草酸钙晶体引起肾小管上皮细胞紧密连接损伤与TRPV5变化的调节机制

目的探讨草酸钙晶体黏附肾小管上皮引起紧密连接(TJs)损伤与TRPV5变化的调节机制。方法利用一水草酸钙晶体(COM)暴露犬肾小管上皮细胞(MDCK)及TRPV5稳定过表达HEK-293细胞,2 mmol/L EGTA处理构建细胞TJs损伤模型;采用Western blot、荧光免疫、偏光显微镜等手段,分别检测TJs主要结构蛋白、Na^+-K^+-ATPase、TRPV5、晶体黏附量等指标,评估草酸钙晶体引起肾小管上皮细胞TJs损伤及TRPV5表达的变化。结果 COM呈下调MDCK细胞TJs蛋白Occludin和ZO-1表达水平(P<0.01)。TJs损害后,COM黏附增加(P<0.05);Na^+-K^+-ATPase介导TJs修复,在1 min时表达最强,随着TJs修复完成而逐步减弱,晶体黏附力也逐渐减弱(P<0.01)。COM与TRPV5稳转HEK-293细胞株共培养,下调TRPV5总蛋白及膜蛋白表达水平(P<0.01)。结论草酸钙晶体引起肾小管上皮细胞之间的TJs受损,促进草酸钙晶体黏附;细胞极性破坏,TRPV5膜蛋白转运失调,最终引起TRPV5膜蛋白表达减少。尿钙增加,负反馈激发Na^+-K^+-ATPase表达使TJs进入修复环节;随着TJs的自我修复,草酸钙晶体黏附减少。