SNS-032诱导弥漫性大B淋巴瘤OCI-LY-19细胞株凋亡及其作用机制的研究

目的:研究SNS-032对弥漫性大B淋巴瘤细胞株OCI-LY-19凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:应用MTS法观察不同浓度的SNS-032对OCI-LY-19细胞活力的影响;用PI单染法观察SNS-032对OCI-LY-19细胞诱导死亡的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术分析不同浓度SNS-032对OCI-LY-19细胞凋亡的影响;Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白和细胞增殖相关蛋白的表达情况。结果:SNS-032明显抑制OCI-LY-19细胞活力,半数抑制浓度为0.358μmol/L;随SNS-032作用时间延长与浓度升高,凋亡细胞数逐渐增多;SNS-032可以时间与剂量依赖性地引起凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的切割,caspase-3前体(procaspase-3)、caspase-9前体(procaspase-9)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)与髓样细胞白血病1(Mcl-1)的表达下降,而cleavedcaspase-3和cleaved caspase-9表达明显增加;与细胞增殖相关的蛋白丝/苏氨酸激酶(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、信号转导子及转录激活子5(STAT5)、磷酸化STAT5(p-STAT5)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)表达下降,而ERK总蛋白无明显变化。结论:SNS-032能抑制弥漫性大B淋巴瘤细胞株OCI-LY-19的生长,诱导其凋亡,可能的机制是抑制了相关抗凋亡蛋白的表达,激活了caspase级联反应,同时抑制了与细胞增殖相关的JAKs/STATs、MEK/ERK和PI3K-Akt信号转导通路的表达与活化。

藤黄酸对多发性骨髓瘤细胞株NCI-H929增殖和凋亡影响

目的探讨藤黄酸对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其分子学机制,为其临床治疗多发性骨髓瘤提供依据。方法用不同浓度的藤黄酸处理多发性骨髓瘤细胞株NCI-H929细胞,采用MTS法检测藤黄酸对多发性骨髓瘤细胞活性的影响;碘化丙啶单染法于荧光显微镜下观察细胞形态的变化;应用Western blot法检测泛素蛋白酶体系统相关蛋白(泛素-蛋白酶体系统蛋白(Ubs)、B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子α、B细胞淋巴瘤因子相关蛋白(Bax))、凋亡相关蛋白(聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3前体(Pro-caspase3)、髓细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、B细胞淋巴瘤-白血病-2蛋白(Bcl-2)及信号转导和转录激活因子5(STAT5))表达情况。结果藤黄酸明显抑制NCI-H929细胞的活力,诱导NCI-H929细胞凋亡;随藤黄酸浓度升高,Ubs聚集,Bax表达升高,蛋白酶体系统受到抑制;随藤黄酸浓度升高与作用时间延长,PARP出现切割,凋亡相关蛋白Pro-caspase3、Mcl-1、XIAP、Bcl-2及增殖通路蛋白STAT5表达下调。结论藤黄酸能够抑制多发性骨髓瘤细胞株NCI-H929的蛋白酶体活性,影响凋亡相关蛋白的表达,促进细胞凋亡。其机制可能通过抑制JAKs/STATs信号转导通路的活化,抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖。

藤黄酸诱导Burkitt淋巴瘤细胞株凋亡及增殖抑制的分子学机制

【目的】研究藤黄酸对Burkitt淋巴瘤细胞株Namalva细胞增殖与凋亡的影响及其分子学机制,探讨藤黄酸治疗Burkitt淋巴瘤的潜在应用价值。【方法】用不同剂量藤黄酸处理细胞,采用MTS法对淋巴瘤细胞进行细胞活力及增殖抑制测定;0.25、0.5、0.75μmol/L藤黄酸分别处理细胞24 h,0.75μmol/L藤黄酸分别处理细胞6、12、24h后收集细胞,采用AnnexinⅤ-FTIC/PI流式细胞术检测藤黄酸剂量依赖性细胞凋亡情况;利用Western blot方法检测凋亡相关蛋白和细胞增殖信号通路相关蛋白剂量与时间依赖的变化情况。【结果】藤黄酸明显抑制Namalva细胞的增殖,诱导Namalva细胞发生凋亡。随藤黄酸浓度升高与作用时间延长,细胞中PARP,caspase 8出现切割,Bax表达上调,Pro-caspase 3,Pro-caspase 9,Bcl-2表达下调。增殖通路蛋白STAT5、p-STAT5、ERK、p-ERK的表达受到明显抑制。【结论】藤黄酸通过影响Burkitt淋巴瘤细胞株Namalva细胞凋亡相关蛋白的表达,促进细胞凋亡;通过抑制JAKs/STATs、MEK/ERK信号转导通路的活化,抑制Burkitt淋巴瘤细胞的增殖。

抑制SOD1调节上皮间质转化抑制鼻咽癌细胞迁移

【目的】探讨鼻咽癌异常表达的SOD1及其对细胞迁移能力的影响和可能的分子机制。【方法】采用免疫组化技术检测癌和癌旁组织中SOD1的表达(n=10),采用脂质体转染si RNA下调SOD1表达,用抑制剂LCS-1抑制SOD1,划痕实验及迁移实验检测其对鼻咽癌细胞体外迁移能力的影响,定量PCR检测上皮细胞分子标志物E-cadherin及间质型分子Vimentin及转录因子Twist的m RNA水平,Western Blot法检测E-cadherin、Vimentin蛋白水平。【结果】与癌旁组织相比,7例癌组织中SOD1相对高表达(70%);在鼻咽癌细胞中,SOD1在高转移细胞系5-8F、S18及CNE2中较低转移细胞系6-10B中高表达。在5-8F、CNE2细胞中敲低或抑制SOD1后鼻咽癌细胞的迁移力下降,同时上皮型分子E-cadherin的m RNA和蛋白水平被上调、间质型分子Vimentin和转录因子Twist的表达下调。【结论】SOD1可能通过调控鼻咽癌细胞上皮间质转换(EMT)促进鼻咽癌细胞的迁移。

白藜芦醇抑制H460肺癌细胞的增殖作用研究

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞H460增殖的影响,以探索小分子核酸miR-622在白藜芦醇抗癌中的作用。方法用不同浓度的白藜芦醇处理肺癌细胞H460,利用CCK8试剂盒检测细胞增殖,以miRNA定量试剂盒检测miR-622的表达水平。利用Lipofectamine 2000将miR-622模拟物、miR-622抑制剂及其相应对照转染进入H460细胞内。结果 50μmol/L白藜芦醇处理48 h即可使H460的细胞增殖明显降低至(49.77±1.33)%,差异有统计学意义(P<0.01)。50μmol/L白藜芦醇处理48 h后,miR-622的表达增高(13.48±2.16)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。转染miR-622模拟物可显著提高miR-622的表达,明显使H460细胞的增殖率降低至(60.27±5.93)%,P<0.01。在白藜芦醇处理组中,转染miR-622抑制剂可明显降低miR-622的表达;与miR-622抑制剂对照组(51.67%±4.22%)相比,继而使H460细胞的增殖率增高恢复至(86.67±1.11)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇可抑制H460细胞的生长,且这种作用与miR-622的表达上调密切相关。

藤黄酸下调Bcr-Abl蛋白对慢粒细胞株K562增殖和凋亡的影响

目的研究藤黄酸对人慢性粒细胞性白血病细胞株K562抑制增殖及诱导凋亡的作用,并探讨其可能作用机制。方法用藤黄酸处理K562细胞,采用MTS法和台盼兰计数法测定细胞活力及增殖;碘化丙啶(PI)单染荧光显微镜观察细胞形态改变;采用AnnexinV-FTIC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;利用Western blotting检测凋亡相关蛋白及细胞增殖信号通路的变化情况。结果藤黄酸对K562细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。藤黄酸处理后的细胞,经PI染色,荧光显微镜下观察可见死亡细胞形态发生改变,细胞核红染。流式细胞术检测显示加药处理组细胞以凋亡方式为主,凋亡率比对照组明显升高(P<0.05)。Western blotting检测发现凋亡相关蛋白激活,Bcr-Abl及下游的信号通路受到不同程度的抑制(P<0.05)。结论藤黄酸对K562细胞具有凋亡诱导和增殖抑制作用,作用机制与caspase系统激活和Bcr-Abl增殖相关通路受抑有关。