喉癌顺铂耐药细胞株的建立及干性生物学特性分析

目的建立人喉癌顺铂(CDDP)耐药细胞株并鉴定其干细胞生物学特性,探讨其对CDDP耐药机制及与干细胞的关系。方法以药物浓度梯度递增法诱导建立人喉癌Hep-2的顺铂耐药细胞株Hep-2/CDDP;倒置显微镜观察细胞的形态;CCK-8法检测细胞IC50及耐药指数;无血清细胞球体培养观察成球能力;实时定量RTqPCR法检测MDRl/P-gp、ABCG2、CD44、CD133 mRNA的表达情况;Western blot法检测MDRl/P-gp、ABCG2、CD44、CD133蛋白表达情况。结果顺铂体外缓慢诱导历时12个月建成的Hep-2/CDDP耐药细胞株,与亲本Hep-2细胞相比,细胞形态改变明显;耐药性能稳定耐药指数为5.43;无血清球体培养实验示细胞成球率升高(P<0.05);RT-qPCR和Western blot结果表明耐药相关基因MDRl/P-gp、ABCG2表达上调(均P<0.05);干性相关标记基因CD44、CD133升高(均P<0.05)。结论 Hep-2/CDDP细胞株具有稳定的顺铂耐药性,是研究喉癌顺铂耐药和逆转机制的良好模型,且其耐药机制与顺铂诱导的肿瘤干细胞有关,可为研究逆转耐药提供参考。

干扰核转录因子Snail增强喉癌耐药细胞顺铂敏感性的研究

目的:探讨核转录因子Snail对喉癌顺铂耐药细胞株(Hep-2/CDDP)顺铂敏感性的影响。方法:采用小干扰RNA(si-RNA)技术靶向沉默Hep-2/CDDP细胞中Snail的表达;采用实时定量荧光聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测其干扰效率;免疫荧光法检测干扰组(si-Hep-2/CDDP)和对照组(Hep-2/CDDP)中Snail蛋白的表达情况;CCK-8法检测干扰组和对照组对0、1、2、4、8、16μg/ml不同浓度的顺铂抑制率;Western blot法检测干扰组和对照组si-Snail处理前后Snail、E-cadherin、MDR1蛋白的表达情况。结果:RT-qPCR结果显示,靶向沉默Snail后干扰组细胞Snail表达较对照组下降(67.85±9.50)%;免疫荧光实验示,干扰组细胞核及细胞质中Snail荧光强度均下降;CCK-8实验示,不同浓度顺铂作用后,与耐药细胞Hep-2/CDDP相比,干扰组抑制率较对照组升高;Western blot示Snail干扰组蛋白水平较耐药细胞组表达下调(P<0.05),同时上皮表型标记E-cadherin表达上调,多药耐药蛋白MDR1表达下调(均P<0.05)。结论:干扰核转录因子Snail可上调E-cadherin的表达,降低耐药细胞Hep-2/CDDP耐药蛋白MDR1的表达,增强喉癌耐药细胞的顺铂敏感性。