Clostridium difficile细胞毒素B羧基末端功能区的克隆与表达

目的:克隆并表达Clostridiumdifficile(Cdifficile)胞毒素B羧基末端功能区基因,为探索高效的防治Cdifficile感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.方法:提取Cdifficile染色体基因,用PCR方法扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体PET22b(+),用重组质粒转化大肠杆菌[E.coliBL21(DE3)],并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析.结果:从Cdifficile基因组DNA中成功地克隆了毒素B的羧基末端重复区域的1848bp基因,经过双酶切、PCR和测序鉴定分析,插入到载体的基因与GenBank中公布的CdifficileVPI10463的ToxinB3基因序列的同源性为99%.SDS-PAGE显示,目的基因表达产物的分子质量为71.3ku,利用表达载体PET22b(+)表达出蛋白质,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%.结论:含CdifficileToxinB3基因的PET22b(+)重组质粒能高效表达目的基因.该重组子的构建为Clostridiumdifficile相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障.