PRDX3在前列腺癌组织中表达的临床意义

目的研究硫氧还蛋白依赖的过氧化物还原酶(PRDX3)在前列腺癌组织中的表达情况及其临床意义。方法应用过氧化氢标记的链霉素抗生物素蛋白-过氧化氢酶法(SP法)检测147例前列腺癌组织和28例良性前列腺增生组织中PRDX3的表达情况,并对PRDX3与前列腺癌临床关系进行统计分析。结果 PRDX3在前列腺癌中呈高表达,在良性前列腺增生症和前列腺癌中的表达有差异(P<0.001)。结论 PRDX3在前列腺癌组织中的表达比良性前列腺增生组织中高,有可能成为一种鉴别前列腺癌与良性前列腺增生的新的肿瘤标记物。

钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶激酶2在前列腺癌及癌旁组织中的表达及其临床意义

目的研究CAMKK2在前列腺癌及癌旁组织中的表达,分析其表达与临床病理数据的关系。方法通过实时荧光定量PCR技术检测CAMKK2的mRNA水平在前列腺癌及癌旁组织中的表达情况,通过免疫印迹及免疫组化技术检测CAMKK2的蛋白水平在两种组织中的表达,分析CAMKK2的表达水平与前列腺癌相关临床病理特征及预后的关系。结果前列腺癌组织中的CAMKK2在mRNA及蛋白水平上均较癌旁组织中上调表达,CAMKK2的表达与血清PSA水平、是否转移及是否生化复发有关,CAMKK2的表达高低与无生化复发生存率相关,CAMKK2是生化复发的独立危险预测因素。结论 CAMKK2在前列腺癌组织中的表达增加,可能提示患者的预后情况,并可作为前列腺癌新的生物标记物。

GPD1L在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的分析甘油磷酸脱氢酶1样抗原(GPD1L)在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义。方法选用包含79例肾透明细胞癌及10例肾脏正常组织的组织芯片,使用免疫组织化学染色法(免疫组化)检测GPD1L蛋白的表达情况,并运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集包含GPD1L mRNA资料的肾透明细胞癌患者相关资料。观察组织芯片中肾脏正常组织与肾透明细胞癌组织GPD1L蛋白的表达部位及表达强度,分析TCGA中肾脏正常组织与肾透明细胞癌组织GPD1L基因的表达水平差异。按基因芯片或TCGA中肾透明细胞癌GPD1L蛋白或mRNA表达情况分为高表达组与低表达组,分析肾透明细胞癌患者GDP1L蛋白或mRNA表达与临床特征及总体生存期(OS)的关系。应用单因素和多因素Cox比例风险回归分析肾透明细胞癌患者OS的影响因素。结果组织芯片中,GPD1L蛋白阳性染色呈棕黄色或褐色,在肾透明癌细胞与肾脏正常组织中主要表达于肾小管上皮的细胞胞质中,GPD1L蛋白在肾透明细胞癌组织表达强度低于其在正常肾脏组织中的表达强度(P<0.001),GPD1L蛋白低表达组中病理分级高和临床分期晚者比例高于高表达组(P均<0.05)。TCGA中,肾透明细胞癌组织GPD1L mRNA表达水平低于肾脏正常组织(P<0.05),GPD1L mRNA低表达组中女性、病理分级高、临床分期晚、有转移、死亡者比例均高于高表达者(P均<0.05), GPD1L mRNA低表达组OS低于高表达组(P<0.001)。Cox比例风险回归分析显示,GPD1L mRNA表达水平、年龄、肿瘤转移为肾透明细胞癌OS的影响因素(P均<0.05)。结论 GPD1L的表达与肾透明细胞癌密切相关,可考虑作为临床诊断及预后的分子标志物。

IMPDH2蛋白与前列腺癌临床相关性分析

目的研究IMPDH2在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,并分析其表达水平与临床病理特征的关系。方法收集临床手术切除的前列腺癌组织和前列腺增生,或者穿刺活检组织,所有组织均由病理学确诊。排除已做手术去势的前列腺组织。通过Western Blot检测IMPDH2在前列腺癌、前列腺增生组织中IMPDH2蛋白的表达情况;免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生标本中IMPDH2的表达。分析IMPDH2基因的表达水平与临床病理特征的关系。结果前列腺癌患者组织中IMPDH2蛋白表达显著上调,IMPDH2蛋白表达上调与肿瘤临床分期、Gleason评分、转移相关。结论 IMPDH2在前列腺癌组织中表达上调,前列腺组织中检测IMPDH2可能有助于判断前列腺癌分化程度并评估预后。

精索静脉曲张不育患者氧化应激水平和精子DNA完整性及精液参数的相关性分析

目的:分析精索静脉曲张(VC)不育患者氧化应激同DNA完整性及精液参数的关系。方法:采用前瞻性研究,纳入98例患者,根据活性氧水平(ROS)将VC不育患者分为ROS低水平组(54例)及高水平组(44例),分析两组精子DNA碎片指数(DFI)、精子活力、形态等参数的差异,并分析它们之间的相关性。结果:ROS高水平组DFI显著高于ROS低水平组[(34.49±6.05)%vs(27.38±8.10)%,P=0.039]。与ROS低水平组比较,ROS高水平组精子活力[(25.21±18.22)%vs(36.16±22.83)%,P=0.017]、前向运动精子百分率[(16.34±9.22)%vs(23.34±11.53)%,P=0.041]、曲线速率[(20.62±4.38)%vs(27.03±6.21)%,P=0.013]及直线性率[(18.30±7.93)%vs(29.75±8.24)%,P=0.024]均显著降低,而精液白细胞数显著升高[(0.86±0.41)×106/ml vs(0.65±0.15)×106/ml,P=0.022]。Spearman相关性分析表明ROS水平同精液白细胞数(r=0.41,P<0.01)及DFI(r=0.21,P=0.006)呈显著正相关,同曲线速率(r=-0.24,P=0.017)、直线性率(r=-0.24,P=0.021)、精子活力(r=-0.31,P=0.002)及前向运动精子百分率(r=-0.41,P=0.012)呈显著负相关。DFI同精子活力(r=-0.29,P<0.01)、前向运动精子百分率(r=-0.34,P<0.01)呈显著负相关。结论:精浆ROS水平同VC不育患者DFI显著正相关。氧化应激及DNA完整性可影响患者的精子参数。

前列腺癌10个显著差异表达基因筛查研究

目的：筛查验证前列腺癌特异性表达基因。方法：运用基因芯片筛查出前列腺癌组织和癌旁组织中差异表达的基因,再通过PCR验证。结果：从芯片结果中发现,总共有1 444个基因（差异倍数≥1.5;P≤0.05）为差异表达基因。其中,前列腺癌与对比配对的良性组织有769个上调（53%）和675个下调（47%）。差异基因中有40%的差异倍数为1.5～2倍,包括396个上调和182个下调基因。另外308个上调基因和334个下调基因的差异倍数为2～5倍;46个上调基因和78个下调基因的差异倍数为5～10倍;19个上调基因和81个下调基因的差异倍数为10倍以上。取其中上调和下调最明显的各15个基因做进一步荧光定量PCR（qRT-PCR）鉴定,结果显示了大多数基因都有芯片结果相似的基因片段,芯片结果和qRT-PCR结果用皮尔森相关性分析结果为0.83,并获得10个差异显著的基因。结论：芯片分析出来的前列腺癌和良性组织间差异基因是可靠的,qRT-PCR验证获得的这10个差异基因可能成为新的肿瘤标记物和特征性肿瘤鉴定分子。

脂多糖对前列腺癌细胞LNCaP糖酵解的影响

目的研究脂多糖(LPS)对前列腺癌细胞糖代谢的影响。方法通过LPS处理前列腺癌细胞LNCa P,收集细胞样品以及细胞培养上清液,利用RT-qPCR、Western blot以及乳酸测定实验,观察LPS对前列腺癌细胞糖代谢的影响。结果经过LPS处理的前列腺癌细胞LNCaP、LDHA在mRNA表达(5.59±0.13)、蛋白表达水平(2.46±0.27)都有明显升高(P<0.05),同时促进乳酸生成(P<0.01),而LDHB的mRNA表达水平及蛋白表达量分别下降(59±5)%、(55±17)%(P<0.05)。结论 LPS影响前列腺癌细胞的温伯格效应,从而影响了细胞的糖代谢相关基因LDHA、LDHB的表达。

NEK2对前列腺癌细胞增殖的影响

目的探讨中心体相关激酶2(NEK2)在良性前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞中的表达差异,及NEK2对前列腺癌细胞增殖的影响。方法运用荧光实时定量PCR检测NEK2在良性前列腺上皮细胞Pr EC和前列腺癌细胞PC3、LNCa P和DU145中的表达情况,通过短发夹RNAs(shRNA)抑制LNCa P细胞株中内源性NEK2的表达,再利用细胞增殖实验及裸鼠肿瘤种植检测LNCa P增殖情况。结果前列腺癌细胞PC3、LNCa P和DU145中的NEK2表达水平均比良性前列腺上皮细胞Pr EC增加(P均<0.01)。shRNA技术构建的NEK2表达在LNCa P细胞中下调,NEK2 mRNA和蛋白表达水平均下降(P均<0.01)。细胞增殖实验显示,培养至72 h时sh NEK2的细胞增殖率明显低于注射无关序列的LNCa P(Scrambled)细胞。体内试验显示,sh NEK2组的移植瘤体积明显小于Scrambled细胞,sh NEK2组移植瘤的NEK2蛋白表达比Scrambled组下调(P<0.01)。结论 NEK2的过度表达能促进前列腺癌细胞的增殖,NEK2有望作为前列腺癌治疗的潜在生物学标志物。

前列腺癌组织中TRIB1基因和蛋白异常表达与患者不良预后的相关性

目的研究Tribbles同源蛋白1(TRIB1)在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,并分析其表达水平与患者临床特征及预后的关系。方法在公共基因芯片数据库(GEO)中下载前列腺样本中的相关基因芯片数据,分析TRIB1在前列腺样本中mRNA的表达水平。收集临床手术切除或者穿刺活检的前列腺癌和前列腺增生组织,通过免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生组织中TRIB1蛋白的表达。分析TRIB1蛋白和基因的表达水平与患者临床特征及预后的关系。结果前列腺癌患者组织中TRIB1蛋白表达显著上调(P<0.01),TRIB1蛋白表达上调与前列腺癌Gleason评分(P<0.01)、病理分期(P=0.02)相关,基因芯片数据提示TRIB1基因表达上调与前列腺癌Gleason评分(P=0.02)、病理分期(P=0.01)、无生化复发生存率(BCR-free survival)(P=0.047)相关。结论 TRIB1在前列腺癌组织中表达上调,前列腺组织中检测TRIB1可能有助于判断前列腺癌分化程度并评估预后。

B细胞淋巴瘤因子9的表达与前列腺癌临床病理参数及患者生存的关系

目的 探讨B细胞淋巴瘤因子9（BCL9）作为Wnt信号通路的核内元件,它在β-链蛋白（β-catenin）的转录中的重要作用.观察BCL9在前列腺癌细胞中的表达、其参与的发病进程及临床预后的作用.方法 采用免疫组化检测98例前列腺癌患者及20例良性前列腺增生患者BCL9的表达水平.χ^2检验分析BCL9表达同前列腺癌患者临床病理参数的关系.Kaplan-Meier生存曲线及log-rank统计方法计算BCL9表达同前列腺癌生化复发发病进程的关系.Cox多因素回归模型检测BCL9表达预测前列腺癌生化复发的危险度情况.结果 BCL9在前列腺癌组中阳性率为53.1％（52/98）,在良性组织的阳性率为25.0％ （5/20）,两者差异有统计学意义（P =0.022）.BCL9表达同前列腺癌Gleason评分（P=0.016）显著相关,其高表达与无生化复发生存率显著负相关（P =0.037）,但不能独立预测前列腺癌生化复发的危险度（危险比1.73,P=0.384）.结论 BCL9的上调表达与前列腺癌患者的早期诊断和恶性程度相关.

成髓细胞瘤转录因子第2亚型在前列腺组织的表达及其临床意义

目的 观察成髓细胞瘤转录因子第2亚型（MYBL2）在前列腺组织中的表达并探讨其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测80例前列腺组织芯片中MYBL2的蛋白表达水平,结合泰勒（Taylor）和癌症基因组图谱（TCGA）数据库,分析MYBL2表达量和患者临床病理特征和预后的关系.结果 MYBL2在前列腺癌组织中的表达量（4.22 ±2.02）明显高于癌旁前列腺组织（2.43±1.61,P =0.001）.前列腺癌组织中MYBL2高表达与高Gleason评分相关（Gleason评分＜8为3.50±1.78,Gleason评分≥8为5.37±1.89,P=0.001）,差异有统计学意义.Taylor和TCGA数据库分析发现,相对于癌旁组织（7.39 ±0.28）,MYBL2的mRNA表达量在前列腺癌组织中显著上调（7.58 ±0.30,P=0.002）,MYBL2表达量上调与高Gleason评分（P=0.001）和肿瘤转移（P=0.000）相关.Kaplan-Meier生存分析结果显示,MYBL2高表达的前列腺癌患者与MYBL2低表达患者比较,其无生化复发生存时间缩短,两者比较差异有统计学意义（Taylor数据库：P=0.038;TCGA数据库：P=0.001）.结论 MYBL2在前列腺癌组织中表达显著上调,与肿瘤发生进展及患者不良临床病理特征明显相关.

丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1上调表达对前列腺癌发病进程及临床预后的指导作用

目的 探讨丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1（ASF/SF2）在前列腺癌的作用及其可能参与的致癌分子机制.方法 免疫组织化学法检测102例前列腺癌患者及20例前列腺良性组织ASF/SF2的表达水平.x^2检验分析ASF/SF2表达同前列腺癌患者临床病理特征的相关性.Kaplan-Meier及Cox多因素模型检测ASF/SF2表达同前列腺癌生化复发的关系.结果 ASF/SF2在前列腺癌组中阳性率为51.0％ （52/102）,在前列腺良性组织的阳性率为20.0％（4/20）,两者差异有统计学意义（P＜0.05）.ASF/SF2表达同临床病理分期显著相关（P＜0.05）,其高表达与无生化复发生存率呈显著负相关（P＜0.05）,Cox多因素分析表明ASF/SF2可独立预测前列腺癌生化复发的危险度（风险比=2.943,P＜0.05）.结论 ASF/SF2高表达同前列腺癌的发病进程密切相关,ASF/SF2的致癌作用也许同哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路有关.

基于高通量数据集的前列腺癌诊断模型的构建

目的 构建基于高通量数据集数据的前列腺癌诊断模型并验证其性能.方法 筛选从GEO下载的Taylor_prostate数据集,并用遗传算法进行进一步筛选,最终运用人工神经网络算法对数据进行分析,建立诊断模型.用10倍交叉验证法对模型进行内部验证,下载两个Grasso数据集(GPL6480和GPL6848)进行外部独立验证.结果 经过两次筛选共获得5个基因ACADL、ACTG2、CACNA2D1、PCP4和SPARCL1.该模型的ROC曲线下面积为94.62.10倍交叉验证和外部独立验证的结果均良好.结论 基于高通量数据集构建的前列腺癌诊断模型性能良好.

锌指含髓样神经变形表皮生长因子结构域第8亚型作为糖皮质激素受体下游基因在前列腺癌组织的表达及临床意义

目的 验证锌指含髓样神经变形表皮生长因子结构域第8亚型（ZMYND8）与糖皮质激素受体（GR）之间调控关系,探讨ZMYND8表达量与前列腺癌各临床病理特征之间的关系.方法通过软件预测及在敲除GR基因的前列腺癌细胞PC3中用Western blot实验方法检测ZMYND8表达量,分析GR与ZMYND8之间的关系,并在80例前列腺癌及非癌组织的组织芯片中使用免疫组织化学的方法,对ZMYND8蛋白表达量与前列腺癌各病理特征之间的关系进行分析.结果 ZMYND8 基因受GR基因调控,ZMYND8在癌组织及转移癌中表达上调（免疫组织化学评分：非癌组织为5.700±2.054,癌组织为7.340±2.163,P=0.001,转移癌组织为6.710±2.369,非转移癌组织为8.110±1.595,P=0.028）,差异有统计学意义.结论 ZMYND8的表达受上游基因GR的调控,ZMYND8基因在前列腺癌临床上表现为促癌基因.

基于CRISPR/Cas9的雄激素受体基因敲除的实验研究

目的探讨细胞水平的雄激素受体（AR）基因敲除方法，为前列腺疾病AR通路的功能研究提供细胞株材料。方法通过在线软件设计针对AR的sgRNA靶向序列，将设计好的sgRNA靶序列克隆到PX330载体中并测序验证。将克隆好的CRISPR-AR载体转染T293细胞，提取DNA，PCR产物酶切和测序鉴定基因敲除效率。结果 CRISPR-AR载体测序证明质粒载体构建成功，293T细胞转染和酶切鉴定实验证明CRISPR-AR载体具有95.3%的敲除效率。结论基于CRISPR/Cas9技术构建的CRISPR-AR载体可用于细胞的AR基因敲除，可进一步构建AR基因敲除的细胞株。

双特异性磷酸酶5基因在良性前列腺增生症与前列腺癌中的表达及临床意义

目的前期研究发现双特异性磷酸酶5(DUSP5)基因在良性前列腺组织和前列腺癌组织中存在差异性表达,但DUSP5基因的表达与前列腺癌疾病的临床病理相关性尚无统计研究。本次研究检测DUSP5在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,分析其表达水平与临床病理特征的关系。方法通过RT-qPCR检测DUSP5在前列腺癌、前列腺增生组织中DUSP5基因的表达情况;免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生标本中DUSP5蛋白的表达。分析DUSP5的表达水平与临床病理特征的关系。结果前列腺癌患者组织中DUSP5基因表达显著下调,DUSP5蛋白表达下调与肿瘤临床分期(≤T2期vs.>T2期:6.43±0.96 vs.5.10±0.70,P<0.01)、Gleason评分(GS<7 vs.GS≥7:6.37±0.78 vs.5.04±0.57,P<0.01)显著相关。结论 DUSP5蛋白在前列腺癌组织中表达下调,检测DUSP5表达水平可协助判断前列腺癌分化程度并评估预后。

趋化因子CCL18对前列腺癌细胞迁移力、侵袭力和细胞增殖影响的研究

目的研究趋化因子CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力和细胞增殖的影响。方法通过培养前列腺肿瘤细胞LNCa P、DU145,并加入趋化因子蛋白CCL18,利用Transwell实验、Wound Healing实验和CCK8试剂盒来分别检测CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力及对细胞增殖的影响。结果经过趋化因子蛋白CCL18处理的前列腺肿瘤细胞,在Transwell实验中,肿瘤细胞跨膜细胞数显著增加(LNCa P:对照vs.CCL18=202.0±18.5 vs.279.7±27.6;DU145:对照vs.CCL18=60.3±6.5 vs.91.0±9.5);Wound Healing实验中,肿瘤细胞发生迁移的数量明显增加(LNCa P:对照vs.CCL18=127.3±14.3 vs.214.4±30.9;DU145:对照vs.CCL18=68.6±15.8 vs.129.4±12.0);细胞生长实验结果揭示肿瘤细胞增殖速度也显著加快。结论趋化因子蛋白CCL18能促进前列腺肿瘤细胞LNCa P、DU145的侵袭力、转移力,并加快前列腺肿瘤细胞的生长速度。

前列腺癌特异性基因的功能和通路分析

目的 探讨前列腺癌特异性基因的相关功能和通路.方法 收集前列腺癌组织标本进行基因芯片分析,从结果中取差异倍数≥1.5并P≤0.05的基因通过特异性通路分析（IPA）,鉴别所有差异表达基因的功能和通路.结果 由芯片数据得到769个上调基因和675个下调基因,得到基因功能差异最大的10个通路.结论 本研究的数据提供了前列腺癌的候选基因,为寻找新的肿瘤生物学指标、风险因素和治疗靶点提供帮助.

谷胱甘肽硫基转移酶μ-3在前列腺癌中的表达及意义

目的：探讨谷胱甘肽硫基转移酶μ-3（ glutathione S-transferase mu 3，GSTM3）在前列腺癌中的表达及意义。方法2012年9月至2013年9月应用二维荧光差异凝胶电泳技术筛选前列腺癌标本中的差异蛋白，并利用质谱分析验证前期表达谱基因芯片结果获得的GSTM3。选取28例行根治性前列腺切除术患者的病理标本。患者年龄＜60岁22例，≥60岁6例；PSA 水平＜4μg/L 5例，≥4μg/L 23例；Gleason评分＜7分26例，≥7分2例；TNM分期＜T2a期18例，≥T2a期10例。采用实时荧光定量PCR法检测前列腺癌组织及其癌旁组织中GSTM3的表达情况，分析GSTM3与患者临床病理参数的相关性。结果二维荧光差异凝胶电泳获得前列腺癌与癌旁组织的双向凝胶电泳图谱，结果显示GSTM3为差异表达的蛋白，GSTM3蛋白在前列腺癌组织中表达下调，与癌旁组织比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。实时荧光定量PCR法检测结果显示，GSTM3在癌旁组织中的表达（8．12±0．51）显著高于癌组织（7．18±0．54），差异有统计学意义（P＜0．05）。 GSTM3的表达与患者的年龄、PSA水平、Gleason评分、TNM分期均无显著相关性（P＞0．05），在不同PSA水平分组中GSTM3表达差异无统计学意义（P＞0．05）。结论与癌旁组织比较，GSTM3在前列腺癌组织中表达下调，但GSTM3的表达与前列腺癌的恶性程度无关。

微RNA-374b与前列腺癌恶性程度及生化复发的分析

目的检测前列腺癌组织及良性前列腺组织中微RNA-374b表达，探讨其与前列腺癌恶性程度及生化复发的关系。方法收集广州医科大学附属广州市第一人民医院、中山大学附属第二医院、广州市红十字会医院2000年至2010年泌尿外科103例前列腺癌手术后的样本和25例前列腺增生手术获取的前列腺良性组织样本。采用原位杂交技术检测微RNA．374b在前列腺癌组织及良性前列腺组织中表达，并对微RNA．374b表达与前列腺癌患者年龄、术前PSA、临床分期、病理分期、Gleason评分、是否生化复发、是否转移及是否死亡的关系进行统计分析。根据微RNA．374b的相对表达量，以中位数（M=4．50）将其分为低表达组及高表达组，运用Kaplan．meier方法及Log．rank检验进行总体生存率和无生化复发生存率分析。结果微RNA．374b在前列腺癌的表达低于良性组织（3．97±1．17比4．70±0．71，P〈0．05）。微RNA．374b的表达量同Gleason评分、病理分期、转移、是否生存及生化复发有关（均P〈0．05），同年龄、PSA水平及临床分期无关（均P〉0．05）。微RNA．374b低表达组无生化复发生存率低于高表达组（P〈0．05），高表达组的生化复发时间高于低表达组（P〈0．05）。微RNA．374b表达与总体生存率无关。结论微RNA．374b的低表达与前列腺癌恶性程度有关，有望成为评价前列腺癌恶性程度及生化复发的指标。