银杏叶提取物对成骨细胞分化的影响及相关机制研究

目的:探讨银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对成骨细胞分化的影响及其可能的相关分子机制。方法:将不同浓度的GBE作用于MG63,通过茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)活性检测判定其对细胞成骨分化能力的影响。RT-PCR检测Runx2(runt-related transcription factor 2)、一型胶原蛋白(COL1A1)、骨钙素(Osteocalcin,OC)及细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达,Western Blot检测细胞核蛋白β-catenin及cyclinD1的表达。结果:不同浓度的GBE能提高ALP活性及钙结节数量,在浓度为75 mg/L时最为显著;此外,GBE能显著提高Runx2、COL1A1、OC、cyclinD1的mRNA表达及cyclinD1的蛋白表达,同时促进β-catenin蛋白的核内转移;而上述活性均能被DKK1所抑制。结论:银杏叶提取物对成骨细胞的分化具有积极意义,其机制可能与经典Wnt通路的激活有关。

银杏叶中异鼠李素对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响及其分子机制

目的探讨银杏叶中异鼠李素(isorhamnetin,ISO)对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响及其可能的相关分子机制。方法在核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞的同时,加入不同浓度的ISO(1~10μM),研究其对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响,通过CCK8法检测及评估各作用浓度ISO的细胞毒性,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resis-tant acid phosphatase staining,TRAP)染色及骨片吸收效果判定其对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响。实时定量PCR检测破骨细胞分化过程的标志性基因:TRAP、组织蛋白酶K(cathepsin K,Ctsk)、金属基质蛋白酶9(matrix metallo protein,MMP-9);分化相关转录因子:原癌基因c-Fos(proto-oncogene protein,c-Fos)、核转录因子激活的T细胞1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)的表达及破骨细胞分化下游因子NF-κB p65信号通路的磷酸化水平。结果不同浓度的ISO(1~10μM)对RAW264.7细胞无细胞毒性,并且能抑制TRAP活性,减少骨吸收陷窝数量,在浓度为10μM时最为显著;ISO能显著降低TRAP、Ctsk、MMP-9、c-Fos、NFATc1及NF-κB p65的m RNA表达。结论 ISO对RAW264.7细胞向破骨细胞的分化具有抑制作用,其机制可能与经典NF-κB通路的抑制有关。