SELDI-TOF-MS技术在预测肿瘤化疗敏感性中的应用

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术是新一代蛋白质组研究技术,它使用特殊的增强表面直接捕获待测样本中的蛋白质分子,能够快速、敏感地发现并鉴定蛋白,提供一个高通量和高灵敏度的检测平台。最初主要应用于疾病早期诊断相关的蛋白质标志物。目前在预测肿瘤化疗敏感性方面的应用也逐渐增多。本文除对表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术做详尽的介绍外,重点阐述其在预测肿瘤化疗敏感性方面的应用,并对其优缺点和发展前景进行评估。

非小细胞肺癌吉非替尼耐药相关miRNAs的筛选鉴定

目的:miRNA是一类通过结合mRNA调节基因表达的非编码单链小分子RNA,本研究目的是探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中miRNA与吉非替尼耐药的关系。方法:CCK8法检测NSCLC吉非替尼耐药细胞PC9/GR相对于亲本细胞PC9的耐药倍数;miRNA芯片检测PC9/GR与PC9中miRNA的表达差异;RT-PCR验证miRNA芯片结果。将差异表达的miRNA模拟物/抑制剂转染至PC9/GR中,观察其对吉非替尼敏感性的影响。结果:吉非替尼对PC9和PC9/GR的IC_(50)值分别为42.89 nmoL/L和3.87μmoL/L,耐药倍数为90.23倍miRNA芯片结果显示,PC9/CR与PC9比较55条有差异表达miRNAs(P<0.01),其中在PC9/GR上调的miRNAs有21条,包括miRNA-1246、miRNA-125b等;下调的miRNAs有34条,包括miRNA-224、miRNA-125a～5p等RT-PCR进一步验证其中9条miRNAs,有8条与芯片结果趋势一致。将上述8条miRNAs的模拟物/抑制剂转染至PC9/GR中,发现miRNA-125a～5p模拟物可降低吉非替尼敏感性。结论:PC9/GR与PC9的miRNA表达存在差异,miRNA可能与NSCLC吉非替尼耐药相关,miRNA-125a～5p可促进PC9/GR对吉非替尼产生耐药。

应用蛋白芯片技术筛选肺腺癌化疗敏感血清蛋白标志物

目的 探讨肺腺癌化疗敏感患者与化疗耐药患者血清蛋白质质谱的不同，筛选肺腺癌化疗敏感血清蛋白标志物。方法用WCX2蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术，检测22例肺腺癌化疗敏感的患者和21例化疗不敏感的血清蛋白质谱，筛选出差异表达蛋白质。结果发现利用M／Z（质荷比）为16083．50Da，7963．17Da，16121．50Da，15921．60Da，8066．79Da，8040．17Da和3394．57Da的7个差异蛋白可区分标准含铂类方案化疗敏感组和耐药组，联合m／z为7963．17Da与16083．50Da的差异蛋白建立预测模型，可预测肺腺癌标准含铂类方案化疗敏感／耐药性，其敏感性86．36％和特异性80．95％。结论SELDI—TOF—MS技术是寻找肺腺癌化疗敏感血清诊断标志物的有效工具。

非小细胞肺癌化疗疗效相关血清小分子蛋白的初步研究

目的:寻找非小细胞肺癌化疗耐药与敏感患者血清中的差异小分子蛋白,通过分离纯化进行质谱鉴定。方法:用WCX2蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,分别检测14例化疗敏感和26例化疗耐药的非小细胞肺癌血清蛋白质谱,筛选出差异表达蛋白质谱。Clinprot磁珠分离纯化后,进行基质辅助激光吸附电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定。结果:SELDI-TOF-MS检测到100个有效蛋白峰,其中P<0.05的差异蛋白峰23个,联合质荷比(m/z)为3193.14Da和3263.61Da的差异蛋白建立预测非小细胞肺癌化疗耐药模型,敏感性90.23%,特异性98.56%。进行MALDI-TOF/TOF-MS鉴定,质荷比(m/z)为3263.61Da的蛋白为DNA结合相关蛋白。结论:SELDI-TOF-MS技术可以筛选非小细胞肺癌化疗疗效相关蛋白。