目的构建害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)过敏原Lep d 2的原核表达系统,获得Lep d 2的重组纯化蛋白。方法通过双酶切pUC-Lep 2质粒,获取基因Lep d 2,并结合高保真PCR获取去信号肽基因rLep d 2,连接载体pET44a并转入表达菌株Rosetta...目的构建害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)过敏原Lep d 2的原核表达系统,获得Lep d 2的重组纯化蛋白。方法通过双酶切pUC-Lep 2质粒,获取基因Lep d 2,并结合高保真PCR获取去信号肽基因rLep d 2,连接载体pET44a并转入表达菌株Rosetta;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和蛋白免疫印迹法分别进行诱导表达与鉴定;用盐酸胍溶解包涵体并进行透析复性;使用Strep II亲和填料来纯化目的蛋白。结果构建了Rosetta-rLep d 2的原核表达体系;rLep d 2蛋白在菌体内主要表达形式为包涵体,通过透析复性和亲和纯化获得了高纯度的rLep d 2蛋白。结论获得的重组rLep d 2蛋白可为下一步评价其过敏原性提供研究材料。展开更多
文摘目的构建害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)过敏原Lep d 2的原核表达系统,获得Lep d 2的重组纯化蛋白。方法通过双酶切pUC-Lep 2质粒,获取基因Lep d 2,并结合高保真PCR获取去信号肽基因rLep d 2,连接载体pET44a并转入表达菌株Rosetta;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和蛋白免疫印迹法分别进行诱导表达与鉴定;用盐酸胍溶解包涵体并进行透析复性;使用Strep II亲和填料来纯化目的蛋白。结果构建了Rosetta-rLep d 2的原核表达体系;rLep d 2蛋白在菌体内主要表达形式为包涵体,通过透析复性和亲和纯化获得了高纯度的rLep d 2蛋白。结论获得的重组rLep d 2蛋白可为下一步评价其过敏原性提供研究材料。
