IFN-γ逆转免疫编辑后人肺癌A549细胞对CIK杀伤敏感性的研究

目的:探讨IFN-γ对免疫编辑后人肺癌A549细胞对CIK杀伤敏感性的逆转作用。方法:应用RT-PCR和MTT方法分别检测IFN-γ对免疫编辑后A549细胞表面MICA表达的影响及A549细胞对CIK杀伤敏感性的变化。结果:免疫编辑后A549细胞表面低表达MICA,对CIK细胞杀伤敏感性低。IFN-γ可明显上调编辑后A549细胞MICA mRNA的表达率,提高CIK对编辑后A549细胞的细胞毒活性。结论:IFN-γ可以增强A549细胞表面MICA mRNA表达,逆转免疫编辑后A549细胞对CIK细胞杀伤敏感性。

血清HSP27在原发性肝细胞癌早期诊断中的应用

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)在原发性肝细胞癌(HCC)早期诊断中的应用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测正常人、乙肝病毒携带者和HCC患者血清中HSP27的含量,并结合化学发光免疫分析法进行血清甲胎蛋白(AFP)的平行检测。结果 HCC患者平均HSP27水平明显高于正常对照组和HBV携带者。其中大/小肝癌组、或AFP阴性/AFP阳性HCC组与正常对照组、慢性HBV感染组及急性HBV感染组比较,差异均有统计学意义。所有肝癌组与AFP阳性的HBV感染组相比差异也有统计学意义。并且,当HSP27与经典标志物AFP相结合检测HCC时,诊断的敏感性、特异性、阳性预测值均大大提高。结论 HSP27可以作为HCC的早期血清学诊断的生物标志物。HSP27和AFP平行试验可提高敏感度,减少误诊率,有利于临床诊断工作。

参芪扶正注射液对CAF方案化疗后乳腺癌患者免疫功能的影响

目的探讨参芪扶正注射液对CAF方案化疗后乳腺癌患者免疫功能的影响。方法 110例乳腺癌分为试验组(58例)和对照组(52例),试验组58例采用CAF方案化疗的同时辅以参芪扶正注射液治疗,对照组52例采用单纯化疗。比较两组患者的生活质量、毒副反应、外周血淋巴细胞绝对数值及单个核细胞杀伤活性在治疗前后的改变。结果治疗后试验组和对照组患者的生活质量提高率分别为34.5%和13.5%(P<0.05);与对照组相比,试验组患者治疗后白细胞、血红蛋白、血小板、淋巴细胞绝对数值以及外周血单个核细胞对不同乳腺癌细胞杀伤活性下降程度减轻。结论参芪扶正注射液联合CAF方案化疗治疗乳腺癌可以减轻化疗毒副反应,改善临床症状,提高生活质量,增强免疫功能。

免疫编辑前后细胞因子诱导的杀伤细胞分泌细胞因子水平及细胞毒活性的比较

目的探讨免疫编辑前后细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)分泌细胞因子水平及细胞杀伤活性的变化。方法采用Ficoll密度梯度法提取脐血单个核细胞,定向诱导成CIK细胞,即免疫编辑前CIK细胞。Transwell小室共培养CIK细胞与人肺癌A549细胞,分离纯化CIK细胞即免疫编辑后CIK细胞。通过ELISA和MTT法分别检测免疫编辑前后CIK细胞分泌细胞因子水平及细胞毒活性的变化。结果CIK细胞与A549细胞共培养后,其分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的含量较共培养前CIK细胞显著下降(P<0.05),IL-2则略有降低。共培养后CIK细胞杀伤活性明显减弱(P<0.05)。结论CIK细胞与人肺癌A549细胞间存在免疫编辑作用,编辑后的CIK细胞分泌细胞因子水平及杀伤活性均下降。

针刺和神经干细胞联合治疗脑瘫幼鼠的效果评价

目的研究针刺和神经干细胞联合治疗对脑瘫幼鼠脑神经细胞形态数目及学习记忆能力和肢体功能的影响并探讨可能机制。方法取新生7日龄SD幼鼠制备缺氧缺血性脑损伤性大鼠(HIBD)脑瘫模型,32只SD幼鼠随机分成4组:正常对照组(正常组)、模型组和治疗组(包括单纯针刺组和针刺+NSC组),每组8只,模型成功后(术后)第3天开始治疗。针刺部位为百会,颞1针,曲池,内关,足三里,涌泉。神经干细胞(NSC)取自新生SD大鼠海马组织分离培养,采用尾静脉注射,治疗3周(术后24 d)后进行效果评价,包括悬调实验,斜坡实验,Y迷宫测试。最后取脑组织进行免疫组织化学检测。结果悬调实验,斜坡实验,Y迷宫测试,海马正常神经细胞数目及脑皮质的凋亡指数和海马组织切片检查中,联合移植组与模型组和单纯针刺组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论联合治疗组比单纯针刺组能更好的提高脑瘫幼鼠的学习记忆能力,更好的改善其肢体功能,在维持其脑神经细胞数目和抑制脑皮质细胞凋亡方面有更好的作用。

PIK3CA过表达对胃癌细胞侵袭力影响的探讨

目的:探讨PIK3CA过表达对胃癌细胞侵袭力的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测3种不同分化胃癌细胞HGC-27、BGC-823和SGC-7901中PIK3CA mRNA及蛋白表达水平。通过Transwell侵袭小室法检测其侵袭力,分析PIK3CA表达水平变化对胃癌细胞侵袭力的影响。结果:PIK3CA mRNA及蛋白在未分化HGC-27细胞中表达水平最高,细胞侵袭力最强(穿膜细胞数为45.24±3.16),在低分化BGC-823细胞(穿膜细胞数为22.28±1.65)及中等分化的SGC-7901细胞(穿膜细胞数为14.42±1.02)中分别次之(P<0.05)。结论:PIK3CA mRNA及蛋白表达水平越高,细胞侵袭力越强,且后者随前者表达减少而减弱;PIK3CA过表达可能在胃癌细胞侵袭中起重要作用。

PIK3CA在不同鼻咽癌细胞株中的表达及其与放射敏感性的关系

放射治疗是鼻咽癌的主要治疗手段，而相对放射抵抗的亚细胞系残存并增殖，成为复发的根源。临床实践表明，即使是同一病理类型的鼻咽癌患者对放射线的敏感性也不同，对于不同的鼻咽癌患者的治疗需要放疗的个体化。因此，发现预测鼻咽癌放射敏感性相关分子标志物，对指导鼻咽癌个体化治疗和改善其预后具有重要的意义。

负载人结肠癌Lovo细胞总RNA抗原树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞在体外特异性杀伤的影响

目的探讨人结肠癌Lovo细胞总RNA抗原致敏的树突状细胞（DC）对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在体外特异性杀伤的影响。方法利用Ficoll密度梯度离心法提取脐血单核细胞，分别诱导CIK和DC细胞，并用流式细胞仪检测其免疫表型。采用Trizol提取结肠癌Lovo细胞总RNA作为肿瘤细胞抗原，转染脐血来源的DC。实验分为3组：转染LovoDC共培养CIK组、未转染DC共培养CIK组和单纯CIK组。靶细胞为Lovo细胞，在效靶比为50：1和20：1的条件下以噻唑蓝法分别检测CIK的体外杀伤活性。结果在效靶比为20：1时，负载LovoRNA抗原的DC能诱导出CIK对Lovo细胞最强的细胞毒杀伤力为（76．49±4．21）％，DC＋CIK组次之为（53．84±2．15）％，CIK组细胞毒性最低为（32．20±3．07）％，且两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论肿瘤细胞总RNA提取方法简单，易于临床实施，其作为抗原致敏DC能强化CIK的特异性杀伤，将有很好的I临床应用前景。

靶向PIK3CA候选miRNAs在胃癌细胞与血清中表达的分析

目的:预测和筛选靶向PIK3CA的候选miRNAs并检测其在胃癌细胞和血清中的表达。方法:采用生物信息学并结合既往文献和前期研究,预测和筛选出靶向PIK3CA的候选miRNAs(miR-203和miR-506)。常规提取胃癌细胞和血清总RNA,并用DNaseⅠ进行消化。以miRNAs特异性茎-环引物引导反转录,通过实时荧光定量PCR对miR-203、miR-506和内参U6进行检测,并采用琼脂糖凝胶电泳检测定量PCR产物。结果:电泳检测细胞和血清中RNA纯度较好;胃癌细胞和血清中miR-203、miR-506和内参U6均能实现特异性扩增。miR-203在胃癌细胞SGC-7901及MGC-803中表达分别为1.360±0.102和1.241±0.110,差异无统计学意义,t=3.125,P=0.09;miR-203在胃癌患者血清中表达为1.420±0.122,明显低于健康人的3.450±0.206,t=2.521,P=0.02。miR-506在胃癌细胞SGC-7901和MGC-803及胃癌患者和健康人血清中表达水平分别为1.256±0.113、1.158±0.109、1.735±0.220和1.592±0.134,差异无统计学意义,P>0.05。结论:miR-203可能是调控PIK3CA基因的miRNAs之一。PIK3CA在胃癌中的高表达可能与miR-203的异常低表达有关,而与miR-506无关。胃癌患者血清中miR-203的表达有望成为预测胃癌发生或发展的一个重要的分子标志。

两种不同荧光标记的PIK3CA siRNA体外转染特性分析

目的比较两种不同荧光标记的PIK3CA siRNA体外转染特性，筛选出转染效率高、抗淬灭能力强的PIK3CA siRNA。方法利用脂质体LJpofectamine 2000转染两种荧光标记PIK3CA siRNA及阴性对照siRNA人胃癌细胞BGC－823，倒置荧光显微镜观察其荧光分布和淬灭情况，并通过ImageJ软件分析其转染效率。实时定量PCR检测不同荧光标记的PIK3C AsiRNA对靶mRNA表达的影响。结果相同转染条件下，两种荧光标记的PIK3CA siRNA转染效率及抗淬灭能力不同。Cy3或FAM标记的PIK3CA siRNA与阴性对照siRNA转染效率无明显差异，但Cy3标记的PIK3CA siRNA与阴性对照siRNA转染效率较FAM标记的明显升高（P〈0．05）。Cy3标记的PIK3CA siRNA对靶mRNA的抑制作用明显高于FAM标记的PIK3CA siRNA（p〈0．05）。结论Cy3标记PIK3CA siRNA可以起到良好的示踪作用，为进一步构建Cy3标记PIK3CA siRNA纳米粒子提供了重要的实验依据。