敲低mGluR5通过激活PI3K/AKT信号通路减轻阿尔茨海默病相关病变

目的:探讨敲低代谢型谷氨酸受体5(metabotropic gultamate receptor 5,mGluR5)对6月龄5xFAD小鼠β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)病变、突触结构和神经炎症的影响及其潜在机制。方法:选取2、6和12月龄的野生型(wild-type,WT)和5xFAD小鼠,用Western blot检测不同阶段小鼠海马组织中mGluR5蛋白的表达情况。取6月龄的WT、5xFAD、mGluR5^(+/-)和5xFAD/mGluR5^(+/-)小鼠脑组织,免疫荧光染色检测Aβ斑块的聚集,Western blot检测海马组织中淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)和p-APP蛋白水平,海马组织透射电子显微镜观察突触的超微结构,Western blot检测海马组织中突触蛋白、炎症因子和mGluR5下游磷脂酰肌醇3-激酶(phosphati⁃dylinositol 3-kinase,PI3K)/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:(1)随着月龄的增加,5xFAD小鼠海马组织中mGluR5的表达显著增加(P<0.01);(2)敲低mGluR5减少了5xFAD小鼠海马区Aβ斑块,降低了APP和p-APP蛋白水平(P<0.05);(3)敲低mGluR5减轻了5xFAD小鼠海马的突触结构损伤,5xFAD/mGluR5^(+/-)小鼠突触前标志物突触小泡蛋白(synaptophysin,SYP)和突触后标志物突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD95)表达显著高于5xFAD小鼠(P<0.05),而树突标志物微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)和神经元标志物神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)表达无显著差异;(4)敲低mGluR5可降低5xFAD小鼠的神经炎症反应,减少炎症因子的释放;(5)5xFAD小鼠敲低mGluR5可通过激活PI3K/AKT信号通路发挥神经保护作用,还通过抑制糖原合成酶激酶3β(glycogen synthetase kinase-3β,GSK-3β)/κB抑制因子激酶(inhibitor ofκB kinase,IKK)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)炎症信号通路减轻神经炎症反应。结论:敲低mGluR5可以减轻6月龄5xFAD小鼠的Aβ病变、突触结构损伤和神经炎症,其机制可能与PI3K/AKT及其下游GSK-3β/IKK/NF-κB信号通路有关。

分泌包载ANXA2-MS2 RNA外泌体的稳转细胞株的构建

目的:基于MCP-MS2示踪系统构建能稳定分泌含有标签的膜联蛋白A2(ANXA2)RNA的外泌体的供体细胞株。方法:利用慢病毒载体构建稳定表达MCP-EGFP的HEK293细胞株,采用流式细胞技术筛选具有较好荧光特性的单克隆细胞株。然后再次通过慢病毒稳定表达系统构建出能分泌结合有MCP-EGFP标记的ANXA2 RNA外泌体的供体细胞株。通过透射电镜、NTA、NanoFCM、共聚焦显微镜等仪器对供体细胞所产生的外泌体进行表征。结果:通过慢病毒载体成功构建了MCP-EGFP稳定表达细胞株,然后利用该细胞株通过慢病毒载体成功导入含有MS2标签的ANXA2基因。实验结果表明,构建的供体细胞与正常细胞所分泌的外泌体形态相似,实实施时荧光定量PCR的结果显示分泌的外泌体中含有MS2特殊序列,而同时Western blot的结果显示分泌的外泌体中含有EGFP蛋白。结论:通过慢病毒法成功建立了能分泌含有MS2标记的ANXA2 RNA的外泌体供体细胞株,为高效、稳定的装载特定RNA外泌体的供体细胞株的构建提供了新的方法和理论基础。

基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌的构建与应用

【背景】传统外源蛋白的原核表达通常需要以超声破碎或者酶解的方式破碎菌体,过程比较烦琐。【目的】构建基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌,以简化外源蛋白的获取流程。【方法】从MS2噬菌体中克隆lys基因,构建重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,以此构建质粒型条件自溶菌,通过生长曲线和菌落形成单位反映自溶菌裂解效率,利用SDS-PAGE检测外源蛋白释放情况。【结果】构建了pBAD-lysBL21(DE3)、pBAD-Opti-lys BL21(DE3)及pCDF-BAD-Opti-lys BL21(DE3)这3种质粒型条件自溶菌。以上自溶菌在阿拉伯糖诱导后其宿主裂解效率均为99.99%以上,CFU结果显示含pCDF-BAD-Opti-lys质粒的宿主裂解效果更优,在此自溶菌BL21(DE3)中表达含His标签的重组绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescent protein,eGFP),经阿拉伯糖诱导后菌体中约63.00%以上的eGFP释放至胞外,利用Ni-NTA可以直接从培养基中纯化得到约30 kDa的单一目的蛋白。【结论】基于MS2噬菌体lys基因成功构建了阿拉伯糖诱导的质粒型条件自溶菌,此自溶菌能够以自我裂解的方式释放大部分胞内外源蛋白,简化传统外源蛋白获取流程。

癌/睾丸抗原TEX14与侵袭转移性乳腺癌患者的预后

目的探讨癌/睾丸抗原TEX14与乳腺癌转移及患者预后的关系。方法利用Oncomine网站对目前已知的所有癌/睾丸抗原(CTAs)、促进乳腺癌转移基因AKT2、CD44、EIF4E、ERBB2及抑制乳腺癌转移基因BRMS1、CD82、KISS1、TIMP1在侵袭性和非侵袭性乳腺导管癌中m RNA表达情况进行筛查和分析。利用免疫组化方法检测乳腺癌组织标本的癌细胞TEX14蛋白表达情况。利用TCGA数据库1 102例乳腺癌样本mRNA高通量测序数据,分别对TEX14与多个乳腺癌转移相关基因mRNA表达量进行相关性分析。采用Kaplan-Meier生存曲线和Logrank检验法分析TEX14的表达与乳腺癌患者预后的关系。结果与非侵袭性乳腺导管癌相比,在侵袭性乳腺导管癌中,86个CTAs mRNA表达量升高,其中TEX14升高倍数最大为3.344倍(P<0.05);促进乳腺癌转移基因AKT2、CD44、EIF4E、ERBB2 mRNA表达量升高,且与TEX14的表达呈正相关(P<0.05);抑制乳腺癌转移基因BRMS1、CD82、KISS1、TIMP1 mRNA表达量降低,且与TEX14的表达呈负相关(P<0.05)。进一步利用免疫组化实验证明,与无转移组相比,有转移组乳腺癌细胞TEX14阳性细胞率升高1.5倍(P<0.05)。TEX14高表达组乳腺癌患者总生存期较低表达组明显缩短(P<0.05)。结论癌/睾丸抗原TEX14在侵袭转移性乳腺癌中高表达,与患者的不良预后相关,为进一步研究TEX14可促进乳腺癌转移提供了实验依据。

抗CD19嵌合抗原受体T细胞治疗复发难治性B细胞性淋巴瘤的研究进展

嵌合抗原受体（CAR）是一种结合了抗原识别区域和T细胞活化区域的融合蛋白。抗CDl9嵌合抗原受体T细胞（CD19-CAR—T细胞）可以识别并杀死CD19阳性靶细胞，在治疗CD19^＋B细胞性恶性肿瘤中获得了令人瞩目的疗效。

多发性骨髓瘤免疫抑制微环境的研究现状

随着近年来多种新药的临床应用,多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)患者的中位生存期明显延长,但MM仍然无法治愈。越来越多的证据表明免疫抑制微环境能为MM细胞提供庇护所,促进MM进展。其中多种免疫细胞共同参与MM免疫抑制微环境的形成,如肿瘤相关巨噬细胞、髓源性抑制细胞、破骨细胞、调节性T细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞等,促进MM细胞免疫逃逸。本文就参与介导MM免疫抑制微环境的免疫细胞及可能的机制进行总结,以期为纠正MM免疫抑制微环境及探索新的治疗策略提供启发。