)和观察组(20例)。对照组患者常规予替比夫定治疗,观察组患者常规使用替比夫定同时予补中益气汤治疗,连续4周。检测两组患者血清CK、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)水平。结果:①CK的变化与AST、LDH有线性回归关系。②补中益气汤能明显降低患者血清CK和LDH水平。结论:AST、LDH是慢性乙肝患者CK水平升高的影响因素。补中益气汤能改善慢性乙肝患者的病情,尤其对于伴有CK和LDH升高的慢性乙肝患者有一定的疗效。

复方肝毒清对铁沉积巨噬细胞转化生长因子及炎症介质基因表达的影响

目的:探讨复方肝毒清的抗肝纤维化机制。方法:以柠檬酸铁胺与RAW264.7细胞共同温育,体外建立铁沉积巨噬细胞模型。将RAW264.7细胞分为空白对照组、铁沉积模型组、中药组、铁沉积模型+中药组共4组,观察复方肝毒清对铁沉积巨噬细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的影响。结果:铁沉积于巨噬细胞主要使iNOS、TNF-αmRNA表达明显上调,TGF-β1 mRNA表达明显下调,而中药复方肝毒清能使其出现相反基因表达变化。结论:复方肝毒清的抗肝纤维化机制与其降低细胞炎症反应及调节体内铁的代谢有关,而不是通过下调TGF-β1 mRNA的表达来实现。

复方肝毒清对二甲基亚硝胺诱导小鼠肝损伤模型的保护作用

[目的]探讨复方肝毒清对二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)诱导小鼠肝损伤模型的保护作用。[方法]将60只小鼠随机分为空白对照组、模型组、联苯双酯组及复方肝毒清高、中、低剂量组。空白对照组予0.85%氯化钠10 ml/kg灌胃,其他各组以15 mg/kg DMN腹腔注射建立小鼠肝损伤模型,同时后4组分别按150mg/kg联苯双酯滴丸和20、10、5 g/kg复方肝毒清灌胃,每12 h给药1次,共4次。赖氏法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、清蛋白水平;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;定量PCR法检测肝组织TNF-α、IL-1βmRNA的表达。[结果]复方肝毒清不仅能够显著改善肝功能和肝组织病理,而且能明显降低血清TNF-α、IL-1β水平和肝组织TNF-α、IL-1βmRNA的表达。[结论]复方肝毒清可能是通过减少炎症细胞因子的分泌而达到保护肝脏的作用。