基于抗原表位分析的人乳头瘤病毒16L1壳蛋白基因克隆及表达纯化

目的：选择人乳头瘤病毒（HPV）16L1抗原性最强的一段抗原表位编码区,构建原核表达载体并利用大肠杆菌表达抗原蛋白,为HPV疫苗的研究及宫颈癌的诊断奠定基础。方法：借助DNAstar软件分析HPV16L1的CDS区,选择抗原性最强的一段抗原表位编码区,提取HPV16L1编码区的DNA。目的 DNA和p ET32a质粒分别进行双酶切,连接并转化DH5α大肠杆菌,筛选阳性克隆后转化BL21大肠杆菌,诱导产生HPV16L1重组蛋白,通过市售抗体对重组蛋白的抗原特异性进行鉴定。结果：利用DNAstar软件,选择了抗原表位较富集的碱基序列919~1314bp区段,按常规制备重组蛋白的方法成功制备HPV16L1重组蛋白。抗体鉴定表明,制备的重组蛋白抗原特异性良好。结论：有针对性地制备HPV16L1重组蛋白,可避免其他抗原表位的干扰。经鉴定,HPV16L1重组蛋白抗原特异性良好,将为HPV疫苗的研究及宫颈癌的诊断奠定基础。

阴道镜下宫颈活检和宫颈LEEP术后病理检查对宫颈上皮内瘤变的诊断价值

目的探讨阴道镜下宫颈活检和宫颈电环形切除术(LEEP)在宫颈上皮内瘤变(CIN)诊断中的应用价值,并分析宫颈LEEP术后病理升级的相关因素,旨在防止对宫颈高级别病变的漏诊。方法收集2013年07月至2016年12月1588例在本院宫颈疾病中心行阴道镜下宫颈活检并行宫颈LEEP术患者的临床资料,同时选取LEEP术后病理相比阴道镜下活检病理升级的患者临床资料,分析影响病理升级的相关因素。结果阴道镜下宫颈活检结果与LEEP术后病理结果总符合率为58.1%(923/1588),术后诊断降级431例(27.1%),术后诊断升级234例(14.7%),诊断升级中有宫颈癌59例(3.7%)。宫颈LEEP术后病理升级与患者年龄、宫颈液基细胞学(TCT)结果有关(P<0.05),与是否感染人乳头瘤病毒(HPV)无关(P>0.05)。结论阴道镜检查是辅助诊断CIN的有效方法,但单独的阴道镜下宫颈活检诊断CIN的准确性尚不够理想,LEEP术在一定程度上可以弥补阴道镜下宫颈活检的局限性,但临床上阴道镜下宫颈活检及LEEP术结合应用于诊断,还需要结合患者TCT检测的结果和年龄,在提高诊断的前提下避免过度诊疗。

新生儿大脑豆纹血管病变的相关因素分析

目的:探讨新生儿豆纹血管病变的相关因素,为减少豆纹血管病变相关神经系统后遗症提供依据。方法:选择广东省妇幼保健院收治的447例新生儿,对其行临床资料搜集、豆纹血管超声检查以及其他相关的检查。采用Logistic回归分析筛选豆纹血管病变的相关因素,P<0.05为差异有统计学意义。结果:单因素Logistic回归分析发现,先天性巨细胞病毒(HCMV)感染、新生儿窒息、先天性心脏病、妊娠期高血压与豆纹血管病变有关(P<0.05)。再对这些因素进行多因素Logistic回归分析显示,先天性HCMV感染、新生儿窒息、先天性心脏病、妊娠期高血压对豆纹血管病变的发生有重要作用(P<0.05)。结论:先天性HCMV感染、新生儿窒息,先天性心脏病、妊娠期高血压是新生儿豆纹血管病变的相关因素。提示临床医生应对存在这些相关因素的新生儿进行豆纹血管的超声筛查,早期干预。

发明创造让医疗服务更美好

医学,并非仅是指治愈疾病。尤其是对于产科医生而言,服务对象是产妇和新生儿,而非＂患者＂。赵少飞教授一直强调：＂‘急产妇之所急,助产妇之所需’是我们产科医务工作者的神圣职责之所在。＂

儿童肺炎支原体的耐药性与临床用药相关性研究

目的 探讨阿奇霉素序贯疗法治疗儿童肺炎支原体（MP）感染的有效性和安全性,并检验不规律使用阿奇霉素与MP耐药性是否相关.方法 以MP抗体滴度1∶320为诊断MP感染标准,收集2011年3月至2013年2月于广州医科大学附属广东省妇女儿童医院住院治疗的792例5～13岁合并发热或（和）咳嗽的MP感染患儿中,MP-IgM呈阳性的431例患儿为研究对象.按照其1年内大环内酯类抗菌药物应用和MP感染次数分别纳入实验组（n=217,半年内无MP感染和大环内酯类抗菌药物应用史）;对照组（n=214,1年内反复MP感染且不规律应用大环内酯类抗菌药物≥2次）.患儿入院当天于不同时间进行2次MP培养,对培养结果MP呈阳性者提取DNA进行23S rRNA V PCR产物合成与23S rRNA V区基因突变位点检测,并进行MP呈阳性者的9种抗菌药物的药敏性试验.对两组MP株的耐药性等进行比较.对大环内酯类抗菌药物敏感和23S rRNA V区无突变患儿进行阿奇霉素序贯疗法.于治疗2周及4周末再行MP培养,对阳性者分析23S rRNA V区基因位点突变情况.对实验组阿奇霉素敏感且23S rRNA V区测序无基因位点无突变的患儿进行阿奇霉序贯治疗,分别于治疗2周及4周时判断阿奇霉素序贯疗法治疗疗效.对于对照组214例反复MP感染患儿不规律应用大环内酯类抗菌药物频次与耐药性关系进行统计学比较.对两组患儿的肺外并发病及住院时间分别进行统计学比较（本研究遵循的程序符合广州医科大学附属广东省妇女儿童医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象监护人的知情同意,并与其签署临床研究知情同意书）.两组患儿年龄及性别等一般临床资料比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结果 本组患儿的MP感染率为54.4%（431/792）.对本组药敏实验结果MP-IgM呈阳性患儿咽拭子进行快速MP培养的阳性率为26.6%（115/431）.实验组与对照组MP株耐药率比较,差异有统计学意义（χ2=4.651,P=0.041）.对照组214例患儿1年内不规律大环内酯类药物应用频次与耐药率比较,不规律用药次数越多,耐药率越高,差异有统计学意义（χ2/χ2趋势值=22.056,21.932;P〈0.05）.实验组14例患儿的药敏实验结果显示阿奇霉素敏感且23S rRNA V区测序无基因位点无突变,对其进行阿奇霉序贯治疗2周后,咽拭子培养结果显示MP呈阳性为4例,根治率为71.42%（10/14）.对此4例进行药敏试验结果提示对阿奇霉素仍敏感,并对其进行23S rRNA V区测序发现无基因位点突变,继续阿奇霉素序贯治疗,至4周末时,实验组14例患儿的根治率为92.85%（13/14）.实验组14例MP药物敏感株与对照组37例MP耐药株患儿的肺外并发症发生率比较,实验组显著低于对照组,且差异有统计学意义（χ2=4.443,P〈0.05）.实验组患儿的住院时间显著短于对照组,且差异有统计学意义（χ2=7.305,P〈0.05）.结论 阿奇霉素序贯疗法治疗儿童MP感染安全有效,并不会诱导出耐药株,而不规律应用阿奇霉素可诱导耐药株,且耐药率与不规律应用的次数呈正相关.

超声、X线及MRI对不同分子亚型乳腺癌的诊断价值

目的:研究超声、X线及MRI对不同分子亚型乳腺癌的诊断价值。方法:对有完整影像学资料的232例乳腺癌患者进行回顾性分析,分别比较超声、X线及MRI对不同分子分型(管腔A型,管腔B型,HER2阳性,三阴性)浸润性乳腺癌的诊断符合率,所有影像学检查结果均采用BI-RADS分级。以BI-RADS分级4级和5级为阳性,0级-3级为阴性。采用SPSS 13.00进行统计学分析,计数资料采用卡方检验。结果:对各型乳腺癌,超声检查总的诊断符合率为92.2%,X线检查总的诊断符合率79.3%,MRI总的诊断符合率为98.3%。3种检查对乳腺癌的诊断符合率之间差异有统计学意义(χ2=48.158,P<0.001)。对LuminalA型乳腺癌,超声检查的诊断符合率为86.2%,X线检查的诊断符合率为82.8%,MRI的诊断符合率为96.6%;对LuminalB型乳腺癌,超声检查的诊断符合率为95.5%,X线检查的诊断符合率为68.2%,MRI的诊断符合率为97.7%;对HER2阳性乳腺癌,超声检查的诊断符合率为91.6%,X线检查的诊断符合率为91.6%,MRI的诊断符合率为100%;对三阴性乳腺癌,超声检查的诊断符合率为94.7%,X线检查的诊断符合率为84.2%,MRI的诊断符合率为100%。各分子亚型乳腺癌的超声检查诊断符合率之间差异无统计学意义(χ2=4.196,P=0.230);X线检查的诊断符合率各型间差异有统计学意义(χ2=12.084,P=0.007),X线检查对Luminal B型诊断符合率最低,对HER2阳性型诊断符合率最高;MRI对各型乳腺癌的诊断符合率之间差异无统计学意义(χ2=1.965,P=0.586)。结论:无论何种分子亚型乳腺癌,MRI诊断符合率最高,其次为超声检查,X线检查的诊断符合率最低。对各分子亚型乳腺癌,超声检查及MRI诊断符合率无显著差别,X线检查对LuminalB型乳腺癌诊断符合率最低,对HER2阳性乳腺癌诊断符合率最高。

子痫前期孕妇产后高血压发生风险及相关因素

目的：探讨子痫前期（ PE）孕妇产后高血压发生风险及其相关因素。方法采用前瞻性病例对照研究，于2008年1月至2012年6月入选PE孕妇809例（ PE组）和年龄、孕周相当的正常孕妇3421例（正常妊娠组）。纳入研究时登记一般资料，并检测糖脂代谢指标。2012年11月至2013年4月将研究对象统一召回，对其中651例PE患者和2684例正常孕妇进行随访，评估产后高血压发生情况，并检测产后糖脂代谢指标。采用二元logistic回归分析产后发生高血压的相关因素。结果 PE组产后高血压发生率高于正常妊娠组[17.2％（112/651）比1.1％（30/2684）， P＜0.01]；重度与轻度PE患者的产后高血压发生率差异无统计学意义[20.1％（58/289）比15.2％（55/362）， P＝0.103]。二元logistic回归分析显示，孕前体质指数（OR ＝1.379，95％CI：1.257～1.510，P ＜0.05）、产前收缩压（OR ＝1.025，95％CI：1.012～1.040，P ＜0.05）、产前甘油三酯（OR ＝1.002，95％CI：1.002～1.410，P＜0.05）、产前空腹血糖（OR＝1.733，95％CI：1.047～2.870，P＜0.05）、产后体质指数（OR ＝1.279，95％CI：1.199～1.363 P ＜0.05）、产后空腹胰岛素（OR ＝1.107，95％CI：1.055～1.162，P＜0.05）、产前产后收缩压差值（ OR＝1.024，95％CI：1.011～1.037，P＜0.05）、产前产后甘油三酯差值（OR＝1.26，95％CI：1.069～1.486，P＜0.01）、产前产后胰岛素抵抗指数差值（OR＝2.448，95％CI：1.330～4.500，P＜0.01）以及产前产后高密度脂蛋白胆固醇差值（OR＝1.699，95％CI：1.277～2.260，P＜0.05）是PE孕妇产后发生高血压的独立危险因素。结论 PE孕妇产后发生高血压的风险增高，孕期血压和糖脂代谢异常与产后高血压有关。

微滴式数字PCR技术用于检测产前诊断标本母体细胞污染的初步研究

目的 探讨微滴式数字PCR（DD-PCR）技术检测产前诊断标本母体细胞污染的临床应用价值.方法 2015年10月至2016年12月间以40例因夫妇双方均为地中海贫血基因βIVS-Ⅱ-654/βN杂合携带者、在广州医科大学附属广东省妇女儿童医院行侵入性产前诊断的孕妇作为观察样本.通过设计特异性引物、探针,建立母体细胞污染程度梯度50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.5625%模型,采用DD-PCR技术及短串联重复序列的荧光定量PCR技术检测产前诊断标本母体细胞污染,分别评估两种检测方法的敏感性;并分别检测40组产前诊断标本,以比较DD-PCR技术与荧光定量PCR技术检测母体细胞污染的准确性.结果 DD-PCR技术可以检测到产前诊断标本中低至1.5625%的母体细胞污染,检测结果与母体细胞污染程度梯度改变基本相符,而荧光定量PCR技术只能在母体细胞污染≥6.25%时才提示产前诊断标本存在400 bp的母源性特有峰.DD-PCR技术共检测到6例（15%,6/40）产前诊断标本存在母体细胞污染,荧光定量PCR技术只检测到3例母体细胞污染的产前诊断标本（7.5%,3/40）,两种检测方法比较,DD-PCR技术的准确性更高（P=0.002）.结论 DD-PCR技术可对产前诊断标本进行母体细胞污染精确定量,并具有较高的敏感性,具有良好的临床应用价值.

肺炎支原体的耐药机制及治疗

肺炎支原体(MP)为常见的儿童呼吸道感染病原体之一。随着大环内酯类抗菌药物的广泛应用,耐大环内酯抗菌药物菌(MRMP)呈上升趋势,MRMP感染人群已向成年人蔓延。MRMP较敏感菌株导致感染个体的临床症状持续时间长,肺外并发症发病率高。笔者拟就肺炎支原体流行病学、耐药机制及MRMP的治疗,综述如下。

孕妇人巨细胞病毒感染与居住环境的关系

目的研究孕妇人巨细胞病毒（HCMV）感染与居住环境的关系。方法选择2013年12月至2014年4月广州医科大学附属广东省妇儿医院收治的360例孕妇的临床病历资料为研究对象。首先按照孕妇孕期家中有、无儿童,将其分为家中有儿童亚组（n=129）和家中无儿童亚组（n=231）;其次,又按照居住拥挤程度,将其分为居住拥挤程度高亚组（每间房〉1个人,n=143）和居住拥挤程度低亚组（每间房≤1个人,n=217）。对所有孕妇进行尿液测定及纸质问卷调查。《孕期HCMV感染问卷调表》在参照参考文献的基础上进行改良,其主要内容包括：孕期家中是否有小孩、孕期居住拥挤程度。采用SYBR GreenⅠ嵌合荧光法进行实时聚合酶链式反应（RT-PCR）测定所有孕妇尿液HCMV-DNA含量。本研究遵循的程序符合广州医科大学附属广东省妇儿医院人体试验委员会制定的伦理学标准,对尿液的收取获得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书。结果 1本研究共计发放问卷360份,有效回收问卷360份。有效问卷回收率为100.0%。2本研究纳入的360例孕妇中,HCMV感染总数为12例,感染率为3.3%。孕期家中有儿童亚组较孕期家中无儿童亚组的HCMV感染率高（6.9%vs 1.3%）,并且差异有统计学意义（χ^2=8.282,P=0.004）。居住拥挤程度高亚组较居住拥挤程度低亚组的HCMV感染率高（7.0%vs 0.9%）,并且差异有统计学意义（χ^2=9.861,P=0.002）。结论孕期家中有儿童、居住拥挤程度高是孕妇HCMV感染的高危因素。

新生儿型Bartter综合征一例

患儿男,第2胎第2产,胎龄29周,因＂母亲瘢痕子宫、早产临产＂行剖宫产分娩,出生体重1620 g。生后无窒息,羊水量10 000 ml。生后30 min因＂早产儿、新生儿呼吸窘迫综合征＂收入院。患儿母亲妊娠26周时发现羊水过多。患儿有一胞姐2岁,体健。入院体格检查：血压61/32 mmHg,心率130次/min,体重1620 g（P50）,身长40 cm（P50）。