喉癌顺铂耐药细胞株的建立及干性生物学特性分析

目的建立人喉癌顺铂(CDDP)耐药细胞株并鉴定其干细胞生物学特性,探讨其对CDDP耐药机制及与干细胞的关系。方法以药物浓度梯度递增法诱导建立人喉癌Hep-2的顺铂耐药细胞株Hep-2/CDDP;倒置显微镜观察细胞的形态;CCK-8法检测细胞IC50及耐药指数;无血清细胞球体培养观察成球能力;实时定量RTqPCR法检测MDRl/P-gp、ABCG2、CD44、CD133 mRNA的表达情况;Western blot法检测MDRl/P-gp、ABCG2、CD44、CD133蛋白表达情况。结果顺铂体外缓慢诱导历时12个月建成的Hep-2/CDDP耐药细胞株,与亲本Hep-2细胞相比,细胞形态改变明显;耐药性能稳定耐药指数为5.43;无血清球体培养实验示细胞成球率升高(P<0.05);RT-qPCR和Western blot结果表明耐药相关基因MDRl/P-gp、ABCG2表达上调(均P<0.05);干性相关标记基因CD44、CD133升高(均P<0.05)。结论 Hep-2/CDDP细胞株具有稳定的顺铂耐药性,是研究喉癌顺铂耐药和逆转机制的良好模型,且其耐药机制与顺铂诱导的肿瘤干细胞有关,可为研究逆转耐药提供参考。