测序法筛选慢性阻塞性肺疾病尼古丁受体CHRNB4基因外显子单核苷酸多态性

目的:寻找中国南方汉族人群尼古丁受体(CHRNB4)基因功能区与慢性阻塞性肺疾病(COPD)疾病相关的单核苷酸多态性位点(SNP)。方法:在广州地区抽取按照慢性阻塞性肺疾病全球创议(GOLD)诊断标准(扩张后FEV1/FVC<70%)确诊的汉族COPD患者120例,按年龄(±3岁)与病例频数匹配原则选取非COPD对照者120例,病例组来自广州医科大学附属市一人民医院住院及门诊患者,对照组来自门诊志愿者。抽取受试者外周血提取基因组DNA,利用Pubmed(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/)查寻CHRNB4的全基因组序列,以Oligo6引物设计软件设计包括全外显子序列在内的测序引物5对,焦磷酸法DNA测序,Bio Edit分析软件对测序序列进行比对及基因分型分析。结果:通过第一代测序,快速筛选出中国汉族人群CHRNB4外显子区3个SNP,分别为rs56218866、rs6743072、rs1948。其中rs56218866可引起氨基酸位点改变。结论:通过第一代测序,可以简单、快速筛选出中国南方汉族人群与尼古丁受体CHRNB4外显子功能区和COPD易感性相关的SNP位点。

高分辨熔解曲线基因分型技术检测尼古丁受体rs1051730和rs16969968单核苷酸多态性

目的寻求费用低廉、简便、快速的方法检测广东地区汉族慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者尼古丁受体rsl051730和~16969968单核苷酸多态性。方法收集2010年9月至2012年4月在广州医科大学附属市一人民医院、广州医科大学附属第一医院、广州医科大学附属第三医院住院及门诊受试者1248例，从广州荔湾城区和韶关云岩、桂头农村流行病学调查的资料抽取533例，共计1781例患者，分为COPD组1013例，非COPD对照组768例。应用高分辨率熔解曲线（HRM）技术，对尼古丁受体基因rs1051730和rs16969968进行分型，并以焦磷酸测序法进行对照。Hardy-Weinberg定律检测rs1051730和rs16969968单核苷酸多态性（SNP）是否符合遗传平衡。结果以HRM法能够较准确、快速区别出COPD与非COPD对照者尼古丁受体rs16969968A风险等位基因频率及基因型频率的差异，HRM分析显示rs1051730分为3型，分别为CC、CT、TT型，rs16969968也分为3型，分别为GG、AG、AA型，高分辨率熔解曲线可清楚的分辨rs1051730基因型及rs16969968基因型。rs16969968风险等位基因A的基因频率在COPD患者中为4．3％，在对照组中为3．0％（P=0．043）。杂合基因型AG在COPD的基因型频率为8．6％，对照组为5．7％（P=0．025），突变型AA罕见（仅0．1％）。rsl051730风险等位基因T和等位基因频率及基因型频率与rs16969968完全相同，连锁性分析发现两位点完全相关。200例标本测序结果显示，199例HRM基因分型结果与测序相同，仅1例结果不同，与测序符合率达98％以上，两位点均符合Hardy-Weinberg平衡定律（χ2=0．178，P〉0．05）。结论HRM费用低廉、简便、快速，能准确对尼古受体rs1051730和rs16969968基因分型。

Nrf2-ARE途径调控慢性阻塞性肺疾病肺泡巨噬细胞功能的研究进展

慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）是一种以不完全可逆的气流受限为特点呈进行性加重，且多与肺部对有害颗粒或气体的异常炎症反应有关的慢性疾病。其致病因素及发病机制主要包括慢性炎症反应、蛋白酶／抗蛋白酶失衡、氧化应激和上皮细胞凋亡等方面，其中氧化应激是造成慢阻肺的重要发病机制之一。目前，多数研究表明慢阻肺患者肺泡巨噬细胞的吞噬功能降低是慢阻肺的重要特征，为此国内外学者从肺泡巨噬细胞功能与氧化应激方面等角度对慢阻肺进行分析，发现Nrf2-ARE途径在肺泡巨噬细胞吞噬功能、抗炎等过程中扮演重要角色，本文就Nrf2-ARE途径与肺泡巨噬细胞功能在慢阻肺中的关系作一阐述。

Nrf2-ARE通路的激活改善香烟提取物作用下肺泡巨噬细胞的吞噬

目的 探讨Nrf2-ARE通路的激活是否能修复香烟烟雾刺激后肺泡巨噬细胞的吞噬功能及抗氧化应激作用。方法 实验分为空白对照组、香烟烟雾提取物 （CSE）组、萝卜硫素组和特丁基对苯二酚 （T-BHQ）组。运用共聚焦显微镜观察吞噬情况,流式细胞仪分析吞噬功能和活性氧（ROS）的表达。运用 Western印迹技术分析经药物干预16h后 Nrf2核蛋白在肺泡巨噬细胞中的表达。结果 与对照组相比,CSE刺激的肺泡巨噬细胞其吞噬功能明显下降 （P ＆lt;0 05）;运用 Nrf2-ARE通路的激活剂：萝卜硫素2 5μmol/L和T-BHQ20μmol/L干预后可明显减缓香烟刺激引起的肺泡巨噬细胞吞噬功能的降低 （P ＆lt;0 05）并降低细胞内的ROS （P ＆lt;0 05）。Western印迹技术证实干预16h后,T-BHQ及萝卜硫素可促进肺泡巨噬细胞Nrf2的核蛋白表达 （P ＆lt;0 05）。在CSE作用下,肺泡巨噬细胞的吞噬功能与Nrf2核蛋白的表达量呈正相关 （r=0 93,P ＆lt;0 05）;肺泡巨噬细胞ROS含量与Nrf2核蛋白的表达量呈负相关 （r=-0 942,P＆lt;0 05）,肺泡巨噬细胞的吞噬功能与细胞内ROS含量呈负相关 （r=-0 883,P ＆lt;0 05）。结论 Nrf2-ARE通路的激活可减缓CSE激引起的肺泡巨噬细胞的吞噬功能下降并具有抗氧化应激的保护作用。

耐碳青霉烯类多重耐药鲍曼不动杆菌的毒力特征研究

目的 了解耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌毒力因子携带状况,评估其致病力的强弱.方法 2016年1月-12月广州市第一人民医院医院感染患者标本中分离93株多重耐药性鲍曼不动杆菌,其中碳青霉烯类耐药菌株75株,碳青霉烯类敏感菌株18株,运动平板法进行蹭行运动检测、试管法测定菌株内明胶酶活性、结晶紫染色法定量分析生物被膜形成能力、微量法进行D-甘露糖抵抗的红细胞凝集试验.结果 耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌被膜形成率为70.7％（60/93）,而敏感菌株被膜形成率为38.9％（7/18）（P〈0.05）;多重耐药鲍曼不动杆菌的平均蹭行直径为（5.82±2.67）mm;耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌平均蹭行直径（5.32±1.65）mm,碳青霉烯类敏感菌株平均蹭行直径（7.89±4.75）mm（P〈0.05）;3株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌检测有明胶酶活性,其余均为阴性;红细胞凝集与抑制试验发现,无D-甘露糖存在条件下,90株鲍曼不动杆菌菌株与AB型红细胞发生凝集,89株与O型红细胞发生凝集;有D-甘露糖存在条件下,83株与AB型红细胞发生凝集,84株与O型红细胞发生凝集,耐碳青霉烯类株与敏感菌株红细胞凝集与抑制试验差异无统计学意义.结论 多重耐药鲍曼不动杆菌具有一定致病力,碳青霉烯类敏感菌株虽然具有更强的毒力,但耐碳青霉烯类菌株更易形成生物被膜,适应能力更强.这些病原学特征可能是临床上多重耐药鲍曼不动杆菌引起感染重要依据.