δ-榄香烯通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对肿瘤细胞增殖的影响;ELISA法定量检测细胞DNA片段化;Annexin-VFITC/PI流式细胞术检测细胞PS外翻的影响;用Westernblot分析药物对蛋白质表达的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖。DNA核小体的检测、细胞PS外翻证实δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的;Bax蛋白转入线粒体内,细胞色素C的释放以及凋亡因子AIF从线粒体释放入胞质,δ-榄香烯激活caspase信号通路,引起pro-caspase-3蛋白水解为caspase-3,进一步发生PARP底物的断裂。结论δ-榄香烯通过线粒体途径诱导DLD-1细胞发生凋亡。

落新妇苷固体分散体的处方工艺及稳定性研究

目的采用固体分散技术,提高落新妇苷的溶解度及体外溶出速率,并对影响落新妇苷固体分散体质量稳定性的因素进行研究。方法对固体分散体制备方法、不同的载体、药物与载体间不同比例进行了考察。采用HPLC法检测落新妇苷含量,考察温度、湿度及光照对自制落新妇苷固体分散体的影响。结果落新妇苷固体分散体能显著改善落新妇苷的溶出效果和溶解度,高温能降低落新妇苷固体分散体中落新妇苷的含量,而强光、湿度未影响落新妇苷固体分散体中落新妇苷的含量。结论落新妇苷-吐温80-PVP K30比例为1:1.5:3,采用溶剂法制备落新妇苷固体分散体,自制落新妇苷固体分散体可常温保存。

LC-MS/MS法测定坦索罗辛在比格犬血浆中的浓度及其缓释制剂的药动学研究

目的:建立坦索罗辛血药浓度LC-MS/MS测定方法,并研究坦索罗辛缓释制剂在比格犬体内的药代动力学。方法:6只比格犬空腹单次口服给予含有0.4 mg的盐酸坦索罗辛缓释胶囊,给药前(0 h)、给药后不同时间点各采血0.3 mL,分离血浆后,加入内标愈创木酚甘油醚,经乙酸乙酯萃取,以甲醇:水:甲酸(80∶20∶0.2,V/V/V)为流动相,在反相C18色谱柱进行分离。采用电喷雾离子源(ESI源)的正离子方式检测,扫描方式为选择反应监测(SRM),用于定量分析的离子反应为m/z409.0→m/z228.0(坦索罗辛)和m/z199.0→m/z125.0(内标,愈创木酚甘油醚)。结果:坦索罗辛在线性范围内0.05～10.0 ng/mL线性良好,定量下限为0.05 ng/mL,批内、批间精密度(RSD)均小于13.4%。盐酸坦索罗辛缓释制剂0.4 mg口服给药后AUC0-24 h为(7.82±1.92)ng.h.mL-1、AUC0-∞为(8.04±2.02)ng.h.mL-1t、1/2为(2.96±2.13)h。结论:LC-MS/MS法灵敏度高、分析快速,适用于比格犬血浆中坦索罗辛的药动学研究,坦索罗辛缓释胶囊口服给药后半衰期短,消除快。

活性氧在δ-榄香烯诱导人结肠腺癌DLD-1细胞凋亡中的作用研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠腺癌DLD-1细胞凋亡的机制以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)在δ-榄香烯诱导人结肠腺癌细胞DLD-1凋亡中的作用。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对人结肠腺癌DLD-1细胞和人正常肝胚胎WRL-68细胞增殖的影响;采用氯甲基二氯荧光素二乙酸酯(CM-H2DCFDA)定量检测凋亡过程中ROS的变化;流式细胞术JC-1标记检测凋亡细胞中线粒体膜电位(Δφm)的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖,对WRL-68细胞的细胞毒作用不明显。200μM的δ-榄香烯作用DLD-1细胞1小时、3小时和6小时所引起的ROS含量的增加,分别接近空白对照组的7.8倍、18.2倍和21.8倍;这种作用可以被谷胱甘肽(glu-tathione,GSH)(ROS的清除剂)显著性抑制,即加入GSH后δ-榄香烯对ROS生成率(3.46%)与空白对照(2.11%)相比无显著性差异。流式细胞仪检测结果表明,线粒体膜电位(Dφm)的降低呈时间依赖性,6小时、12小时、24小时线粒体膜电位降低量分别是空白组的(2.24±0.12)倍,(2.85±0.33)倍,(5.11±0.24)倍。结论Δφm的降低表明δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的,且其凋亡过程提示可能与ROS的生成增加相关。

中药百合HPLC指纹图谱研究

目的建立中药百合的HPLC指纹图谱。方法收集产地湖南的百合11批,用80%乙醇水浴回流提取1 h,高效液相法测定指纹图谱,试验以薯蓣皂苷为对照品。乙腈-0.5%H3PO4二元梯度洗脱,体积流量1 mL/min;柱温为室温;检测波长为205 nm。采用相似度软件(2004药典版)对百合药材指纹图谱进行相似度分析。结果 11批百合药材指纹图谱共确立了13个共有峰,批之间的相似度均在0.9～1.0之间。结论该方法可较全面的反映百合的化学成分,为百合药材的质量控制提供了有效的方法。

鸡血藤化学成分研究

目的研究密花豆Spatholobus suberectus Dunn藤茎的化学成分。方法采用色谱技术进行分离纯化,波谱技术分析结构。结果从鸡血藤中分离得到4个化合物,鉴定其结构分别为:表儿茶素(epicatechin)、芒柄花苷(Ononin)、染料木苷(genistin)、羊红膻醇thellungianol。结论染料木苷(genistin)为首次在鸡血藤中发现,羊红膻醇thellungianol为首次在本科植物中发现。

中草药复方的抗氧化与改善皮肤水分的作用研究

目的:观察由杭白菊、珍珠粉、当归、胶原蛋白组成的中草药复方的抗氧化与保湿作用。方法:采用裸小鼠皮下注射D-半乳糖建立亚急性衰老模型,昆明小鼠建立黄褐斑模型,观察中草药复方的抗氧化与改善皮肤水分的作用。结果:中草药复方(26.4g生药/kg)能改善D-半乳糖衰老模型造成的皮肤水分减少,增加皮肤超氧化歧化酶(SOD)、1型胶原蛋白、羟脯氨酸;减少皮肤中丙二醛(MDA)的生成。中草药复方(26.4g生药/kg)能增加黄褐斑小鼠肝脏的GSH-Px、SOD,减少肝脏脂褐质、MDA、酪氯酸酶;增加皮肤中的GSH-Px、NO;中草药复方各剂量组对皮肤酪氯酸酶、透明质酸及血液流变学各参数无显著影响。结论:由杭白菊、珍珠粉、当归、胶原蛋白组成的中草药复方,具有一定的促进皮肤抗氧化及保湿的作用。

盐酸文拉法辛缓释胶囊的中试放大试验与体外释放特性研究

目的采用流化床制备盐酸文拉法辛缓释胶囊,并进行中试放大研究和考察体外释放特性,为建立缓释制剂质量控制、研发及中试平台奠定基础。方法采用流化床批量递增设计,以质量分数、收率、效率考察中试放大工艺,以不同释放条件(介质、方法、转速)探讨体外释药机理。结果调整好参数,特别是控制包衣区温度、隔圈内风速、雾化液滴大小,在制备规模放大过程中尽量相近,可以将小试工艺顺利放大到中试;不同的释放介质、释放方法、转速对盐酸文拉法辛缓释胶囊释放度基本没有影响,体外释药符合一级释放模型。结论小试工艺可顺利放大到中试,为进一步大生产奠定基础。

复方非伪调释胶囊的制备及流化床中试放大研究

目的采用流化床包敷/包衣法制备复方盐酸非索非那定/盐酸伪麻黄碱调释胶囊并进行流化床中试放大研究,为建立复方药物异步释放的24 h调释小丸研发和中试技术平台奠定基础。方法采用流化床批量递增设计以含量、收率、效率为主要考察因素,以溶出度和释放曲线作为评价指标,考察中试放大工艺。结果在包衣区温度和风速、雾化液滴大小相近的前提下,调整其他参数,可以将小试工艺顺利放大到中试。结论流化床包敷/包衣法制备复方非索伪麻调释胶囊的小试工艺可顺利放大到中试,为进一步扩大生产奠定了基础。

鸡血藤与阿胶升白细胞作用的比较研究

目的比较鸡血藤有效部位与阿胶升白细胞的功效。方法采用环磷酰胺(100 mg/kg)单次皮下注射的方法制备大鼠白细胞低下模型,在给予鸡血藤有效部位和阿胶后第7,9,11天,分别采集各组大鼠的血液,测定白细胞总数及分类。结果鸡血藤有效部位高、中剂量组(12.15,4.05 g/kg)具有明显的升白细胞作用,阿胶高、低剂量组(7.29,2.43 g/kg)亦有明显的升白细胞作用,两药临床等效量的对应倍数的剂量组之间白细胞数无统计学意义。结论鸡血藤有效部位与阿胶均有明显的对抗化疗药物引起的白细胞降低的功效,且作用强度相当。

地塞米松致胃肠机能紊乱的动物实验研究

目的建立地塞米松致大、小鼠胃肠道功能紊乱的疾病模型。方法以地塞米松ig、sc给药,采用不同给药剂量进行分组实验,观察地塞米松对大鼠胃分泌功能及对小鼠胃肠运动功能的影响,确定建立该模型地塞米松的给药剂量及给药途径,根据模型研究结果选择知柏地黄丸和三九胃泰抑制地塞米松导致的胃肠功能紊乱的试验研究。结果与正常组相比,各组动物ig、sc给予地塞米松后出现小鼠胃肠运动被抑制,大鼠胃蛋白酶活力增加、胃液pH降低、胃壁结合黏液量降低,同时三九胃泰能有效抑制地塞米松导致的胃肠功能紊乱。结论大鼠以地塞米松1.2 mg.kg-1连续灌胃8 d,小鼠以1.0 mg.kg-1连续灌胃5 d,可以建立较为理想的致胃肠道功能紊乱的模型,三九胃泰能有效抑制地塞米松导致的胃肠功能紊乱。

大孔吸附树脂富集纯化鸡血藤总黄酮的研究

目的:研究不同类型吸附树脂对鸡血藤中黄酮的吸附特性。方法:测试了6种树脂对鸡血藤总黄酮的吸附率、吸附速率、解吸率和产物得率及其黄酮含量。结果:HPD 400树脂对鸡血藤总黄酮吸附量大、吸附快、解吸容易,吸附后产物黄酮含量高。结论:HPD 400、AB-8弱极性树脂是性能良好的鸡血藤总黄酮吸附剂,可用于从鸡血藤提取物中富集总黄酮,制备含量达50%以上的总黄酮,为鸡血藤中总黄酮的开发提供新工艺。

格列本脲对GK大鼠心肌的保护作用实验研究

糖尿病心肌病（diabetic cardiomyopathy,DCM）指由糖尿病引起心脏微血管病变、心肌代谢紊乱和心肌纤维化等所致的心肌广泛结构异常的一种疾病状态。近年来的研究发现,血管紧张素（Ang-Ⅱ）增多、游离脂肪酸（IFFA）在DCM的发病中起着重要的作用。

太白贝母祛痰实验研究

目的:研究太白贝母的祛痰作用,并与暗紫贝母和梭砂贝母进行比较。方法:采用小鼠气管苯酚红排泌法考察太白贝母、暗紫贝母和梭砂贝母的祛痰作用。结果:太白贝母、暗紫贝母和梭砂贝母均能显著促进小鼠气管酚红的排泌量。太白贝母与梭砂贝母促进小鼠气管酚红排泌的作用相近,但均比暗紫贝母弱。结论:太白贝母、暗紫贝母和梭砂贝母均具有良好的祛痰作用,暗紫贝母的祛痰作用最强,太白贝母与梭砂贝母祛痰作用相近,是一种值得开发利用的川贝母。

一类创新药苯胺洛芬注射液急性毒性研究

目的研究一类创新药苯胺洛芬的急性毒性,并与日本同类上市产品联苯乙酸乙酯注射液的急性毒性实验结果进行比较,为新药研发提供依据。方法选用NIH小鼠和Beagle犬为研究对象,采用最大耐受量法和近似致死量法考察一类创新药苯胺洛芬的急性毒性情况。结果苯胺洛芬NIH小鼠静脉注射给药最大耐受量为900 mg/kg,Beagle犬静脉滴注给药的近似致死剂量范围为405～608mg/kg(均以联苯乙酸计);联苯乙酸乙酯小鼠LD50分别为雄性337 mg/kg(294.5～347.4),雌性433 mg/kg(392.3～462.9);Beagle犬静脉滴注近似致死量为250～500 mg/kg(均以联苯乙酸计)。结论与联苯乙酸乙酯注射液相比,一类创新药苯胺洛芬注射液的安全性较好,安全范围较大,具有较好的应用前景。

落新妇苷固体分散体的制备及理化鉴别

目的:制备落新妇苷(从土茯苓中萃取)固体分散体,并对其进行物相鉴别。方法:以PVPK30-吐温80为联合载体,采用溶剂法制备落新妇苷固体分散体,利用体外溶出度、溶解度、油水分配系数、显微观察、X-射线衍射、差热分析研究固体分散体的性质。结果:固体分散体能显著增加落新妇苷的溶解度和溶出速率,显著改变油/水分配系数,显微观察、X-射线衍射、差热分析研究表明落新妇苷在固体分散体中以分子状态、微晶状态分散。结论:固体分散体均能显著提高落新妇苷的体外溶出度及亲脂性,提示将落新妇苷制备成固体分散体可以促进药物的体内吸收。

H3N2亚型犬流感病毒重组HA1蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立一种H3N2亚型犬流感病毒(CIV)血清学检测方法,本研究利用CIV重组HA1蛋白作为检测抗原,建立H3N2亚型CIV抗体的间接ELISA检测方法,并优化反应条件。通过检测阴性血清样本30份确定其临界值为0.228。该方法与抗猪流感病毒H1N1、H1N2、H6N6、H9N2的阳性血清和犬瘟热病、犬细小病、犬副流感的阳性血清均无交叉反应。变异系数在1.01%～7.52%之间,具有较好的重复性。通过对150份临床样品进行检测并与血凝抑制试验检测结果比较,总符合率为98.6%。本研究为CIV流行病学调查提供了一种快速、方便、敏感的抗体检测方法。

糖尿病足从瘀论治的探讨

糖尿病足病是糖尿病慢性并发症中常见病之一,与周围血管病和周围神经病变有关,也是糖尿病人致残的主要原因。瘀血致糖尿病足的发病机理,不仅从中医理论上得到很好的解释,而且从现代医学微循环研究角度亦可以得到确认。瘀血不只是糖尿病足的一个病理产物,同时也是糖尿病足并发感染及加重的一个重要因素,从瘀血探讨糖尿病足的病因病机和辨证治疗具有重要意义。

知母提取物对地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的影响

目的探讨知母提取物对地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的影响。方法通过建立地塞米松诱发的大小鼠胃肠道机能紊乱动物模型,检测大鼠胃液量、胃液pH值、胃蛋白酶活力及胃壁结合黏液量和小鼠肠推进率及胃内色素残留率等指标考察知母提取物的药理作用。结果知母提取物能显著减轻地塞米松所致小鼠胃排空运动减缓,使给予地塞米松造模的大鼠胃液pH值显著增加,胃蛋白酶活力明显降低,胃壁结合黏液量也有明显增加趋势。结论知母提取物具有改善地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的作用。