桥粒斑蛋白在肺动脉高压中对血管肺动脉平滑肌的功能研究

目的探究桥粒斑蛋白(DSP)在肺动脉高压(PH)大鼠模型与人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)的表达变化及其在PH发生、发展中的作用。方法24只SPF级别雄性SD大鼠运用随机数字表法随机分为正常对照(NC)组、野百合碱(MCT)组、低氧(HYP)组及低氧联合Sugen5416(SuHx)组,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)及右心室肥厚指数(RVHI),观察各组大鼠血管增厚程度;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠中肺组织中DSP的表达情况。体外培养hPASMCs,分别用转化生长因子β1(TGF-β1)或HYP处理细胞24、48、72 h,Western blot检测各组细胞中DSP表达情况。采用小分子siRNA DSP干扰序列及阴性对照序列分别转染hPASMCs,分为DSP干扰(siDSP)组及阴性对照(siNT)组。2组均进行TGF-β1、CoCl2或HYP处理48 h,Western blot检测增殖分化及凋亡相关蛋白[p-p38、增殖相关蛋白(PCNA)、抗凋亡蛋白(Bcl2)、促凋亡蛋白(Bax)]的表达情况,划痕实验检测细胞的迁移能力变化,EdU细胞增殖流式检测细胞增殖能力变化。结果MCT组、HYP组、SuHx组DSP表达量[(3.10±0.59)、(4.34±0.75)、(3.84±0.13)]较NC组(1.00±0.19)升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。TGF-β124 h组、HYP 72 h组hPASMCs的DSP蛋白表达分别较TGF-β10 h组及HYP 0 h组升高[(4.42±0.35)比(1.00±0.07)、(2.62±0.32)比(1.00±0.21)],差异均有统计学意义(P值均<0.01)。siDSP+TGF-β1组、siDSP+CoCl2组、siDSP+HYP组中hPASMCs的p-p38表达量较siNT+TGF-β1组、siNT+CoCl2组、siNT+HYP组升高[(2.14±0.20)比(1.00±0.14)、(1.66±0.09)比(1.00±0.12)、(3.03±0.22)比(1.00±0.50)],差异均有统计学意义(P值均<0.05)。siDSP+HYP组中hPASMCs的PCNA表达量较siNT+HYP组下降[(0.55±0.04)比(1.00±0.04)],差异有统计学意义(P值<0.05)。siDSP+TGF-β1组、siDSP+CoCl2组、siDSP+HYP组中hPASMCs的Bcl2/Bax比值较siNT+TGF-β1组、siNT+CoCl2组、siNT+HYP组下降[(0.85±0.06)比(1.00±0.04)、(0.73±0.08)比(1.00±0.07)、(0.72±0.01)比(1.00±0.05)],差异均有统计学意义(P值均<0.05)。siDSP+TGF-β1组hPASMCs的细胞迁移率较siNT+TGF-β1组减少[(27.56±2.44)%比(58.05±2.25)%],差异有统计学意义(t=9.20,P<0.001);siDSP+CoCl2组hPASMCs的细胞迁移率较siNT CoCl2组减少[(25.78±2.55)%比(47.30±2.10)%],差异有统计学意义(t=6.53,P<0.001)。siDSP+TGF-β1组hPASMCs的细胞增殖率较siNT+TGF-β1组减少[(6.07±0.23)%比(10.62±0.50)%],差异有统计学意义(t=8.29,P=0.001);siDSP+HYP组hPASMCs的细胞增殖率较siNT+HYP组减少[(2.84±0.46)%比(5.56±0.46)%],差异有统计学意义(t=4.17,P=0.014)。结论DSP能够促进hPASMCs的增殖和迁移,促进肺血管的重构,在PH的发生、发展起重要作用。