小鼠骨髓来源肥大细胞的诱导培养及功能鉴定

目的:探讨体外诱导培养小鼠骨髓细胞来源肥大细胞的方法,为体外组胺激发试验提供试材。方法:采用白细胞介素3(IL-3)和干细胞因子(SCF)联合刺激小鼠骨髓细胞4、6周诱导其分化为肥大细胞,光镜下观察细胞形态,甲苯胺蓝染色观察细胞成熟度,蛋白免疫印迹法分析表面FcεRⅠ和CD117表达情况,HistaReader 501组胺仪检测细胞脱颗粒能力。结果:诱导培养4、6周后的细胞为大小均一且具折光性的圆形悬浮细胞;甲苯胺蓝染色显示培养4、6周后的细胞胞核染为蓝色,胞质含有丰富的粗大紫红色颗粒,镜下统计成熟肥大细胞比例达85%以上;蛋白免疫印迹法分析发现培养4、6周后的细胞皆表达FcεRⅠ和CD117,其中培养6周的细胞FcεRⅠ表达水平更高;组胺仪检测培养6周的细胞发现,经浓度为100、500、1 000μmol·L-1的钙离子载体刺激后,与阴性对照组相比,细胞组胺释放量依次为3.86%、17.04%及23.47%(P<0.05),其脱颗粒具有钙离子载体浓度依赖性。结论:获得大量高纯度的小鼠骨髓来源肥大细胞,可促进后期的组胺激发试验及Ⅰ型变态反应机制研究。