转化医学理念促进药理学和机能实验学的教学融合

针对药理学教学中存在以理论知识传授为主,忽视对学生应用知识能力培养的问题,提出在现有教学模式下,以转化医学理念为指导,加强理论与实践的联系,促进药理学与机能实验学的教学结合。利用机能实验课的综合性和探索性实验,激发学生学习兴趣,使学生的知识系统化和整体化,同时培养学生创新能力和科研素质,提高药理学教学效果。

甲状腺功能亢进激活心肌细胞β-catenin/FoxO1诱导大鼠心室重构的作用

【目的】探究甲亢激活心肌细胞β-catenin/FoxO1诱导大鼠心室重构的作用和机制。【方法】通过甲状腺激素(T40.1 mg/kg/day;腹腔注射)连续给药30 d构建甲亢诱导心室重构大鼠体内模型。利用β-catenin抑制剂MSAB(14 mg/kg)同时给药30 d,通过Western-blot检测心肌肥厚主要标志物ANP以及β-catenin、FoxO1等蛋白的表达情况;免疫荧光检测β-catenin、FoxO1的核内外表达及分布情况。利用原代培养的乳鼠心肌细胞,使用甲状腺激素(T320 nmol/L)处理心肌细胞24 h构建体外甲亢诱导心肌细胞肥厚模型,利用β-cateninsiRNA(30 nmol/L)转染心肌细胞敲低β-catenin,Western-blot和免疫荧光检测抑制β-catenin对甲亢诱导乳鼠心肌细胞肥厚的影响。【结果】Wnt/β-catenin通路激活后β-catenin入核增多并于细胞核内的转录因子结合发挥转录调控作用。β-catenin在甲亢诱导的大鼠心室重构模型心肌细胞核内表达显著增加,而其经典下游转录因子TCF7l2表达无显著差异。我们的结果显示,MSAB抑制β-catenin明显改善甲亢诱导的大鼠心室重构。进一步研究表明甲亢诱导大鼠心肌肥厚过程中心肌细胞β-catenin/FoxO1表达明显增强,抑制心肌细胞β-catenin/FoxO1改善甲亢诱导大鼠心肌肥厚。【结论】甲亢性心肌肥厚心肌细胞β-catenin/FoxO1活化,抑制β-catenin/FoxO1改善甲状腺激素诱导的心肌细胞肥大。

课堂提问在大学课堂教学中的合理运用探讨

提问是师生课堂上的一种交流形式,是教师进行教学的重要手段和策略,也是调动学生学习积极性的重要方法。大学课堂上的授课形式应当是启发式教育为主,力求避免"满堂灌"。在大学课堂上合理运用提问这一教学技巧,能及时吸引学生的注意力,激发学生的参与意识,对重点难点问题的理解更深入,从而提高课堂教学质量。

和厚朴酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究和厚朴酚(Honokiol,HON)对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤(I/R)的影响并初步探讨其可能机制。方法 SD大鼠分为3组。对照组假手术+腹腔注射HON 10^(-7)g/kg,I/R组缺血30 min再灌注120min,HON组I/R+腹腔注射HON 10^(-7)g/kg。观测各组大鼠左心室血流动力学、心电图(ECG)和血浆肌酸激酶(CK)的变化,分离成年大鼠心肌细胞,Ion Optix光谱荧光检测系统记录HON对钙瞬变的影响。结果 (1)与对照组比较,I/R组大鼠左心室收缩末压(LVSP)、左心室最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室最大下降速率(-dp/dtmax)明显降低(P<0.05),左心室舒张末压(LVEDP)明显升高(P<0.05);心律失常的发生率和血浆肌酸激酶(CK)明显升高(P<0.05)。(2)与I/R组比较,HON组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax明显升高(P<0.05),LVEDP明显降低(P<0.05);同时,再灌注时出现心律失常时间明显延迟(P<0.05),再灌注后的前3 min内发生心律失常的时间总和和频率明显下降(P<0.05),室颤的发生率明显减少(P<0.05);血浆CK的活性显著降低(P<0.05)。(3)3μmol/L HON明显降低成年大鼠心肌细胞钙瞬变幅度。结论 HON能改善心肌I/R时心功能降低,并拮抗再灌早期出现的心律失常,机制可能与减少细胞内游离钙、减轻I/R时钙超载有关。

激活Sonic hedgehog通路改善1型糖尿病小鼠内皮祖细胞功能

目的研究激活Sonic hedgehog通路对1型糖尿病小鼠内皮祖细胞(EPCs)生物学功能的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导建立1型糖尿病小鼠模型;采用密度梯度离心法分离并培养糖尿病小鼠骨髓EPCs;体外给予Sonic hedgehog(Shh)信号通路配体蛋白Shh和受体激动剂SAG,通过MTT法、改良Boyden小室、Matrigel和β-半乳糖苷酶分别检测各组EPCs的增殖、迁移、小管形成和衰老的功能性指标。结果 1型糖尿病小鼠EPCs与正常对照组相比功能明显下降,体外给予Shh蛋白和受体激动剂SAG,可促进糖尿病EPCs增殖,减少衰老,改善迁移和小管形成能力。结论体外激活Sonic hedgehog通路可以改善1型糖尿病小鼠内皮祖细胞受损的功能。

4-苯基丁酸对糖尿病大鼠的心脏保护作用

目的观察4-苯基丁酸(4-PBA)对糖尿病大鼠心脏功能的影响并初步探讨其机制。方法♂Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成3组:对照组、糖尿病组和糖尿病+4-PBA组。单次腹腔注射链脲佐菌素(60 mg·kg-1)诱发大鼠糖尿病,在1型糖尿病模型制备成功后第5周开始每天给予大鼠4-PBA(1g·kg-1)灌胃,连续治疗20周。实验结束后,经右颈总动脉插管检测大鼠大动脉和左心室血流动力学变化,同时收集血清和心脏,比色法检测血糖,血清和心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)活性,丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量。结果 4-PBA治疗对糖尿病大鼠血糖、体重和心脏重量无明显影响,但可改善糖尿病大鼠血流动力学,表现为大动脉收缩压和舒张压、心率、左心室收缩压和左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dt)的轻度升高,左心室舒张压的轻度降低和舒张时程的缩短(P>0.05),左心室弛缓时间明显缩短(P<0.05)。4-PBA治疗尚可明显升高糖尿病大鼠血清和心肌组织SOD和NOS活力以及NO含量,并降低MDA含量(P<0.05)。结论 4-PBA治疗对糖尿病大鼠心脏有潜在保护作用,这一作用是通过改善糖尿病大鼠血流动力学和明显缓解其心脏舒张功能障碍而实现,并与其抑制动物体内氧化应激和促进心肌NO生成有关。

科学诚信在医学研究生教育中的现状和问题及应对策略

诚实守信是科研工作者必须具备的道德素质。过大的科研压力容易让医学研究生发生学术不端行为,减弱科研创新能力,对社会的发展产生意想不到的危害。因此,对医学研究生培养模式和评价系统进行改革,注重科学诚信教育,对提高医学研究生培养质量,预防科研学术不端行为的发生具有重要意义。

姜黄素对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素诱导人骨肉瘤细胞株MG63凋亡的机制。方法不同浓度（0、25、50和75μM）姜黄素作用MG63细胞24 h后,CCK8法检测细胞体外增殖,TUNEL染色法检测细胞凋亡,Western blotting检测AKT/Bax-Bcl-2/Caspase 3等内源性凋亡途径相关蛋白表达水平。结果 CCK8实验结果显示在0~75μM范围内,50μM以上浓度的姜黄素能显著抑制MG63增殖,诱导细胞凋亡、p-AKT蛋白水平明显降低,而Bax蛋白及剪切的Caspase 3蛋白水平则显著增高。结论姜黄素通过影响AKT/BaxBcl-2/Caspase 3途径诱导MG63细胞凋亡。

香芹酚对STZ诱导的1型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响

目的观察香芹酚对糖尿病小鼠糖脂代谢的影响。方法腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立1型糖尿病C57BL/6小鼠模型,成模小鼠随机分成3组(糖尿病组、香芹酚10、20 mg·kg^(-1)低、高剂量组),以同周龄同性别正常小鼠为对照组。糖尿病组和对照组腹腔注射生理盐水,其余组每天腹腔注射香芹酚,每周测体重和随机血糖,分别在给药2、4、6周后处死,收集小鼠血清,检测血糖、血脂、血总胆固醇、肝功能指标。结果香芹酚可有效降低糖尿病小鼠的随机血糖、血脂和乳酸脱氢酶水平。结论香芹酚可降低1型糖尿病小鼠血糖、血脂,保护受损器官,对糖尿病及其并发症有一定的治疗作用。

经典Wnt/β-catenin/TCF7L2信号通路在1型糖尿病心肌病中的作用

目的 探讨Wnt/β-catenin/TCF7L2信号通路在1型糖尿病小鼠心肌病中的作用。方法利用7~8周龄♂C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素,建立1型糖尿病模型,糖尿病小鼠成模4周后,随机分为糖尿病组、β-catenin通路抑制剂iCRT14(2.5、5 mg·kg^-1)组。连续腹腔给药8周后,HE染色检测心脏细胞形态;免疫组化及Western blot检测β-catenin、TCF7L2蛋白表达;荧光定量PCR检测β-catenin、Tcf7l2、Nppa、c-Myc mRNA表达。结果糖尿病组心肌细胞排列相对紊乱、细胞核大小不规则;Western blot和免疫组化结果显示,糖尿病组小鼠心脏β-catenin、TCF7L2表达升高,心肌细胞核内β-catenin、TCF7L2表达明显增多;qPCR显示,β-catenin/TCF7L2通路下游基因c-Myc、心肌肥大基因Nppa表达上调。iCRT14组小鼠心肌细胞排列相对规则,形态趋于正常;β-catenin、TCF7L2蛋白表达降低,核内表达减少;肥大基因Nppa、下游基因c-Myc mRNA表达明显减低。结论 Wnt/β-catenin/TCF7L2通路活化在糖尿病心肌病发生、发展中发挥重要作用,β-catenin抑制剂能明显减缓1型糖尿病小鼠心肌病的进程。

过表达Brahma-相关基因1腺病毒载体对氧化应激诱导心肌细胞凋亡的影响

背景:Brahma-相关基因1是调节染色质重构的重要核蛋白,在糖尿病心肌病中表达降低。目的:构建大鼠Brahma-相关基因1重组腺病毒载体,评价其在氧化应激诱导原代心肌细胞凋亡中的保护作用。方法:构建Brahma-相关基因1重组腺病毒载体质粒,经人胚肾293T细胞包装、扩增、计算滴度后,将Brahma-相关基因1重组腺病毒转染入SD乳鼠原代培养心肌细胞,以空载体EGFP转染细胞及正常细胞作为对照,24 h后,荧光显微镜观察转染效率;荧光定量PCR、免疫印迹法检测细胞Brahma-相关基因1mR NA、蛋白表达;24 h后,分别加入100μmol/L H2O2处理12 h,免疫印迹法检测Brahma-相关基因1蛋白表达、凋亡标志物cleaved-Caspase3表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与结论:(1)构建的重组腺病毒成功转染至心肌细胞,转染效率达90%以上,被转染细胞的Brahma-相关基因1 mR NA、蛋白表达明显增高;(2)H2O2可显著抑制心肌细胞Brahma-相关基因1表达,诱导心肌细胞凋亡,刺激心肌细胞cleaved-Caspase3表达;Brahma-相关基因1重组腺病毒可减轻由H2O2导致的上述心肌细胞损伤;(3)结果表明,氧化应激能直接抑制心肌细胞Brahma-相关基因1表达,Brahma-相关基因1在氧化应激诱导的心肌细胞凋亡中发挥保护作用。

香芹酚对STZ诱导的1型糖尿病小鼠主动脉血管重构的影响

目的观察香芹酚(carvacrol,CAR)对糖尿病小鼠主动脉血管重构的影响。方法腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立1型糖尿病C57BL/6小鼠模型,成模小鼠随机分为糖尿病组、CAR低、高剂量组(10、20 mg·kg^(-1)),以同周龄、同性别正常小鼠为对照组。糖尿病组和对照组每天腹腔注射生理盐水,CAR给药组每天腹腔注射CAR,每周测量体质量和随机血糖。给药6周后处死小鼠,收集主动脉,检测主动脉血管形态,细胞表型转变标志物α-actin、Ki67的表达,以及PDK1、Akt的磷酸化水平。结果 CAR可明显降低糖尿病小鼠的随机血糖,增加糖尿病小鼠主动脉Ki67的表达,以及PDK1、Akt的磷酸化水平,抑制α-actin的表达。结论CAR可降低1型糖尿病小鼠血糖,改善主动脉血管重构,对糖尿病及其并发的血管疾病有一定的治疗作用。

尿石素A对糖尿病小鼠心肌细胞自噬的影响

目的探讨尿石素A(urolithin A,UA)对糖尿病小鼠心肌细胞自噬的影响。方法葡萄糖(5. 5、20、33、47 mmol·L^(-1))及不同浓度的UA刺激乳鼠心肌细胞48 h,MTT比色法检测细胞存活率,Western blot法检测细胞内自噬蛋白LC3、p62的表达水平。健康♂C57BL/6小鼠连续6 d腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制备糖尿病小鼠模型,灌胃给予UA连续治疗10周,超声检测心功能指标,Masson染色观察心肌病理切片。结果 33 mmol·L^(-1)高糖刺激心肌细胞48 h后,细胞存活率下降,自噬蛋白p62、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P <0. 05),给予UA后,上述蛋白表达水平下降。与正常组比较,糖尿病组心功能显示E/A峰比值下降(P <0. 05),Masson结果显示胶原纤维的表达升高,UA干预后E/A峰比值增加(P <0. 05),心肌胶原纤维的表达降低。结论 UA可通过影响心肌细胞内自噬,发挥保护糖尿病心肌病的作用。

大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型中光纤氧测量系统的应用和评估

心肌缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤模型常用开胸结扎冠状动脉左前降支(left anterior descending artery,LAD)的方法建立 [1-3] ,而结扎是成模的关键,其确定方法以往文献报道均通过肉眼观察和心电图分析,本实验应用光纤氧测量系统,并在术后用B超和HE染色进行评估。

激活Sonic hedgehog通路改善缺血缺氧心肌细胞DNA损伤

目的探究Sonic hedgehog通路在糖氧剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)诱导的乳鼠心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡中的作用及机制。方法原代培养乳鼠心肌细胞,建立OGD的缺血缺氧模型,分别给予Sonic hedgehog通路激动剂SAG1.3(0.002μmol·L^(-1))、抑制剂GANT61(0.005μmol·L^(-1))处理6、12 h,MTT法检测细胞生存率;Western blot检测DNA损伤标志物γH2AX、DNA损伤反应蛋白ATM、ATR,以及细胞凋亡相关蛋白p53、凋亡标志物cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax表达;免疫荧光检测γH2AX表达。结果与正常组相比,OGD组心肌细胞γH2AX、p-ATM表达呈时间依赖性增加,OGD 6 h达到高峰,OGD 12 h后表达逐渐下降;p-p53、cleaved-caspase-3表达增加,Bcl-2/Bax比例下降;与OGD 6 h、OGD 12 h组相比,给予SAG1.3组OGD心肌细胞γH2AX、p-ATM表达明显下降,心肌细胞存活率上升,p-p53、cleaved-caspase-3表达下降,Bcl-2/Bax比例上升;GANT61组OGD心肌细胞较OGD组γH2AX、p-ATM表达明显上升,细胞存活率下降,p-p53、cleaved-caspase-3表达上升,Bcl-2/Bax比例下降。结论激活Sonic hedgehog通路可以通过抑制ATM磷酸化,减少γH2AX表达,改善缺血缺氧诱导的心肌细胞DNA损伤,抑制细胞凋亡。

过表达endophilin A2减轻异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的:研究过表达吞蛋白A2(endophilin A2,Endo A2)对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌肥大的影响。方法:取健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、Ad-EndoA2组、ISO模型组及ISO+Ad-EndoA2组,其中Ad-EndoA2组和ISO+Ad-EndoA2组于给药前1 d左心室壁注射Ad-EndoA2腺病毒,假手术组和ISO组注射磷酸缓冲盐溶液,然后分别连续7 d皮下注射生理盐水或ISO。7 d后用小动物超声测定心功能指标,然后处死大鼠,收集心脏,以心脏重量指数、HE染色及胚胎基因表达水平评价心肌肥大情况,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和P62的表达。结果:小动物超声结果显示,与假手术组相比,ISO组大鼠处于心肌肥大代偿期(左室收缩期前壁厚度、左室收缩期后壁厚度、射血分数和短轴缩短率升高,左室收缩内径及心输出量下降,均P <0. 05),心脏重量指数、HE染色及RT-qPCR结果也均显示心脏发生了明显肥大(P <0. 05),过表达Endo A2可明显减轻ISO诱导的心肌肥大,改善心功能(P <0. 05)。Western blot结果显示,过表达Endo A2明显逆转ISO引起的自噬水平降低(P <0. 05)。结论:过表达Endo A2可减轻ISO诱导的大鼠心肌肥大,可能与加强自噬有关。