原蛋白转变酶2基因表达对肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨原蛋白转变酶2基因(proprotein convertase,PC2)对不同肿瘤细胞增殖的影响,为肿瘤治疗提供新的研究方向。方法 PC2重组质粒pcDNA3.1-PC2单独或与其分子伴侣7B2重组质粒pcDNA3.1-7B2混合转染小鼠乳腺癌细胞4T1、人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-7和小鼠肥大细胞瘤细胞P815,以pcDNA3.1(+)空载体为对照,通过PC2酶活性测定法、Western blot检测野生型和转染后的4T1细胞的PC2酶活性和表达,MTT法检测肿瘤细胞增殖率的变化。通过DAPI染色检测转基因细胞和TUNEL染色检测荷瘤模型瘤组织中癌细胞的凋亡情况。结果 1∶1比例的PC2∶7B2共转染显示了在4T1细胞中的最高PC2活性和表达,在荷瘤小鼠瘤组织中显示明显的凋亡现象。该共转染对4T1、HepG2、B16、A549和MCF-7细胞半数抑制剂量分别为128.3、97.8、137.3、51.5、214.3μg/m L,呈剂量依赖性,P815细胞的抑制率与基因剂量之间没有关系。结论 PC2上调可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,呈现凋亡现象。

磷酸甘油酸变位酶1在生精功能障碍睾丸组织中的表达及意义

目的:检测磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在不同程度生精功能不良睾丸组织中的表达情况,并分析PGAM1表达与临床病理参数的关系。方法:收集生精功能正常、轻度生精功能不良、重度生精功能不良、唯支持细胞综合征患者睾丸组织标本,统计性激素六项结果,采用免疫组化、qRT-PCR检测PGAM1在不同程度生精功能不良睾丸组织中的表达情况。结果:免疫组化结果显示PGAM1的高表达率在生精功能正常、轻度生精功能不良、重度生精功能不良及唯支持细胞综合征患者各组间比较,差异具有统计学意义(P=0.000),PGAM1表达与患者的年龄、睾丸体积、LH及T表达均无明显相关(P>0.05);而PGAM1低表达患者FSH水平高于PGAM1高表达患者(P=0.002 3);qRT-PCR结果提示PGAM1 mRNA在生精功能正常及唯支持细胞综合征患者睾丸组织中表达水平明显高于重度生精不良睾丸组织中的表达,差异具有统计学意义(P=0.000),PGAM1 mRNA表达与患者的年龄、睾丸体积、LH及T表达均无明显相关(P>0.05),而在FSH≤12 mIU/mL患者睾丸组织中的表达明显高于FSH>12 mIU/mL患者(P=0.043 0)。结论:PGAM1的表达与睾丸生精功能障碍有关,其低表达与重度生精功能不良的形成相关,其异常高表达与唯支持细胞综合征的形成有关。

中华地鼠雌性不孕症模型的建立及其评价

目的建立与人生长激素释放激素(GHRH)有93%同源性的中华地鼠不孕症模型,为研究新型人源性GHRH肽在治疗不孕症方面提供试验基础。方法 40只5周龄雌性中华地鼠,随机分为模型组[环磷酰胺组、尿促性素(h MG)组和新型GHRH组]和生理盐水组,每组10只。模型组每周1次腹腔注射环磷酰胺(20 mg/kg),连续5周。从第4周开始,h MG组、新型GHRH组分别后腿肌肉注射h MG(200 U/kg)、新型GHRH肽(8 mg/kg)验证模型,每周2次,连续6周。在实验6~8周,雌鼠模型与正常雄鼠1∶1同笼交配。在实验9~10周,交配鼠分开饲养。实验鼠每周称重1次。实验结束后,实验鼠脱颈处死,计数怀孕鼠,摘取卵巢做HE和TUNEL染色。结果各组实验鼠体重差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢HE染色,环磷酰胺组多见闭锁卵泡,少见原始卵泡和初级卵泡,未见黄体。h MG组和新型GHRH组有大量的原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡,并有黄体。TUNEL染色显示,环磷酰胺组的阳性细胞远远高于其他实验组(P<0.05,P<0.01)。环磷酰胺组总怀孕率为0,与新型GHRH组60%和h MG组50%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 20 mg/kg的环磷酰胺不会导致实验鼠体重明显改变,显示亲本动物对其子代发育和生长没有影响,该剂量环磷酰胺引起暂时性和可逆性动物不孕。