CD74/MIF信号通路对Capan-2细胞神经侵袭力及HIF-1α表达的影响

目的:探讨应用小干扰RNA(siRNA)沉默CD74和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对Capan-2细胞神经侵袭力及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其机制。方法:空白载体处理Capan-2细胞设为对照组,CD74-siRNA慢病毒稳定感染Capan-2细胞设为实验组。Transwell实验检测细胞侵袭能力,体外嗜神经侵袭(PNI)实验检测细胞神经侵袭力。靶向MIF的siRNA进一步处理两组细胞,免疫印迹法检测CD74、MIF、HIF-1α、CX3CR1和ERK1/2蛋白表达。结果:Transwell实验显示,对照组和实验组穿膜细胞数分别为(139.1±9.9)个/孔、(102.5±9.0)个/孔;体外PNI实验显示,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为(144.9±13.1)个/孔、(104.6±10.4)个/孔,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01),显示沉默CD74基因可显著抑制Capan-2细胞的侵袭能力和PNI能力。免疫印迹显示沉默CD74基因可明显抑制Capan-2细胞CD74蛋白表达,HIF-1α和CX3CR1等蛋白表达量也同时下降(均P<0.01)。MIFsiRNA不影响Capan-2细胞CD74蛋白表达(P>0.05); CD74-siRNA或MIF-siRNA均明显降低ERK1/2蛋白表达,二者联合转染抑制ERK1/2蛋白表达的效能最大(均P<0.01)。结论:沉默CD74可能通过MIFERK1/2信号通路,降低HIF-1α和CX3CR1蛋白表达而抑制Capan-2细胞侵袭和PNI能力。

六味能消胶囊联合西药治疗便秘型肠易激综合征的临床观察

目的观察六味能消胶囊联合西药治疗便秘型肠易激综合征的临床效果。方法选取2014年8月～2017年6月于本院消化内科就诊的120例便秘型肠易激综合征患者,按随机数字表法分为观察组与对照组,每组各60例。对照组采用枸橼酸莫沙必利分散片治疗,观察组在对照组基础上应用六味能消胶囊辅助治疗。比较两组患者治疗总有效率、治疗前后的临床症状(腹胀、腹痛、粪便性质、排便频率)评分、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide, VIP)与生长抑素(somatostatin, SS)水平及治疗期间不良反应总发生率。结果两组治疗前临床症状各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05),治疗后两组各项评分(腹胀、腹痛、粪便性质、排便频率)较治疗前均下降(P<0.05),且观察组显著低于对照组(P<0.01)。观察组治疗总有效率为95.0%,高于对照组83.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组血清VIP、SS水平较治疗前均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组治疗期间不良反应总发生率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论六味能消胶囊辅助治疗便秘型肠易激综合征的近期总有效率高,患者血清SS、VIP水平显著下降,临床症状缓解,安全性高,效果理想。

具核梭杆菌通过上调c-Jun表达促进结直肠癌细胞系caco-2的DNA复制

目的研究具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞系caco-2 DNA复制,并初步探讨其机制。方法 Fn感染caco-2细胞后,通过Ed U检测caco-2细胞DNA复制情况,采用RT-PCR及Western blotting检测c-Jun基因转录和蛋白表达,Western blotting检测细胞增殖相关基因CCND1的表达,利用siRNA敲低c-Jun表达,Western blotting技术检测感染Fn后caco-2细胞CCND1蛋白表达及Ed U检测caco-2 DNA复制情况。结果 Fn感染caco-2细胞6 h后,caco-2细胞DNA复制显著增加,c-Jun和Cyclin D1表达量增加,Fn感染并敲低c-Jun后,caco-2细胞DNA复制减少,Cyclin D1蛋白表达量也显著降低。结论 Fn可通过上调c-Jun的表达促进CRC细胞系caco-2的DNA复制。

脂联素基因启动子区甲基化状态对大鼠实验性非酒精性脂肪性肝病的影响

目的探讨脂联素基因启动子区甲基化与大鼠实验性非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的相关性。方法以24只SD大鼠为实验对象,分为3组,各为正常组、NAFLD模型组和姜黄素组。每只大鼠检测血生化指标,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠肝脏脂联素基因mRNA表达和亚硫酸氢盐克隆测序法(BSP)检测其甲基化程度,比较两组间的差异。结果 1NAFLD模型组对比正常组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、血糖均显著提高(P<0.05);姜黄素组较NAFLD模型组上述血清指标明显下降(P<0.05)。2在NAFLD模型组中大鼠肝脏脂联素mRNA表达率显著低于正常组,姜黄素干扰后,对比NAFLD模型组表达上调(P<0.05)。3NAFLD肝脏组织脂联素的甲基化程度明显高于正常大鼠肝组织,给予姜黄素去甲基化后,甲基化程度明显下降。对脂联素启动子区10个CpG位点分析,发现除了1679、1714两个位点外,余位点甲基化率均高于正常组,经数据统计后,发现只有1629、1641、1669、1690、1708、1791共6个位点甲基化率显著高于正常组(P<0.05);给予姜黄素干扰后,除过1629、1679之外所有位点甲基化率均有下降,但只有整体甲基化率及1641、1669、1690、1708、1791共5个位点具有统计学意义(P<0.05)。结论 1给予姜黄素治疗后,大鼠血清学指标改善,提示姜黄素在护肝、降脂、降糖方面发挥重要作用。2DNA甲基化可能是NAFLD的发病机制之一,姜黄素可能通过降低脂联素启动子区CpG甲基化水平,上调脂联素mRNA表达,减轻大鼠NAFLD大鼠模型的肝脂肪变性。3脂联素基因表达异常与该基因启动子区甲基化密切相关。

hsa-miR-653-5p靶向PTEN促进胃癌细胞迁移

目的了解hsa-miR-653-5p在胃癌中的表达水平及与胃癌临床病理特征的关系,初步探讨hsa-miR-653-5p在胃癌进展中的功能作用。方法本文利用TCGA数据库的数据评估得出hsa-miR-653-5p与胃癌患者预后显著相关,并分析hsamiR-653-5p在胃腺癌组织和正常胃组织中的表达水平;同时评估胃癌组织中hsa-miR-653-5p的表达水平与胃癌患者的淋巴结个数及临床预后的临床特征关系,利用TCGA数据库和KEGG通路富集分析预测hsa-miR-653-5p的潜在分子生物学功能,构建hsa-miR-653-5p过表达及低表达细胞株行transwell实验验证hsa-miR-653-5p在胃癌细胞中的生物学功能;根据miRNA靶基因数据库及TCGA数据库来预测和筛选hsa-miR-653-5p的靶基因,通过Western blot检测转染前后胃癌细胞内PTEN蛋白表达水平的变化,并采用双荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-653-5p与靶基因PTEN的相互作用。结果 hsa-miR-653-5p在胃腺癌组织中的表达水平显著高于正常胃组织,hsa-miR-653-5p高表达的胃腺癌患者具有更差的生存率,hsa-miR-653-5p的表达水平与淋巴结数量呈正相关;通路富集分析表明hsa-miR-653-5p可能参与了粘附连接、粘着斑、胃癌、磷脂酰肌醇信号系统的生物过程和途径;transwell实验证实hsa-miR-653-5p促进胃癌细胞BGC823和SGC7901的迁移;hsa-miR-653-5p直接靶向并负调控PTEN促进胃癌的发生。结论 hsa-miR-653-5p在胃腺癌组织中表达上调并与胃癌患者预后呈负相关,hsa-miR-653-5p可能通过负调控抑癌基因PTEN促进胃癌细胞的迁移。

DDX39及PODXL蛋白在胃癌中的表达及与病理特征的统计分析

目的分析胃癌组织中DDX39及PODXL蛋白的表达情况,并探讨DDX39及PODXL表达与病理特征的相关性。方法回顾性分析65例行手术治疗的胃癌患者的临床资料,以术中采集的胃癌组织为胃癌组,以术中采集的癌旁正常组织为癌旁组。对比两组DDX39及PODXL蛋白表达阳性率,分析两组DDX39及PODXL在组织中H-SCORE评分差异;同时探讨DDX39及PODXL蛋白表达情况与临床病理特征的相关性。结果胃癌组DDX39及PODXL蛋白表达阳性率高于癌旁组(P<0.05),胃癌组DDX39及PODXL在组织中H-SCORE评分高于癌旁组(P<0.05)。同时,DDX39高表达组低分化者、TNM分期Ⅲ级及以上者高于低表达组(P<0.05),PODXL高表达组低分化者、TNM分期Ⅲ级及以上者高于低表达组(P<0.05)。而胃癌组织中DDX39及DPODXL表达与分化程度呈负相关、与TNM分期呈正相关(P<0.05)。结论胃癌组织中DDX39及PODXL蛋白表达明显升高,且其表达程度与分化程度呈负相关、与TNM分期呈正相关。

PNPLA3在实验性非酒精性脂肪性肝病中的表达及其CpG岛甲基化状态的研究

目的:探讨PNPLA3在非酒精性脂肪性肝病中的表达水平及其Cp G岛甲基化状态,探讨PNPLA3在NAFLD发生、发展中的作用。方法:1.采用10μg/m L的油酸作用于人正常肝细胞株L02建立脂肪肝细胞模型,72 h后经油红O染色,观察正常组、脂肪肝模型组及给药组细胞内脂滴形成情况,并用荧光定量PCR检测PNPLA3在三组肝细胞中的表达情况。2.采用专用DNA提取试剂盒分别提取正常组、脂肪肝模型组、给药组细胞中DNA,经亚硫酸转化后行PCR扩增目的基因,并用焦磷酸测序方法检测不同组PNPLA3 Cp G岛中甲基化水平,探讨其在非酒精性脂肪肝中的作用。结果:1、脂肪肝模型组肝细胞PNPLA3 m RNA的表达高于正常组,经姜黄素给药后,其表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。2、在PNPLA3启动子区6个检测位点中,脂肪肝组位点2甲基化水平高于正常组,姜黄素给药后甲基化水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05),在其余各检测位点中甲基化水平无差异。结论:1、油红O染色后,脂肪肝模型组细胞内发现有大量红色脂滴积聚,而正常组基本上未见脂滴,姜黄素给药组脂滴较模型组减少,表明用10μg/m L的油酸诱导能成功建立体外肝细胞模型。2、PNPLA3 m RNA在肝细胞中高表达及其启动子区甲基化状态异常参与非酒精性脂肪肝发病。3、抑制肝脏PNPLA3活性或降低肝细胞PNPLA3 m RNA的表达水平可能是今后治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一个新的治疗方法。

癔球症患者临床精神心理学特征及少商穴经皮电刺激治疗的疗效评价

目的探讨癔球症患者临床精神心理学特征和经皮穴位电刺激(TEAS)少商穴治疗癔球症的疗效。方法选取2017年9月至2019年6月于广州市第一人民医院南沙医院、广东省第二人民医院、贵州医科大学附属医院耳鼻喉科及消化内科门诊就诊的60例癔球症患者,按随机数字表法分为对照组(n=30)和少商穴组(n=30),采用适宜强度的电流刺激少商穴组患者,每天2次,每次30 min;采用适宜强度的电流刺激对照组患者少商穴位旁1~2 cm的非经络体表位置,每天2次,每次30 min,疗程均为4周。采用癔球症症状评分(GETS)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)及匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)对患者进行治疗前和治疗4周后的疗效评估。结果60例癔球症患者中,发现60.00%(36/60)的患者伴发睡眠障碍,65.00%(39/60)的患者伴发焦虑,35.00%(21/60)的患者伴发抑郁。经4周治疗后,对照组GETS、PSQI、HAMA、HAMD评分[(16.37±4.94)分,(12.37±7.51)分,(9.80±6.19)分,(10.67±7.63)分]与治疗前[(20.50±5.26)分,(14.53±6.80)分,(12.63±6.53)分,(12.60±8.43)分]比较,均差异有统计学意义(t=3.98,3.28,4.59,2.28;均P<0.05);少商穴组治疗后GETS、PSQI、HAMA、HAMD评分[(12.43±3.79)分,(8.50±6.76)分,(9.07±6.52)分,(8.47±6.72)分]与治疗前比较[(22.27±5.16)分,(13.43±7.30)分,(15.33±6.51)分,(13.97±4.99)分],均差异有统计学意义(t=8.44,6.93,7.49,5.77;均P<0.05);少商穴组各评分的下降程度ΔGETS、ΔPSQI、ΔHAMA、ΔHAMD[(6.49±6.38)分、(3.44±3.85)分、(4.60±4.59)分、(3.47±5.22)分]大于对照组[(2.93±4.04)分,(2.17±3.62)分,(2.83±3.38)分,(1.93±4.11)分],均差异有统计学意义(t=5.04,2.80,3.30,2.94;均P<0.05)。同时,少商穴组较对照组GETS评分[66.67%(20/30),20.00%(6/30)]、PSQI评分[63.33%(19/30),23.33%(7/30)]、HAMA评分[66.67%(20/30),30.00%(9/30)]、HAMD评分[60.00%(18/30),26.67%(8/30)]治疗的有效率高,均差异有统计学意义(χ2=13.30,9.77,7.28,6.79;均P<0.05)。结论癔球症患者多伴有睡眠障碍、焦虑状态和抑郁状态,少商穴TEAS治疗可有效改善癔球症患者的症状、睡眠障碍、焦虑和抑郁状态。