基于生物信息学分析MBD1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:通过生信在线数据库分析MBD1在肝细胞癌(LIHC)中的表达及临床意义。方法:通过TIMER2.0、UALCAN、HPA、LinkedOmics数据库分析LIHC和正常肝脏组织中MBD1基因的表达水平及与患者预后的关系,并分析共表达基因和对KEGG信号通路进行富集分析。结果:MBD1在LIHC(371例)中的表达高于正常组织(50例);随着临床分期的升高,MBD1表达呈上升趋势;并且MBD1在TP53突变中表达水平较高(P<0.05)。生存分析提示,MBD1高表达的LIHC患者生存率显著降低(P<0.05)。共表达分析显示,共有6196个基因与MBD1表达呈显著正相关(P<0.05),正相关性最高的基因为PIAS2,相关系数为0.589;1946个基因与MBD1表达呈显著负相关(P<0.05),负相关性最高的是HEBP2,相关系数是-0.328。KEGG结果表明,MBD1可能与细胞周期、泛素介导的蛋白水解、核糖核酸转运、病毒性致癌等信号通路相关。结论:LIHC组织中MBD1表达增高,MBD1表达升高的LIHC患者预后较差,其可能成为LIHC治疗的新靶点。

蛋白质精氨酸甲基转移酶1在糖尿病小鼠肠屏障功能障碍中的作用

目的:探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltransferase 1,PRMT1)通过沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome pro‐liferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)信号通路对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)小鼠肠屏障功能损伤的作用。方法:20只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=5)和实验组(n=15);将采用链脲佐菌素和高脂饮食构建T2DM小鼠模型的实验组,随机分为T2DM组、T2DM+PRMT1抑制剂AMI-1(arginine methyl‐transferase inhibitor 1)组和T2DM+白藜芦醇(resveratrol,Resv)组,每组5只。将对数生长期的人结肠上皮NCM-460细胞分为对照组、高糖(HG;50 mmol/L葡萄糖)组、HG+AMI-1组和HG+Resv组。采用PRMT1小干扰RNA(PRMT1-siRNA)和正常对照siRNA(non-targeting siRNA,NT-siRNA)转染NCM-460细胞后,HG处理48 h,分为NT-siRNA组、NT-siRNA+HG组、PRMT1-siRNA组和PRMT1-siRNA+HG组。采用口服葡萄糖耐量试验检测血糖;总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)测定试剂盒(COD-PAP法和GPO-PAP法)以及高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)检测试剂盒(微板法)检测血清TC、TG和HDL-C水平;异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)-葡聚糖法检测肠道通透性;Western blot法检测结肠组织和NCM-460细胞PRMT1、SIRT1、PGC-1α、ZO-1(zonula occludens-1)和occludin的表达。结果:与正常对照组相比,T2DM组模型小鼠血清葡萄糖、TG和TC水平升高,HDL-C水平降低,血清FITC-葡聚糖水平升高,结肠组织中PRMT1蛋白表达升高,SIRT1和PGC-1α及ZO-1蛋白表达均下降(P<0.05);与T2DM组模型小鼠相比,T2DM+AMI-1和T2DM+Resv组中小鼠的结肠长度均增加,血清FITC-葡聚糖水平降低,结肠组织中PRMT1蛋白表达降低,ZO-1、occludin和SIRT1及PGC-1α蛋白表达上升(P<0.05)。与对照组相比,HG处理后NCM-460细胞中PRMT1蛋白表达升高,SIRT1、PGC-1α和ZO-1及occludin蛋白表达下降(P<0.05);与HG组相比,HG+AMI-1组和HG+Resv组细胞中PRMT1蛋白表达降低,SIRT1、PGC-1α和ZO-1及occludin蛋白表达升高(P<0.05);与NT-siRNA组相比,NT-siRNA+HG组NCM-460细胞的PRMT1蛋白表达上升,SIRT1、PGC-1α和ZO-1及occludin蛋白表达均显著降低(P<0.05);与PRMT1-siRNA组相比,PRMT1-siRNA+HG组的SIRT1、PGC-1α和ZO-1及occludin蛋白表达并未发生改变。结论:PRMT1可能通过抑制SIRT1/PGC-1α信号通路损伤T2DM小鼠肠屏障功能。

高盐饮食激活肠JAK1/STAT3通路诱导肠上皮屏障功能障碍

目的探讨高盐饮食在肠道屏障功能中的作用机制与Janus激酶1和转录激活因子3(Janus kinase1⁃signal transducer and activator of transcription 3,JAK1⁃STAT3)信号通路激活的关系。方法将8周的SPF级C57BL/6小鼠随机分成正常饮食对照组(control)和高盐饮食组(high salt diet,HSD)。正常饮食对照组喂养普通饲料,高盐饮食组采用NaCl含量为8%的饲料喂养12周,收集两组小鼠肠道组织,检测屏障蛋白及JAK1/STAT3通路;将人正常结肠上皮细胞NCM⁃460细胞分组如下:(1)正常对照组(control);(2)高浓度NaCl处理组(high NaCl,50 mmol/L),处理时间均为48 h;(3)JAK1抑制剂Ruxolitinib治疗组(high NaCl+Ruxoli⁃tinib),用Ruxolitinib(50μmol/L)预处理2 h,再用NaCl(50 mmol/L)共孵育46 h,通过Western blot法检测细胞屏障蛋白及JAK1/STAT3通路蛋白变化。结果高盐饮食不仅降低小鼠体重、结直肠重和肠长度,还抑制肠屏障蛋白ZO⁃1的相对表达,并上调肠道JAK1磷酸化蛋白;细胞实验中,JAK1抑制剂Ruxolitinib可抵抗由高浓度NaCl诱导的肠屏障功能障碍。结论高盐饮食可能通过激活JAK1/STAT3信号而诱导肠屏障功能障碍。

柔嫩梭菌灌胃的高盐饮食小鼠血清炎症因子及粪便肠道菌群、短链脂肪酸水平观察

目的观察柔嫩梭菌灌胃的高盐饮食小鼠血清炎症因子及粪便中肠道菌群、短链脂肪酸水平变化。方法将16只C57BL/6雄性小鼠随机分为实验组和对照组,两组均给予含8%NaCl的高盐饲料喂养共16周;实验组同时以柔嫩梭菌菌体悬液(109 CFU/mL)2 mL每隔1 d灌胃,对照组以超纯水2 mL每隔1 d灌胃。采用ELISA法检测血清白细胞介素(IL)1B、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α);采集小鼠新鲜粪便样本,提取细菌总RNA进行16S rDNA高通量测序,检测肠道菌群,并进行短链脂肪酸定量检测。结果实验组血清IL-1B、IL-6、TNF-α水平低于对照组(P均<0.05)。肠道菌群α多样性与β多样性分析结果显示,实验组肠道菌群结构和多样性较对照组发生明显变化。与对照组相比,实验组拟杆菌门及变形菌门相对丰度增加,而厚壁菌门及疣微菌门相对丰度减少(P均<0.05);实验组鼠乳杆菌显著富集,对照组机会致病菌木糖葡萄球菌、迟缓葡萄球菌显著富集。实验组粪便中丙酸、丁酸、己酸水平高于对照组(P均<0.05)。结论柔嫩梭菌灌胃可降低高盐饮食小鼠血清炎症因子水平,改变肠道菌群结构并影响短链脂肪酸代谢。

非对称性二甲基精氨酸通过激活铁死亡促进小鼠早期肾损伤

目的:探讨内源性一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制物非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)是否通过诱导细胞铁死亡促进小鼠早期肾损伤。方法:将16只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=8)和实验组(n=8),实验组小鼠正常饮食,每天灌胃给予小鼠ADMA(60 mg·kg^(-1)·d^(-1)),对照组小鼠正常饮食,每天灌胃给予等体积的生理盐水,实验周期为16周。采用口服葡萄糖耐量和胰岛素耐受实验检测血糖代谢;总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)测定试剂盒(COD-PAP法和GPO-PAP法)以及高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)检测试剂盒(微板法)检测血清TC、TG和HDL-C水平;HE染色法观察肾组织的形态变化;ELISA法检测血清中ADMA及肾组织炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β含量;比色法检测肾组织的铁含量、脂质过氧化产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量;通过WST-8法测定肾组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western blot法检测肾组织中内皮型NOS(endothelial NOS,eNOS)、诱导型NOS(inducible NOS,iNOS)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、Bcl2、Bax和caspase-1的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,ADMA处理组小鼠出现糖耐受和胰岛素耐受,血清TG和TC水平升高(P<0.01),HDL-C水平降低(P<0.05),即糖脂代谢异常。同时,ADMA直接诱导小鼠发生类似于慢性肾病(CKD)的早期肾损伤,如肾小球肥大、系膜细胞肥大和BUN增多(P<0.01)、促炎因子IL-6和IL-1β含量显著增多(P<0.01)等。此外,ADMA处理组小鼠肾组织的ADMA含量增多(P<0.01),eNOS蛋白表达和总NO含量降低,但iNOS蛋白表达水平则显著升高(P<0.01);同时还观察到肾脏组织铁超载,脂质过氧化产物MDA增多,抗氧化酶SOD活性和GPX4蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl2蛋白表达水平降低,Bax和caspase-1蛋白表达水平升高。结论:ADMA可能通过激活铁死亡促进小鼠早期肾损伤。

急性心肌梗死患者肠道菌群变化与甲状腺功能指标的关系

目的 分析不同促甲状腺素(thyroid stimulating hormone, TSH)水平的急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)患者肠道菌群差异,探讨高水平TSH的AMI患者肠道菌群特征。方法 纳入2022年1月至2022年5月于华中科技大学协和深圳医院就诊的AMI患者,根据TSH水平,AMI患者被分为高TSH组和低TSH组,对所有参与对象进行常规临床生化指标检测。收集两组患者新鲜粪便标本,应用16S rDNA测序分析其肠道菌群结构特点。结果 高TSH组TT4、FT4水平较低TSH组明显降低(P<0.05),高TSH组的肠道菌群整体结构及多样性发生显著变化。对两组患者肠道菌群门水平分布研究显示,高TSH组变形菌门的比例减少,拟杆菌门、放线菌门的比例增加,但无统计学差异(P>0.05)。两组患者肠道菌群种水平分布显示,高TSH组砂眼披衣菌、双胞普氏菌等有害菌丰富度明显升高,而益生菌如鼠乳杆菌丰富度明显减少(P<0.05)。所有患者甲状腺功能指标与肠道菌群种水平的相关性分析发现,TT4、FT4与长双歧杆菌相对丰度显著正相关(P<0.05),其可能是AMI患者不良预后的标志菌。结论 正常范围内高TSH水平的急性心肌梗死患者肠道菌群结构发生明显变化,提示TSH影响急性心肌梗死病情严重程度可能与肠道菌群紊乱具有相关性,其中作用机制有待于进一步研究。

B淋巴细胞瘤-2抑制剂的研究进展

B淋巴细胞瘤(B cell lymphoma,Bcl)-2基因主要表达于线粒体外膜,是凋亡信号转导通路中的主要调节因子,其异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关。Bcl-2蛋白由Bcl-2基因编码而来,通过蛋白间相互作用调控细胞凋亡,已成为治疗慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)的重要靶点。Bcl-2抑制剂大部分为小分子化合物,基于片段的药物设计方法模拟Bcl-2蛋白的BH3结构域,推动Bcl-2抑制剂的研发。目前已上市的Bcl-2靶向抑制剂维奈克拉(venetoclax)能够有效治疗CLL和小淋巴细胞性白血病,对B淋巴细胞恶性肿瘤表现出较好的临床疗效,其他已进入临床研究的Bcl-2抑制剂也显示出较好的开发前景。现对Bcl-2的作用机制作简要综述,并总结近年Bcl-2抑制剂的研究进展,为其进一步研发提供启示。

探索m6A相关lncRNAs预测胃腺癌患者总体生存率

目的:胃腺癌是胃癌最常见的亚型。N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)和长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)在胃腺癌的预后价值中起着至关重要的作用。因此,辨别与m6A相关的lncRNA在胃腺癌研究中至关重要。方法:本研究从TCGA数据库中获取了胃腺癌研究的RNA序列转录组数据、相关临床信息。使用R语言的“limma”包对15 901个lncRNAs按肿瘤组织和正常组织分组进行差异表达分析。采用单因素Cox回归分析从TCGA数据集中的347个与m6A相关lncRNAs中筛选出与预后相关的基因67个(P <0.05)。使用R包“glmnet”对67个入选lncRNAs进行LASSO Cox回归分析,确定12个m6A相关的lncRNAs与胃腺癌患者的总生存期明显相关,并采用多因素Cox回归分析建立起m6A相关的lncRNAs风险评分模型。单因素和多因素回归分析结果表明风险评分模型是患者预后的独立影响因素(HR=3.45,95%CI为2.46~4.99,P <0.001)。分析风险评分与肿瘤免疫微环境细胞浸润的关系。最后,基于独立的预后影响因素(年龄、性别、风险评分、T分期、N分期)建立列线图。结果:确定12个m6A相关的lncRNAs与胃腺癌患者的总生存期明显相关,建立起m6A相关的lncRNAs风险评分模型。并证明该模型与肿瘤微环境细胞浸润存在相关性。基于独立的预后影响因素建立列线图,模型的C-index为0.73,模型预测有效性较高。结论:通过对lncRNAs风险模型的反复验证,证实了12个m6A相关lncRNAs可以作为胃腺癌患者风险预测的指标。

冻存人脐带间充质干细胞的成软骨分化

目的:研究从冻存人脐带组织中分离培养的脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的成软骨分化能力。方法:从冻存人脐带组织中分离培养的hUC-MSCs分为诱导组与对照组,分别采用成软骨诱导分化完全培养基和常规培养基培养7 d。采用实时荧光定量(qRT)-PCR法检测干细胞中成软骨标志物ColⅡa1、ColⅩa1和蛋白聚糖mRNA的表达,免疫印迹及免疫荧光染色检测干细胞Ⅱ型胶原蛋白的表达,阿尔新蓝染色检测干细胞中氨基聚糖含量。结果:hUC-MSCs成软骨诱导分化7 d后,与对照组比较,干细胞中ColⅡa1、ColⅩa1和蛋白聚糖mRNA的表达均上升,Ⅱ型胶原蛋白的表达上升,氨基聚糖含量升高(均 P<0.05)。 结论:从冻存人脐带组织中分离培养的hUC-MSCs采用成软骨诱导分化完全培养基培养7 d后可分化为成软骨细胞,可用于软骨疾病的实验研究和临床治疗。

分子靶向药物治疗转移性肾细胞癌的疗效评价

探讨在转移性肾细胞癌患者治疗中,分子靶向药物的临床效果。方法 选取本单位及合作单位广东省人民医院接诊转移性肾细胞癌患者64例,根据入组顺序分为对照组与观察组,各组各有患者32例,分别给予白细胞介素—2(IL—2)+重组人干扰素α—2b(IFNα—2b)与舒尼替尼,对比两组患者症状变化与临床效果。结果 观察组临床总有效率、生活质量评分均优于对照组,且不良反应发生率更低(P<0.05)。结论 在转移性肾细胞癌患者治疗中,分子靶向药物可有效改善症状,不良反应较低,优化预后,值得广泛推广运用。

建立UPLC-Orbitrap MS法检测人血浆中卡马西平浓度

目的建立UPLC-Orbitrap MS法检测人血浆中卡马西平浓度。方法采用UPLC-Orbitrap MS法,以氯雷他定为内标,Accucore C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm)为分析柱,流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为含0.1%甲酸乙腈溶液,流速0.35mL·min^(-1),采用加热电喷雾离子源(HESI),以平行反应监测(PRM)正离子模式进行分析,检测待测物卡马西平浓度。结果本方法中卡马西平的标准曲线范围为5~1000 ng·mL^(-1),线性关系良好(R^(2)>0.99),定量下限为5 ng·mL^(-1)。批内和批间精密度、准确度、提取回收率、基质效应均符合标准。结论本方法准确且稳定,具有较高的灵敏度,适用于卡马西平的药动学检测分析及实验室能力验证。